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1、（一） 立项依据与研究内容1. 项目的立项依据（一）研究意义乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，以往以欧美国家高发，但是在我国女性中的发病率也逐年以 3%的速率增加，上海等地的发病率已经接近了某些欧美国家和地区。由于目前对于乳腺癌发病机理的认识还不够清楚，我们难以降低乳腺癌的发病率和促进相关防治手段的更新进步。虽然以往许多学者对乳腺癌的高发危险因素进行了详细的调查研究，但是对于这些因素如何引起乳腺癌却知之甚少。如果我们从干细胞的自我更新调控 Wnt 信号途径方面入手，有可能找到乳腺癌发生的关键环节，用以减少乳腺癌的发病率和提供乳腺癌防治的新靶点 （个人觉得，这一句话写得很突兀，和前面几乎没有联系
2、） 。据此，本研究拟以乳腺干细胞和 Wnt 信号途径作为研究对象，揭示乳癌发生过程中 Wnt 信号途径相关蛋白和相关基因表达的变化情况，明确相关改变影响乳腺干细胞自我更新调控的作用机理，阐明引起乳腺上皮干细胞发生恶性转化的关键因素，为防治乳腺癌提供新思路和理论依据。（二）国内外研究现状如何才能更好地防治乳腺癌，最重要的就是清楚乳腺癌的关键发病机理和诱发因素。在诱发因素方面，已经明确雌激素水平、高脂饮食等多种因素和乳腺癌发生有关；在发病机理方面的研究发现，肿瘤的染色体具有非整倍性（染色体数量和/或结构改变） ，提示肿瘤的产生与染色体不稳定性和大量基因突变有关12。但是仅用原癌基因和抑癌基因突变的
3、分子机制无法明确地解释乳腺癌的发病机理，并且有研究者提出质疑：大量基因突变究竟是肿瘤的原因还是结果？ （这个问题，直到整个标书看完了，也没有找到对应的答案。后面又如何衔接到干细胞去的？也没有很好的交代。 ）1、干细胞自我更新与肿瘤发生随着肿瘤干细胞的提出和发现，干细胞在肿瘤发生中的地位开始成为大家关注的热点。肿瘤细胞与干细胞之间存在着惊人的相似性：具有自我更新能力和相似的生长调控机制，用以维持克隆生长。Wnt、Hh 信号途径是目前发现与干细胞的增殖分化密切相关的信号传导途径，并且与肿瘤发生发展有密切关系。上述途径被激活后可以启动干细胞的自我更新和组织修复，但是持续激活则可以引起干细胞发生恶性转
4、化，导致肿瘤的发生3（见下图） 。不但以往的肿瘤分子流行病学研究中已经观察到一些可以促进 Hh 或 Wnt 信号途径活化的家族性突变和多种人、鼠的肿瘤发生有关，同时也已经有研究表明肿瘤干细胞起源于正常组织干细胞，因为两者具有相同的表面标志45。这些发现为我们重新认识肿瘤的起源，以及制定有效的肿瘤防治策略开辟了新的视角，提供了新的思路。 （肿瘤细胞、干细胞、肿瘤干细胞三者间关系没有阐明，干细胞分很多种，起码可以分成体干细胞和胚胎干细胞，不同条件下，具有定向或多向分化潜能，肿瘤细胞与其的相似性恐怕差的还是很远；即使肿瘤干细胞也会存在类似的区别。因此这里的交代很含混。 ）2、乳腺干细胞与乳腺癌干细胞
5、乳腺干细胞和成人乳腺组织的增生（青春期和怀孕哺乳期） 、更新（月经周期性变化）以及乳腺癌发生关系密切。正常情况下，成人乳腺组织增生和更新时，乳腺干细胞开始处于相对活跃状态，平时则处于相对静止状态；当体内外环境的改变导致乳腺正常的干细胞出现异常，发生恶性转化成为肿瘤干细胞时，就会导致乳腺癌的发生67。支持乳腺干细胞存在的实验证据来自 Kordon EC8的研究：一个乳腺干细胞可以构建出一个完整功能的乳腺组织；Al-Hajj9等在对人乳腺癌细胞亚群分选和动物移植模型研究中发现，仅有表面标志是 LinCD44 CD24/low 的乳腺癌干细胞才能复制出乳腺癌模型，其它的乳腺癌细胞即使大量接种也难以形
6、成乳腺癌，证实乳腺癌干细胞是乳腺癌的起源。也为我们进一步研究乳腺干细胞与乳腺癌的起源的关系提供了良好的研究基础。 （如果这是 08 年前的基金，这样写可能不会遭受太多质疑，但是 08 年底有牛人用更好的敲基因小鼠证实过肿瘤干细胞不一定存在，将恶黑的细胞单个接种，同样也可以成瘤，从而挑战了肿瘤干细胞这个概念。乳腺干细胞变成乳腺癌干细胞，这样的提法似乎应该找更牛的文章做证据，乳腺干细胞和乳腺癌干细胞表面标志还是 LinCD44 CD24/low 么？乳腺干细胞和乳腺癌干细胞的区别在哪里？怎么知道乳腺干细胞变成了乳腺癌干细胞？）3、Wnt 信号途径与乳腺干细胞自我更新的调控Wnt 信号途径的激活（见
7、下图）始于 Wnt 效应子（目前已知有 19 个成员）和胞膜受体Fz、 LRP5/6 结合，促使 catenin 从复合体中解离出来并进入细胞核内，和Lgs、Pypopus 、Tcf/LEF 结合后促进靶基因（如 CyclinD1、c myc 等）的表达。Wnt 信号途径的抑制因子主要有 SPRP、WIF 、DKK 、GSK3、CK1a。在对干细胞自我更新调控研究中发现 Wnt 信号途径与乳腺组织的发育和癌变关系密切10。在鼠模型中通过转染使 Wnt 效应子活性增加后，人们观察到鼠乳腺组织中干细胞的比例增加11；而且当鼠乳腺肿瘤病毒（MMTV）感染宿主后，病毒会整合到的宿主染色体的同一部位，并
8、且引起Wnt 信号途径活化以及促进乳腺组织发育、乳腺增生以及乳腺癌的发生10；表明 Wnt 信号途径的活化可以引起乳腺干细胞的自我更新和富集以及促进乳腺癌的发生。 （除了 Wnt，其余的可以简单提一提，体现自己认真研究过文献，否则大家都说自己做的最重要，最关键。 ）但是以往的相关研究仅仅限于鼠源性乳腺组织模型。最近已经成功在 NOD/SCID 鼠中重建了具有正常结构和功能的人乳腺组织动物模型12，这无疑为我们研究人乳腺癌发生过程中 Wnt 信号途径和乳腺干细胞自我更新调控的变化提供了良好的研究模型。（三）本研究基本思路与意义本项研究拟在诱发人乳腺癌全过程中观察 Wnt 信号途径相关蛋白和相关基
9、因的变化情况，并根据发生时间顺序、发生频率、发生强度等因素分析 Wnt 信号途径在癌变过程中的变化规律，同时通过将相应变化作用于乳腺干细胞并观察乳腺干细胞接种动物模型后的乳腺组织生长发育以及恶性转化情况，明确相关改变在乳腺干细胞自我更新中所起的调控作用。这样就有可能揭示 Wnt信号途径变化引起乳腺上皮干细胞发生自我更新失调控，进而导致乳腺癌发生的关键环节，部分阐明乳腺癌的发病机理，有望为防治乳腺癌提供新的理论依据和思路。 （似乎漏掉了 Wnt 和乳腺癌干细胞的关系探讨，既然存在着乳腺干细胞乳腺癌干细胞乳腺癌的关系，作为关键部分的乳腺癌干细胞，不应忽略）参考文献：1. Harith Rajago
10、palan,Christoph Lengauer. Aneuploidy and cancer. (2004) Nature;432:338 341.2. Brandt L,Schneider,Molly Kulesz-Martin. Destructive cycles: the role of genomic instability and adaptation in carcinogenesis. (2004)Carcinogenesis;25:20332044.3.Philip AB, Sunil SK,David MB.Tissue repair and stem cell rene
11、wal in carcinogenesis.( 2004)Nature;432:324331.4. Singh SK, Clarke ID, Terasaki M,et al. Identification of a cancer stem cell in human brain tumorsJ.( 2003) Cancer Res;63(18): 58215828.5. Hope KJ,Jin L, Dick JE. Acute myeloid leukemia originates from a hierarchy of leukemic stem cell classes that di
12、ffer in self-renewal capacity. (2004) Nature Immunol;5: 738743.6.G Dontu,D El-Ashry, MS Wicha.Breast cancer,stem/progenitor cells and the estrogen receptor. ( 2004)Trends Endocrinal Metab;15(5):193197.7.I Baik,PS Becker, WJ Devito.Stem cells and prenatal origin of breast cancer. (2004)Cancer Causes
13、Control;15(5):517530.8. Kordon EC, Smith GH. An entire functional mammary gland may comprise the progeny from a single cell. (1998)Development;125:19211930.9. Al-Hajj M,Wicha MS,Benito-Hernandez et al; Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. (2003) PNAS; 100: 39833988.10. Keit
14、h RB,Anthony MC. Brown. Wnt Proteins in Mammary Development and Cancer. ( 2004)Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia; 9( 2): 119131.11. Liu BY, McDermott SP, Khwaja SS et al. The transforming activity of Wnt effectors correlates with their ability to induce the accumulation of mammary proge
15、nitor cells. (2004)PNAS;101: 41584163.12. Charlotte K, Tony C, Min W,et al. Reconstruction of functionally normal and malignant human breast tissues in mice.(2004)PNAS;101:49664971. 这份标书，新意明确，好好修改，说服力会更强，但从行文来看，可能为新手。其一缺乏研究基础，尤其是自己的原始数据，这样的标书如同在纸上划了个蛋，然后告诉评委，这个蛋可以孵出小鸡来；其二申请者逻辑推理稍显牵强，尤其是乳腺干细胞、乳腺癌干细胞、
16、乳腺癌交待得不够清楚，其内在联系也不明确；其三引入 Wnt 后做的工作主要是一堆现象的观察和检测，并且大而全，但是忽略了仅靠 Wnt 恐怕不能解释所有的问题的。下面这份标书，我个人认为应当是已经中标了。贴出来大家仔细学习一下。里面还是有几个小小的问题，和大家一起探讨。我室牵头完成的国家科技攻关项目“重庆市水资源安全技术信息分析与对策研究(2003BA903B03-02)” 和“三峡成库后水中持久性有毒物质污染对人群健康危害研究（2003BA869C） ”表明：长江和嘉陵江水源中有机物污染较为严重，共检出 101 中有机污染物，主要包括酯类、酮类、酚类及杂环类，邻苯二甲酸二丁酯等7 种污染物属于我国水环境优先控制污染物，浓度高达 22.8g/L1,2；重庆主城区人群体内检测到 292种有机污染物，邻苯二甲酸二丁酯含量高达 78.2934.01g/L3。通过遗传毒性、肝肾损害、神经毒性、雄性生殖毒性及雌性生殖毒性等研究，发现这些有机物污染物可以影响人体健康和饮
