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1、注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认 方案文件编号：VP-4F97MV-002012 年 10 月南京绿叶思科药业有限公司Nanjing Luye Sike Pharmaceutical Co.,Ltd目 录1. 概述 .12. 目的 .13. 范围 .14. 风险评估 .15. 计划确认时间 .16. 确认人员及职责 .17. 确认前准备 .28. 确认内容 .39. 可接受标准 .810. 偏差调查及异常情况 .811. 综合分析与结果评价 .812. 验证结论和监测建议 .813. 附件 .9南京绿叶思科药业有限公司 注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验
2、方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00 第 1 页 共 9 页1. 概述现行的注射用紫杉醇脂质体质量标准为国家药品标准WS-718(X-529)-2002，为了确认包封率、有关物质、含量测定检验方法在本公司质管部实验室条件下的适用性，特制定本确认方案。2. 目的确认注射用紫杉醇脂质体质量标准（国家药品标准 WS-718(X-529)-2002）中包封率、有关物质、含量测定检验方法在本公司质管部实验室条件下的适用性。3. 范围本确认方案适用于注射用紫杉醇脂质体国家药品标准 WS-718(X-529)-2002 中包封率、有关物质及含量测定检验方法在本公司质管部实验室的方法学确认。4.
3、风险评估编号 风险 影响 S P D风险等级确认活动1未按照方案执行。导致确认结果不可信。 3 2 2 高确认前对参与确认的人员进行培训。2未按照 SOP 执行操作。导致确认结果不可信。 3 2 2 高确认过程和结果由另一人进行复核。注：S: 严重性 P:可能性 D:可检测性5. 计划确认时间确认实施时间计划为 2012 年 10 月 26 日至 2012 年 11 月 10 日。 6. 确认人员及职责6.1 确认小组组长姓名 部门 职务 责任王晟 质管部 检验员负责确认方案的起草，在方案批准后，对确认小组成员进行本方案的培训。负责确认方案的实施。确认过程中，如有偏差，及时报告并配合调查，保证
4、按偏差处理程序进行调查和处理。确保报告的生成、审核和批准。南京绿叶思科药业有限公司 注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00 第 2 页 共 9 页6.2 确认小组成员姓名 部门 职务 责 任毛圣淼 质管部 检验员在方案批准后，按确认方案实施，收集、整理数据，完成确认记录，对确认过程中出现的偏差及时报告并配合调查。待确认完成后，起草确认报告。7. 确认前准备7.1 确认相关文件（检查记录见附表一：确认文件检查记录）7.1.1 方案建立的依据 注射用紫杉醇脂质体质量标准（WS-718(X-529)-2002） 中国药典 （2010 年版）
5、药品质量标准分析方法验证指导原则 药品 GMP 指南 （ 2011 年版） 分析方法的验证和确认7.1.2 公司相关管理制度 偏差管理规程（SMP-QA-024 ） 验证程序管理规程（SMP-QA-032 ） 验证文件管理规程（SMP-QA-030 ）7.1.3 确认必备的操作规程无。7.1.4 相关质量标准和检验规程及检验仪器的操作规程 Agilent1200 高效液相色谱仪操作维护保养规程（ SOP-EM-521） METTLER-TOLEDO XS105 分析天平操作规程（SOP-EM-519 ）7.2 参与确认人员的培训确认开始前必须保证所有人员都经过相应的培训，并做好培训记录。（见附
6、表二：人员培训记录）7.3 支持仪器/设备有效期确认确认开始前必须对确认中所需要的检测仪器/设备的有效期进行检查，保证所用检验仪器/设备在确认实施中是处于合格有效的，并做好检查记录。 （见附表三：检验仪器的有效性记录）南京绿叶思科药业有限公司 注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00 第 3 页 共 9 页8. 确认内容8.1 试剂及仪器设备试剂列表试剂名称 来源紫杉醇对照品 自标（云南汉德）甲醇（色谱纯） Tedia Company,InC. USA注射用水 制水三室分析仪器列表设备名称 生产公司名称 型号 设备编号电子天平 梅特勒 -
7、托利多仪器有限公司 XS105 002高效液相色谱仪 美国安捷伦科技公司 Agilent 1200 014色谱柱 汉邦科技 4C18254F 090109048.2 包封率检验方法学确认8.2.1 检验方法色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇:水（3:1 ）为流动相，检测波长为 227nm。理论板数按紫杉醇峰计算，应不低于 1000。供试品溶液的制备：取本品 1 瓶，加 5%葡萄糖注射液 7.5ml,旋涡混匀 10 分钟,使成每 1ml 中含紫杉醇约为 4mg 的乳浊液。测定法：取用水充分溶胀后的葡聚糖凝胶(SephadexG-50，100-300)加入内径为0.7cm 的层析柱中
8、,使凝胶层高约为 21cm，用水 100ml 分次加入柱中，使柱平衡，精密吸取供试品溶液 0.2ml,沿管壁加至凝胶层面上，用少量水冲洗层析柱壁，每次 1ml，共两次，使样品进入凝胶柱，然后用细玻璃棒轻轻搅匀样品层（约 1cm 高） 。用水洗脱，自洗脱液出现轻微浑浊，即开始定量收集洗脱液 15ml，摇匀，精密量取 2ml 置 10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即为测定被包封的紫杉醇含量 ME 的溶液。凝胶柱再用不同浓度的乙醇梯度洗脱（沿管壁缓缓依次加入 33%乙醇 3ml，66%乙醇 3ml 及无水乙醇） ，弃去洗脱液 10ml，立即开始定量收集游离紫杉醇部分，共收集 5ml，作为测定
9、MF 的溶液。照含量测定项下的色谱方法，取 ME 和 MF 溶液各 20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积按下式计算包封率和回收率：南京绿叶思科药业有限公司 注射用紫杉醇脂质体包封率、有关物质、含量测定检验方法学确认方案文件编号：VP-4F97MV-00 第 4 页 共 9 页包封率（%）= 100% 回收率（%）=5M7FE %10257LFEM式中：M E 为被包封在脂质体中的紫杉醇的峰面积MF 为未被包封的游离紫杉醇的峰面积。为总紫杉醇的峰面积。L8.2.2 确认项目的确定根据药品 GMP 指南 （ 2011 年版） 分析方法的验证和确认，参照含量测定法的确认项目，应该要确认的
10、项目有专属性、精密度；由于包封率的样品由收集获得，可能存在收集不完全而使结果产生偏差，所以准确度也需确认，在本方案中增加回收率实验。则需要确认的项目为专属性、精密度、准确度。8.2.3 专属性8.2.3.1 操作方法按处方量精密称取辅料，置于 20ml 西林瓶中，加入 5%葡萄糖注射液 7.5ml，涡旋振荡 10min，配置成空白辅料溶液。取空白辅料溶液，按照 8.2.1 项下的测定法操作，将收集到的 ME、M F 和 ML 各精密量取 20l 注入液相色谱仪。记录色谱图。8.2.3.2 接受标准用空白辅料溶液收集得到的 ME、M F 和 ML 色谱图在紫杉醇峰位置均应无干扰。8.2.4 进样精密度8.2.4.1 操作方法按照 8.2.1 项测定法配制 ME 溶液，分别精密量取 20l 注入液相色谱仪，连续测定 6 次，记录色谱图。8.2.4.2
