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1、冻干甲型肝炎减毒活疫苗冻干甲型肝炎减毒活疫苗 Donggan Jianxing Ganyan Jiandu Huoyimiao Hepatitis A Vaccine（Live），Freeze-dried本品系用甲型肝炎 (简称甲肝) 病毒减毒株接种人二倍体细胞，经培养、 收获、提纯病毒、加入适宜稳定剂后冻干制成，用于预防甲型肝炎。 1 1 基本要求基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物、等应符合“凡例” 有关要求。 2 2 制造制造2. 1 生产用细胞 生产用细胞为人二倍体细胞（2BS 株、 KMB17株或其他批准的细胞株）。 2. 1. 1 细胞库管理及检定 应符合“生物
2、制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。 取自同批工作细胞库的 1 支或多支细胞管, 经复苏扩增后的细胞仅用于一 批疫苗的生产。 2BS 株原始细胞库细胞代次应不超过第 14 代，主细胞库细胞代次应不超过 第 31 代， 工作细胞库细胞代次应不超过第 44 代。KMB17株原始细胞库细胞代 次应不超过第 6 代，主细胞库细胞代次应不超过第 15 代，工作细胞库细胞代 次应不超过第 45 代；2. 1. 2 细胞制备 取工作细胞库中的 1 支或多支细胞管，复苏后混合培养，成单层后，用适 宜浓度的胰蛋白酶消化，置 370.5静置或旋转培养。 2. 2 毒种 2. 2. 1 名称及来源生产
3、用毒种为甲型肝炎病毒 H2或 LA1 减毒株。 2. 2. 2 种子批的建立 应符合“生物制品生产和检定用菌毒种管理规程”规定。 H2减毒株原始种子批传代应不超过第 7 代，主种子批应不超过第 8 代，工 作种子批应不超过第 14 代，生产的疫苗病毒代次应不超过第 15 代；LA1 株原始种子批传代应不超过第 17 代，主种子批应不超过第 18 代，工作种子批 应不超过第 26 代，生产的疫苗病毒代次应不超过第 27 代。 2. 2. 3 种子批检定 主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行 2.2.3.1-2.2.3.4 项检定。 2. 2. 3. 1 鉴别试验 用甲型肝炎病毒特异高
4、效价免疫血清与 5001000CCID50ml 甲型肝炎病毒 等量混合，置 37水浴 60 分钟，接种人二倍体细胞，置 35培养至病毒增殖 高峰期，提取甲型肝炎病毒后用酶联免疫法测定，经中和的培养物检测结果应为阴性（证明甲型肝炎病毒应完全中和）， 未经中和的病毒液检测结果应为阳 性（应证明为甲型肝炎病毒）。 2. 2. 3. 2 病毒滴定 将毒种作 10 倍系列稀释，取至少 3 个稀释度， 分别接种人二倍体细胞， 置 35培养至病毒增殖高峰期，收获后提取甲型肝炎病毒，用酶联免疫法进行 病毒滴定，病毒滴度应不低于 6.50 LgCCID50/ml。 2. 2. 3.3 无菌检查 依法检查（附录
5、X A）， 应符合规定。 2.4 支原体检查 依法检查（附录 X B）， 应符合规定。 2. 2. 3. 5 病毒外源因子检查 依法检查（附录 X C）， 应符合规定。供试品可不经甲型肝炎病毒抗特 异性免疫血清中和，直接接种小鼠观察。 2. 2. 3. 6 免疫原性检查 用主种子批制备原疫苗，按常规接种甲型肝炎易感者至少 40 名，分别于免 疫前及免疫后 68 周采血，血清抗体阳转率应不低于 90%。 2. 2. 3. 7 猴体安全及免疫原性试验 用主种子批制备的疫苗做猴体试验。取甲型肝炎病毒抗体阴性、丙氨酸氨 基转移酶指标正常、体重为 1.5-4.5 kg 的健康恒河猴或红面猴 5 只，于下
6、肢静 脉注射疫苗 1.0ml，滴度应不低于 6.50 LgCCID50ml。试验猴于第 0、4、8 周 肝穿刺做组织病理检查。于第 0 周、第 2 周、第 3 周、第 4 周、第 6 周、第 8 周采血测定丙氨酸氨基转移酶及甲型肝炎病毒抗体。应设 2 只猴为阴性对照。 试验组符合下列情况者判定合格： （1）至少 4 只猴抗体阳转；（2）血清丙氨酸氨基转移酶有一过性（1 周次）升高者不超过 2 只猴； （3）肝组织无与接种供试品有关的病理改变。 有下列情况之一者可重试： （1）接种猴抗体阳转率低于 45； （2）抗体阳转前后两周内血清丙氨酸氨基转移酶异常升高超过 2 次； （3）试验猴不能排除其
7、他原因所致的肝组织病理改变。 重试后仍出现上述情况之一者，判为不合格。 2. 2. 4 毒种保存 毒种应置-60以下保存。 2. 3 原液 2. 3. 1 细胞制备 同 2.1.2 项。 2. 3. 2 培养液 培养液为含适量灭能新生小牛血清的 MEM 或其他适宜培养液。新生牛血清的质量应符合规定（附录 XIII D） ， 且甲肝抗体检测应为阴性。 2. 3. 3 对照细胞外源因子检查 依法检查（附录 X C ）， 应符合规定。 2. 3. 4 病毒接种和培养 取工作种子批毒种按适宜 MOI 接种于人二倍体细胞（同一工作种子批应按 同一 MOI 接种），于 350.5培养， 培养期间， 根据细
8、胞生长情况， 可用 不少于原倍培养液量的洗液充分洗涤细胞表面以去除牛血清，并换加维持液或 其他适宜的液体继续培养。 2.3.5 病毒收获物 于病毒增殖高峰期，采用适宜浓度的胰蛋白酶或其他适宜方法消化含甲肝 病毒的细胞，并经离心或其他适宜的方法收集含甲肝病毒的细胞为病毒收获物。2.3.6 病毒收获物检定 按 3.1 项进行。 2.3.7 病毒收获物保存 于-20以下保存，保存时间按批准的执行。 2.3.7 病毒提取 检定合格的病毒收获物经冻融和（或）超声波处理， 并采用适宜浓度的三 氯甲烷抽提以提纯病毒。 2. 3. 8 合并 同一细胞批生产的病毒收获物经提取病毒后合并为一批原液。 2. 39
9、原液检定 按 3.2 项进行。 2.3.10 原液保存于 28保存，保存时间按批准的执行。 2. 4 半成品 241 配制 用疫苗稀释液将原液按同一病毒滴度进行配制，并加入适量稳定剂，即为 半成品。 2. 42 半成品检定 按 3.3 项进行。 2. 5 成品 2. 5. 1 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2. 5.2 分装及冻干 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.5. 3 规格 复溶后每瓶 0.5ml 或 1.0ml。 每 1 次人用剂量为 0.5ml 或 1.0ml，含甲型肝炎活病毒应不低于 6.50 LgCCID50。 2. 5. 4 包装 应符合“生物制品包装规程”
10、规定。 3 3 检定检定 3. 1 病毒收获物检定 3. 1. 1 病毒滴定 按 2.2.3.2 项进行，病毒滴度应不低于 7.00 LgCCID50ml。 3. 1. 2 无菌检查 依法检查（附录 XA），应符合规定。 3.1.3 支原体检查 依法检查（附录 X B），应符合规定。 3.2 原液检定 3. 2. 1 病毒滴定 按 2.2.3.2 项进行，病毒滴度应不低于 7.00 LgCCID50ml。 3. 2. 2 无菌检查 依法检查（附录 XA），应符合规定。 3.2.3 支原体检查 依法检查（附录 X B），应符合规定。 3. 3 半成品检定 无菌检查 依法检查（附录 X A）， 应
11、符合规定。 3.4 成品检定 除水分测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行以下各项检定。3.4.1 鉴别试验 采用酶联免疫法进行测定，应证明含有甲型肝炎病毒抗原。 3. 4. 2 外观 应为乳酪色疏松体，复溶后为澄明液体，无异物。 3. 4.3 水分 应不高于 3.0 %（附录 VD）。 3.4.4 三氯甲烷残留量 应不高于 0.006 %，（附录 VI V ） 345 抗生素残留量检查 生产过程中加入抗生素的应进行该项检查。 采用 ELISA 酶联免疫法检测， 应不超过 10ng/ml。 3. 4. 6 病毒滴定 取疫苗 3-5 瓶供试品混合滴定，按 2.2.3.2 项进行，病毒滴度
12、应不低于 6.50LgCCID50ml。3.4.7 热稳定性试验 疫苗出厂前应进行热稳定性试验， 应与病毒滴定同时进行。 于 37放置 72 小时后，按 2.2.3.2 项进行，病毒滴度应不滴于 6.50 LgCCID50ml， 病毒 滴度下降应不高于 0.50 Lg。 3. 4. 8 无菌检查 依法检查（附录 X A），应符合规定。 3. 4. 9 异常毒性检查 依法检查（附录 X F），应符合规定。 3. 4. 10 牛血清白蛋白残留量 应不高于 50 ng/剂（附录 VIII F）。 4 4 保存、运输及有效期保存、运输及有效期 于 28避光保存和运输，自生产之日起，有效期为 18 个月。生产日期为 半成品配制日期。 5 5 疫苗稀释剂疫苗稀释剂 疫苗稀释剂为灭菌注射用水，应符合对疫苗稀释剂有关要求。 5.1 疫苗稀释剂装量 5.2 疫苗稀释剂包装 5.3 疫苗稀释稀释剂有效期 5.4 疫苗稀释剂批准文号 5.5 疫苗稀释剂生产企业 6 6 说明书说明书
