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1、 分批培养与补料分批培养的区别？补料分批培养的优点？ 分批式培养是指先将细胞和培养液一次性装入反应器内进行培养，细胞不断生长，同时产物也不断形成，经过一段时间的培养后，终止培养。在细胞分批培养过程 中，不向培养系统补加营养物质，而只向培养基中通入氧，能够控制的参数只有 pH 值、温度和通气量。因此细胞所处的生长环境随着营养物质的消耗和产物、副产 物的积累时刻都在发生变化，不能使细胞自始至终处于最优的条件下，因而分批培养并不是一种理想的培养方式。分批培养过程特征如图 14-2。 图14-2 动物细胞分批式培养过程的特征细胞分批式培养的生长曲线与微生物细胞的生长曲线基本相同。在分批式培养过程中，可
2、分为延滞期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期等五个阶段。分批培养过程中的延滞期是指细胞接种后到细胞分裂繁殖所需的时间，延滞期的长短根据环境条件的不同而不同，并受原代细胞本身的条件影响。一般认为，细胞延 滞期是细胞分裂繁殖前的准备时期，一方面，在此时期内细胞不断适应新的环境条件，另一方面又不断积累细胞分裂繁殖所必需的一些活性物质，并使之达到一定的 浓度。因此，一般选用生长比较旺盛的处于对数生长期的细胞作为种子细胞，以缩短延滞期。细胞经过延滞期后便开始迅速繁殖，进入对数生长期，在此时期细胞随时间呈指数函数形式增长，细胞的比生长速率为一定值，根据定义式中 t：培养时间（h） ；X0：细胞的初始浓度
3、；X：t 时刻的细胞浓度；：细胞的比生长速率。细胞通过对数生长期迅速生长繁殖后，由于营养物质的不断消耗、抑制物等的积累、细胞生长空间的减少等原因导致生长环境条件不断变化，细胞经过减速期后逐渐 进入平稳期，此时，细胞的生长、代谢速度减慢，细胞数量基本维持不变。在经过平稳期之后，由于生长环境的恶化，有时也有可能由于细胞遗传特性的改变，细胞逐渐进入衰退期而不断死亡，或由于细胞内某些酶的作用而使细胞发生自溶 现象。 图14-3 典型的分批培养随时间的变化曲线在分批培养过程中，与细胞的生长、代谢相关的主要参数有限制性营养物质浓度及其比消耗速率、细胞密度及其比生长速率、产物浓度及其生成速率、抑制物的浓度
4、等。根据比速率的定义，分批式培养过程有下述方程：式中 ：细胞的比生长速率：S：底物浓度QS：基质比消耗速率；P：产物浓度；QP：产物比生产速率。典型的分批培养随时间变化的过程曲线如图 14-3 所示。由于分批式培养过程的环境随时间变化很大，而且在培养的后期往往会出现营养成分缺乏或抑制性代谢物的积累使细胞难以生存，不能使细胞自始至终处于最优的条 件下生长、代谢，因此在动物细胞培养过程中采用此法的效果不佳。分批补料式培养是指先将一定量的培养液装入反应器，在适宜的条件下接种细胞，进行培养，使细胞不断生长，产物不断形成，而在此过程中随着营养物质的不断消 耗，不断地向系统中补充新的营养成分，使细胞进一步
5、生长代谢，直到整个培养结束后取出产物。分批补料式培养只是向培养系统补加必要的营养成分，以维持营养 物质的浓度不变。由于分批补料式培养能控制更多的环境参数，使得细胞生长和产物生成容易维持在优化状态。分批补料式培养过程的特征如图 14-4 所示。分批补料式培养的特点就是能够调节培养环境中营养物质的浓度：一方面，它可以避免在某种营养成分的初始浓度过 高时影响细胞的生长代谢以及产物的形成；另一方面，它还能防止某些限制性营养成分在培养过程中被耗尽而影响细胞的生长和产物的形成。同时在分批补料式培养 过程中，由于新鲜培养液的加入，整个过程的反应体积是变化的。图14-4流加式培养过程的特征根据分批补料控制方式
6、不同，有两种分批补料式培养方式：无反馈控制流加和有反馈控制流加。无反馈控制流加包括定流量流加和间断流加等；有反馈控制流加一般 是连续或间断地测定系统中限制性营养物质的浓度，并以此为控制指标来调节流加速率或流加液中营养物质的浓度等。由于分批补料式培养的反应体积不断变化，培 养过程中的各参数变化可写为式中 V：培养液的体积；F（t）：流加液的流速；S：流加液的基质浓度；YX/S：基于一定基质的细胞产率；M：维持常数。补料分批培养的优点：补料分批培养技术介于分批培养和连续培养之间，兼有两者之优点，而又克服了两者之缺点同传统的分批培养相比，补料分批培养的优越性是明显的， 首先它可以解除底物抑制、产物反馈抑制和葡萄糖分解阻遏效应。对于好氧发酵， 补料分批培养可以避免在分批发酵中田一次性投糖过多造成细胞大量生长， 耗氧过多，以至通风搅拌设备不能匹配的状况。还可以在某些情况下减少菌体生成量，提高有用产物的转化率。在真菌培养中， 菌丝的减少可以降低发醇液的粘度， 便于物耕输进及后处理。在补料分批培养中，菌体可被控制在一系列连续的过渡态阶段， 可用来作为控制细胞质量的手段，在以出芽率作为质量标准的酵母生产中， 控制补料速率， 可姒提高产芽孢酵母的比例。用补料分批培养技术可以重复某个时期细胞培养的过渡态， 用此可用作理论的研究。同时，研究补料分批培养是达到自动控制和最优控制的前提。
