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1、 上海交通大学硕士学位论文 1 上海交通大学硕士研究生学位论文 体内研究IL-2基因瘤苗抗肿瘤效应 及安全性检测 The study about ANTI-TUMOR EFFECT AND SAFETY OF IL-2 GENE VACCINE IN VIVO 海 研究生姓名:张某某医学院附属瑞金医院普外科 指导老师:赵老师 学科(专业):外科学(普通外科学) 培养单位:上海交通大学医学院附属瑞金医院 攻读学位:硕士学位 答辩时间:2008年5月 上海交通大学硕士学位论文 2 上海交通大学 学位论文原创性申明 本人郑重申明:所成交的学位论文,是本人在导师的指导下,独 立进行研究所取得的成果。除
2、文中已经注明引用的内容外,本论文 不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文 的研究做出重要的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人 完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日期: 年 月 日 上海交通大学硕士学位论文 3 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定, 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版, 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文 的全部或部分内容编入有关的数据库进行检索,可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密 ( ) , 在
3、年解密后适用本授权书。 本学位论文属于不保密( ) 。 (请在以上括号内打“” 学位论文作者签名: 指导教师签名: 日期: 年 月 日 日期: 年 月 日 上海交通大学硕士学位论文 I 目录 中文摘要.1 英文摘要.3 引言.6 1 试验材料.9 1.1 细胞株.9 1.2 细胞培养.9 1.3 杂交试验.9 1.4 动物模型.9 1.5 免疫组化.9 2 试验方法.10 2.1 细胞培养.10 2.2 大肠癌基因瘤苗生物活性的鉴定.10 2.3 瘤苗安全性的检测.10 2.4 体内实验检测基因瘤苗的抗肿瘤效应。.11 3 结果.13 3.1 ELISA 检测 IL-2 蛋白水平得表达 .13
4、 3.2 瘤苗细胞的安全性检测结果.13 3.3 体内实验研究瘤苗的抗肿瘤效应.15 4 讨 论.20 5 结论.24 参考文献.25 综述.26 致谢.32 发表论文情况.33 上海交通大学硕士学位论文 1 中文摘要 体内研究IL-2基因瘤苗抗肿瘤效应 及其安全性检测 摘 要 目的:本课题研究转导白细胞介素-2(IL-2)基因的人大肠癌细 胞瘤苗的抗肿瘤效应及其安全性检测。 方法:结肠癌细胞株COLO205采用脂质体法稳定转染IL-2基因,应用 ELISA法检测瘤苗的IL-2的表达,筛选高表达IL-2基因的细 胞克隆作为基因瘤苗。将已构造好的结肠癌裸鼠模型分为两组,采 用瘤体内注射的方法,注
5、射经60Gy 60 Co照射的瘤苗细胞(治疗组) 和PBS缓冲液(对照组),密切观察肿瘤生长状况,五周后处死所有 裸鼠,取出肿瘤,观察并称重,免疫组化法检测IL-2 基因的表达。 把已制备好的大肠癌基因瘤苗用 60 Co进行照射,将照射瘤苗细胞继 续培养,用苔盼蓝染色法测定细胞的存活率,将照射的瘤苗细胞和 未照射组的瘤苗进行荷瘤试验。 结果: 获得基因瘤苗最高表达为COLO205-H5 量为139.13 ng/110 7 /24h。瘤体内注射瘤苗组的裸鼠肿瘤生长缓慢,较早达到 平台期,而对照组的肿瘤生长迅速,差异有显著性。 ( t=2.7,p0.05)治疗组肿块的重量也明显小于对照组 上海交通
6、大学硕士学位论文 2 (t=7.2,p0.01) 。移植瘤治疗组IL-2免疫组化结果显示阳性,而 对照组为阴性,说明了瘤苗在移植瘤体内存活并分泌IL-2。照射 60Gy 60 Co瘤苗细胞培养在25天内全部死亡,荷瘤试验显示照射后的 瘤苗未能成瘤,而未经照射组均已成瘤。 结论:通过体内实验研究证实了IL-2基因转导结肠癌细胞制备 的瘤苗具有一定的抗肿瘤效应,经60Gy 60 Co照射后能消除其致瘤性, 为肿瘤的治疗提供了一定的实验基础。 关键词:大肠癌,白细胞介素-2,基因瘤苗,移植瘤上海交通大学硕士学位论文 3 英文摘要 The study about ANTI-TUMOR EFFECT AND SAFETY OF IL-2 GENE VACCINE IN VIVO ABSTRACT Objective: To investigate the anti-tumor effect of IL-2 gene vaccine and detect its safety. M