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1、实验四、酪蛋白的制备一、目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。 二、原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为 35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为 4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的 pH 调至 4.7 时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。三、材料、试剂与器具（一）材料新鲜牛奶（一）试剂1、95%乙醇 1 200mL2、无水乙醚 1 200mL3、0.2mol/L pH4.7 醋酸醋酸钠缓冲液 3000ml先配 A 液与 B 液A 液：0.2mol/L 醋酸钠溶液 称 NaAC3H2O
2、 54.44g，定容至 2000ml。B 液：0.2mol/L 醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于 99.8%-用冰醋酸也可以）24.0g 定容至2000ml。取 A 液 1770ml，B 液 1230ml 混合即得 Ph4.7 的醋酸醋酸钠缓冲液 3000ml。4、乙醇乙醚混合液乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）（二）器具1、离心机 2、抽滤装置3、精密 pH 试纸或酸度计 4、 恒温水浴箱5、烧杯 四、操作步骤（一）酪蛋白的粗提10mL 牛奶加热至 40。在搅拌下慢慢加入预热至 40、pH4.7 的醋酸缓冲液 10mL.用精密 pH 试纸或酸度计调 pH 至 4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心
3、8-10 分钟（3500-4000 r /min） 。弃去清液，得酪蛋白粗制品。（二）酪蛋白的纯化1、用水洗涤沉淀 3 次，离心 5 分钟（3500-4000 r /min） ，弃去上清液。2、在沉淀中加入 20mL 乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇乙醚混合液洗沉淀 2 次。最后用乙醚洗沉淀 2 次，抽干。3、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯品。（三）准确称重，计算含量和得率。含量=酪蛋白 g/10mL 牛乳（g% ）得率=测得含量/理论含量 X100%式中理论含量为 3.5g/100mL 牛乳。五、注意事项1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，故调节牛奶液
4、的等电点一定要准确。最好用酸度计测定。2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，最好在通风橱内操作。3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计算。六、实验报告1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋的制备方法。2、合理分析实验所得率七、思考题1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？琼州学院实验项目卡生物科学与技术学 院 生化 实验室 设日期_年_月_日实验项目 酪 蛋 白 的 制 备 面向专业课程性质1、必修2、选修实验类型1、还未开设的新实验2、手段更新的实验3、已开设过的实验本实验学时数 4实验分组概况名 称 型号规格 数量 名 称 型号规格 数量离心机 2抽滤装置 1 拖 2 1（抽滤瓶、布氏漏斗）恒温水浴箱 1烧杯 2 大 6 小 8培养皿 6电子天平 1所用主要仪器名 称 纯度级别 数量 名 称 纯度级别 数量乙醇 95% 2000ml乙醚 无水 2000ml0.2 mol/L NaAC 500mlpH 4.7 醋酸-醋酸钠缓冲液 0.2 mol/L HAC 500ml所用主要药品其他 滤纸、新鲜牛奶实验情况记录实验教师签名_实验员（管理员）签名_
