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1、 长角血蜱论文：长角血蜱 HL-3和 HL-4功能基因的克隆及鉴定【中文摘要】长角血蜱(Haemaphysalis longicornis)作为一种专性吸血外寄生虫,是许多细菌、病毒、原虫及立克次氏体等病原体的传播媒介之一,影响人类和家畜的健康,严重制约着我国畜牧业的发展,引起重大的经济损失。传统的化学药物防控虽然在一定程度上对蜱起到了防控作用,但是蜱耐药性及环境污染等问题的出现使得研究新的生物防控途径成为蜱防控的必然趋势。近年来以免疫学为基础的疫苗防控为人们研制生物抗蜱疫苗提供了新的思路,而这一途径的关键在于蜱功能分子的鉴定。本研究采用 cDNA末端快速扩增技术(RACE)对文库中筛选到的未
2、知基因进行扩增,获得了基因的全长序列,随后进行克隆和表达,分析其分布及生物学功能,评估其作为控蜱疫苗候选抗原的可行性,从而为研制抗蜱生物疫苗奠定理论基础。采用5RACE 技术扩增得到了长角血蜱酸性磷酸酶(HL-3)基因的 5端未知序列,通过 DNAStar拼接首次获得了长角血蜱酸性磷酸酶的全长序列。该基因全长 1324 bp,含有 1137 bp完整的开放式阅读框(ORF),编码 378个氨基酸,预测的分子量约 42.4 kDa,等电点(pI)为 6.35。生物信息学分析表明,该序列含有 3个糖基化位.【英文摘要】Haemaphysalis longicornis, as the most i
3、mportant obligate ectoparasite, are one of the vectors transmitted bacteria, virus, protozotan, rickettsia, and so on. It can seriously threat the health of mankind and livestock, restricts the development of the livestock industry and cause significant economic losses in China. Though the principal
4、 acaricides can provide a degree of protection to tick control, however, this approach is associated with lots of disadvantages such as chemical pollution of the food chain.【关键词】长角血蜱 RACE 扩增 反应原性 相对定量 功能特性【英文关键词】Haemaphysalis longicornis Rapid amplification of the cDNA ends Reactogenicity Comparativ
5、e quantitation Characterization【索购全文】联系 Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发【目录】长角血蜱 HL-3和 HL-4功能基因的克隆及鉴定 摘要 5-6 Abstract 6-7 第一章 文献综述 12-23 1.1 蜱功能分子研究的重要性 12-13 1.2 蜱功能基因的分布、类型及研究进展 13-20 1.2.1 唾液腺相关功能分子的研究进展 13-15 1.2.2 中肠相关功能分子的研究进展 15-17 1.2.3 卵巢相关的功能分子的研究进展 17-18 1.2.4 血淋巴相关的功能分
6、子的研究进展 18-20 1.2.5 其他功能分子分布及研究进展 20 1.3 蜱功能分子的应用 20-22 1.3.1 制备新的重组混合抗蜱疫苗 20-21 1.3.2 研制抗病原传播疫苗 21 1.3.3 研制出新的药用生物制剂 21 1.3.4 研制与蜱耐药性相关的策略 21-22 1.4 研究的内容和方法 22-23 第二章 材料和方法 23-34 2.1 材料 23 2.1.1 试验动物 23 2.1.2 试剂 23 2.1.3 仪器设备 23 2.2 方法 23-34 2.2.1 引物设计 23-24 2.2.2长角血蜱饥饿雌蜱总 RNA 提取 24-25 2.2.3 mRNA 的
7、纯化 25-26 2.2.4 RACE cDNA 一链的合成和 RACE 扩增 26-27 2.2.5 RACE 产物的胶回收 27 2.2.6 RACE PCR 扩增产物的连接、转化和测序 27-28 2.2.7 全序列的生物信息学分析 28-30 2.2.10 目的基因的克隆 30-31 2.2.11 重组载体的原核表达 31 2.2.12 MagneGST(TM) 小量纯化蛋白 31 2.2.13 融合蛋白的大量纯化 31 2.2.14 Western blotting 检测 31-32 2.2.15 蜱不同发育阶段和组织中的相对定量 32 2.2.16 免疫和攻蜱实验 32-33 2.
8、2.17 RNAi 实验 33-34 第三章 HL-3 和 HL-4 基因全长的获得及生物信息学分析 34-47 3.1 结果 34-45 3.1.1 长角血蜱总 RNA 的提取 34 3.1.2 HL-3 RACE cDNA 5端的扩增. 34-35 3.1.3 HL-4 RACE 5端和 3端的扩增 35-36 3.1.4 HL-3 基因全长的获得及生物信息学分析 36-39 3.1.5 HL-4 基因全长的获得及生物信息学分析 39-42 3.1.6 HL-3 的遗传发育分析 42-43 3.1.7 HL-4 遗传发育分析. 43-45 3.2 讨论 45-47 第四章 HL-3 基因的
9、克隆、表达及功能特性的研究 47-57 4.1 实验结果 47-55 4.1.1 HL-3 基因全长序列的扩增 47-48 4.1.2 重组表达载体的 PCR 及酶切鉴定 48 4.1.3 表达产物的 SDS-PAGE 分析 48-49 4.1.4 Western blotting 分析 49-50 4.1.5 酶活性的最适 pH 50 4.1.6 HL-3 不同发育阶段和组织中的分布 50-52 4.1.7 HL-3 不同条件下的诱导表达 52-53 4.1.8 长角血蜱不同发育阶段中天然 HL-3 蛋白的分析 53-54 4.1.9 动物免疫实验 54 4.1.10 RNAi 效果 54-
10、55 4.2 讨论 55-57 第五章 HL-4 基因的克隆、表达及功能特性研究 57-64 5.1 结果 57-62 5.1.1 HL-4 基因全长序列的扩增 57-58 5.1.2 重组表达载体的 PCR 及酶切鉴定 58 5.1.3 表达产物的SDS-PAGE 分析 58-59 5.1.4 Western blotting 分析 59-60 5.1.5 HL-4 不同发育阶段和组织中的分布 60-61 5.1.6 HL-4 的诱导表达 61-62 5.2 讨论 62-64 第六章 全文结论 64-65 6.1 结论一 64 6.2 结论二 64 6.3 结论三 64 6.4 结论四 64-65 参考文献 65-73 致谢 73-74 作者简历 74
