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1、抗心磷脂体抗体检测1. 检验目的用于体外定性检测人血清或血浆中抗 ACA-IgG、IgM、IgA 的水平。2. 方法原理包被纯化的心磷脂抗原与待测样品中的 ACA-IgG、IgM 结合，加入酶标抗体后，形成复合物，后者与底物作用呈显色反应，在 450nm 处测定其吸光度（OD）值，反映样品中 ACA-IgG、IgA、IgM 水平是否正常。3 性能参数阴性参考品血清、阳性参考品血清应符合阴阳性参考品血清要求，最低检测限符合最低检出限的检出要求，精密度 CV（%）不高于 15%，37放置 6 天产品性能稳定。4. 始样品系统4 1 标本类型：血清或血浆4 2 采血严格按照静脉采血的通用规则。4 3
2、 样本在离心前，须凝固充分。44 不能使用在室温下放置超过 8 小时的样本。45 如果检测不能在 8 小时内完成，要将瓶盖紧闭，并存于 28保存。4 6 如果样本在 48 小时内不检测，将样本血清冻存于-20。4 7 样本只能冻融一次。4 8 加样前样本须无纤维、气泡及其它物质。4 9 标本的拒收：严重溶血、脂血、血量不够、三查三对不合格者拒收。5 容器和添加物的类型5.1 无抗凝剂的红色或黄色胶头真空试管。5.2EDTA、肝素抗凝的紫色、绿色胶头真空试管。6 设备和试剂6.1 分析仪器：酶标分析仪：TECAN 公司 移液器：5l450l 移液器恒温水浴箱：上海一恒公司的 CU420微孔振荡器
3、：分析试剂: ASKI ELISA 法检测试剂盒6.2 组成：6.2.1 纯化抗原包被反应条：室温平衡 30 分钟方可拆开包装6.2.2 酶结合物：用于酶联反应 6.2.3 阳性对照：用于阳性对照反应 6.2.4 阴性对照：用于阴性对照反应 6.2.5 样本稀释液：用于稀释样本 6.2.5 浓缩洗涤液：用前以蒸馏水作 30 倍稀释6.2.6 底物 A：用于显色反应 6.2.7 底物 B：用于显色反应 6.2.8 终止液：用于终止显色反应 6.3 试剂保存与有效期6.3.1 新购试剂保存于 2-8，勿冷冻，在有效期内使用。6.3.2 若有剩余试剂，应立即放回冰箱，保存于 2-8。7 程序步骤7.
4、1 将血清标本编号,使用前用稀释液按 1：100 比例稀释，在 LIS 系统中登记化验单姓名，性别、年龄、科室、住院号等。7.2 配制应用洗涤液：每瓶浓缩洗涤液加蒸馏水至 240ml，混匀，装入洗瓶中待用。7.3 根据被检标本的多少将微孔条固定于支架，用加样器在每孔中加入 100ul稀释混匀好的样本（空白对照 1 孔，阳性对照 1 孔及阴性对照 1 孔） ，置 37孵育 30 分钟。7.4 弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置 30 秒，甩干，重复 3 次后拍干。7.5 每孔加酶结合物 100ul，振荡均匀，置 3730 分钟。7.6 洗涤：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置 30 秒，甩干，重
5、复 3 次后拍干。7.7 每孔加底物 A、B 各 50ul（1 滴） ，振荡混匀，置 37 15 分钟。取出后每孔加终止液 1 滴。7.8 用酶标仪读数，取波长 450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm） ，先用空白孔校零，然后读取各孔 OD 值。8 质量控制程序每块板必须进行阴阳对照的检测，以确保每块板的可靠性。9 实验的干扰因素 血红蛋白浓度为 10mg/ml 的溶血、甘油三酯浓度为 20mg/L 的脂血、胆红素浓度为 0.4mg/ml 的黄疸对检测结果没有干扰。10 结果计算程序的原理样本 OD 值/阴性对照平均 OD 值2.1 判断为阳性，否则为阴性。阴性对照 OD值
6、低于 0.10 作 0.10 计算，高于 0.10 按实际 OD 值计算。11 生物参考区间阴性12 检验结果可报告区间阴性、阳性13 实验室解释13.1 该方法适用于定性检测和辅助诊断。13.2 当结果为阳性时需同时结合患者的临床体征或进一步结合其它方法来进行。14. 临床意义常见于系统性红斑狼疮（SLE）及其他自身免疫性疾病。该抗体与血栓形成、血小板、自然流产或宫内死胎关系密切。15 安全防护 15.1 对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。15.2 一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水
7、冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。15.3 其他安全防护措施参见本实验室生物安全手册16 常见的误差源 16.1 仪器原因：仪器的性能、仪器的校准等。16.2 试剂原因：试剂过期、微孔板被污染等。16.3 标本原因：标本处理、收集不符合要求等。16.4 人为原因：结果填写错误等。17 注意事项17.1 试剂盒从冷藏环境中取出时应室温平衡 30 分钟后方可使用，未用完的微孔板用自封袋密封 2-8保存。17.2 酶标板洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口内有游离酶不能洗净。应设定30-60 秒的洗液浸泡时间。17.3 滴加试剂前应将滴瓶翻转数次，使液体混匀，并弃去 1-2 滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确（注意：勿将试剂滴在孔壁上） 。17.4 所有样品和废弃物都应按传染源处理。17.5 操作应按说明书严格进行，有效期内使用，封板膜为一次性用品不能重复使用。17.6 检测结果的判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，可不设空白对照，结果判断须在反应终止后 10 分钟内完成。17.7 待测标本不可用 NaN3 防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。18 参考文献18.1 叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程.第 3 版.南京：东南大学出版社，2006:692.18.2 ASKI 公司试剂 ASA 说明书
