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1、各种显色剂及其配制方法 来源:中国化工论坛 整理:chemnews1碘： 不饱和或者芳香族化合物配制方法 在 100ml 广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。或者在瓶中，加入 10g 碘粒，30g 硅胶 紫外灯含共厄基团的化合物，芳香化合物硫酸铈：生物碱配制方法 10%硫酸铈(IV)+15% 硫酸的水溶液 氯化铁苯酚类化合物配制方法 1% FeCl3 + 50% 乙醇水溶液 . 桑色素(羟基黄酮) 广谱, 有荧光活性配制方法 0.1% 桑色素+甲醇 茚三酮 氨基酸配制方法 1.5g 茚三酮 + 100mL of 正丁醇+ 3.0mL 醋酸 二硝基苯肼(DNP) 醛和酮 配制方法12g 二硝基苯肼
2、+ 60mL 浓硫酸 + 80mL 水 + 200mL 乙醇 香草醛(香兰素)广谱配制方法 15g 香草醛 + 250mL 乙醇 +2.5mL 浓硫酸 高锰酸钾含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛配制方法 1.5g KMnO4 + 10g K2CO3 + 1.25mL 10% NaOH + 200mL 水. 使用期 3 个月 溴甲酚绿 羧酸，pKa酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色.(11)碘碘化钾 (Wagner)试剂:检查生物碱.1 克碘及 10 克碘化钾,溶于 50 毫升水中 ,加热,加 2 毫升醋酸,再用水稀释至 100 毫升.可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.酚类,鞣质(12
3、)三氯化铁 :检查酚类及 ?酸.喷洒剂:15%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.?酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点.(13)铁氰化钾 -三氯化钾:检查酚类,芳香胺类及还原性物质.喷洒剂: 1%铁氰化钾水溶液 ,2%三氯化铁水溶液 .临用前等体积混合.喷洒后处理: 喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷 2N 盐酸,能使颜色加深,纸谱可用烯盐酸洗去喷洒液.(14) 4-胺基安替比林- 铁氰化钾(Emerson 反应): 检查酚类.喷洒剂: I . 2%4-氨基安替比林乙醇溶液;II. 8%铁氰化钾水溶液.或用 0.9%4-氨基安替比林和 5.4%铁氰化钾水溶液方法: 先喷洒 I,再喷洒 II,
4、即显色,或再放入密闭缸中,缸内放 25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色.(15) 对氨基苯磺酸,重氮盐(Pauly 试剂): 检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物.喷洒剂: 4.5 克对氨基苯磺酸,加热溶于 45 毫升 12N 盐酸中,用水稀释至 500 毫升,取 10 毫升稀释液用冰冷却,加 10 毫升冷 4.5%亚硝酸钠水溶液,0 放 15 分钟(此试剂于 0可保存 3 天),用前加等体积 1%碳酸钠水溶液.一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.(16) 对甲苯磺酸: 检查甾体,黄酮,鞣质.喷洒剂: 20%对甲苯磺酸氯仿溶液.喷洒后处理: 100加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点
5、 .含氧杂环及蒽醌类*(17) 三氯化铝 : 检查黄酮体 .喷洒 1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光(18)碱式醋酸铅 : 检查黄酮体.喷洒剂: 饱和碱式醋酸铅(或饱和醋酸铅 )水溶液.于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.(19)醋酸镁 : 检查蒽醌甙 ,甙元及黄酮体喷洒剂: 0.5%醋酸镁甲醇溶液方法: 90加热 5 分钟,呈红色至紫色斑点 .(20)氢氧化钾 : 检查香豆素 ,蒽醌甙及甙元喷洒剂: 510%氢氧化钾的甲醇溶液.于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点.萜类,甾体(21) 三氯化锑 (Carr-Price 试剂): 检查甾体,萜类,皂类.喷洒剂: 25 克三氯化锑
6、溶于 75 克氯仿中(亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液 ).喷洒后处理: 100加热 5 分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光.(22) 五氯化锑 : 检查甾体 ,萜类,皂甙.喷洒剂: 五氯化锑-氯仿或四氯化碳 (1:4),用前新鲜配制.喷洒后处理: 120加热至斑点出现 ,并于紫外线荧光分析灯下检示.(23)香兰醛 -硫酸: 检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油.喷洒剂: 1 克香兰素溶于 100 毫升浓硫酸,或 0.5 克香兰醛溶于 100 毫升硫酸-乙醇(4:1) 中.喷洒后处理: 室温或 120加热观察显色斑点 .(24) 4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸(E.P.试剂): 检查? Az
7、ulene 及?前体 Proazulene.喷洒剂: 0.25 克 4-二甲氨基苯甲醛,溶于 50 毫升醋酸 5 克 85磷酸和 20 毫升水的混合液中( 棕色瓶中保存数月)?:烃室温即成蓝紫色斑点, 前体于 80加热 10 分钟出现蓝紫色斑点.(25) 氯胺 T三氯醋酸: 检查强心甙 .喷洒剂: I. 3%氯仿 T 水溶液新鲜制备.II. 25%三氯醋酸乙醇溶液(能保存数天).10 毫升 I 加 40 毫升 II,用前混合 .喷洒后处理: 110加热 7 分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光.(26) 亚硝酸基铁氰化钠-氢氧化钠(Legal 试剂): 检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲
8、基,常用于强心甙喷洒剂: 1 克亚硝基铁氰化钠溶于 100 毫升 2N 氢氧化钠-乙醇(1:1) 的水溶液.显红色或紫色斑点.(27) 3,5-二硝基苯甲酸(Legal 试剂): 检查强心甙,- 不饱和内酯 .喷洒剂: 1 克 3,5-二硝基苯甲酸溶于 50 毫升甲醇,加入 1N 氢氧化钾 50 毫升.强心甙呈紫红色斑点.糖类(28) 邻苯二甲基苯胺: 检查还原糖.喷洒剂: 0.93 克苯氨,1.66 克邻苯二甲酸溶于 100 毫升水饱和的正丁醇中.喷洒后处理: 105加热 10 分钟 .(29) 2,3,5-Triphenyl-tetrazolium chloride (T.T.C.)：检查
9、还原糖及其他还原物质。溶液 I：4（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液 II：1N 氢氧化钠。喷洒液：I，II，临用前等体积混合。喷洒后处理：100加热 510 分钟，得红色斑点。（30）Keller-Kiliani 试剂：检查 去氧糖，常用于强心甙。试液：100 毫升冰醋酸加三氯化铁试液 0.5 毫升混合均匀.试样 1 毫克加试液 2 毫克溶解后, 沿试官管壁滴入浓硫酸 2 毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部燃呈蓝色.(31) 1,3-二羟基萘-磷酸: 检查糖类 .喷洒液: 0.2%1,3-二羟基萘(Naphthoresorcinol) 乙醇溶液 100 毫升,与 10 毫升
10、 85%磷酸混合.(32) 费林溶液 (Fehling): 检查还原糖.溶液 I: 69.3 克结晶硫酸铜溶于 1000 毫升水中.上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合.氨基酸(33) 茚三酮 : 检查氨基酸及氨基糖.喷洒剂: 0.3 克茚三酮溶于 100 毫升正丁醇 ,加入 3 毫升醋酸;或 0.2 克茚三酮溶于 100 毫升乙醇(或丙酮中).喷洒后处理: 110加热至斑点出现 .(34) 吲哚醌 : 检查氨基酸和一些肽.喷洒剂: 0.2%吲哚醌(Isatin)丙酮溶液,含 4%醋酸;或用 100 毫升 1%吲哚醌丙酮溶液加 10 毫升醋酸.喷洒后处理: 100110加热 10 分钟 .
11、(35) 1,2-萘醌-4-硫磺酸(Folin 试剂): 检查氨基酸.喷洒剂: 新鲜制备 0.02 克 1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于 100 毫升 5%碳酸钠中.喷洒后处理: 室温放于,不同氨基酸出现不同颜色.有机酸(36) 酸碱指示剂: 检查有机酸.喷洒剂: 0.05%溴酚蓝(或溴甲酚绿 ,或溴麝香草酚蓝)的乙醇溶液.(37) 氧化还原显色剂: 检查有机酸.喷洒剂: I. 0.075%溴甲酚绿及 0.025%溴酚蓝的无水乙醇液.II. 0.5%高锰酸钾及 1%碳酸钠.10H2O 的蒸馏水液.临用前,取 I 和 II 按 1:1 混合后喷酒.喷酒后处理: 稳定时间为 510 分钟.对不同的有
12、机酸在纸谱上呈现不同颜色.(38) ? (Acridine): 检查酸.喷洒剂: 0.005%的?乙醇溶剂.紫外线分析灯下呈黄色荧光.(39) 芳香胺 -还原糖: 检查酸.喷洒剂: 芳香胺(如苯氨 5 克)和还原糖( 如木质糖 5 克)溶于 50%含水乙醇中.喷洒后处理: 125130加热出现棕色斑点.展开剂的选择：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为：石油迷Petroleumether/Ethylacetate,petroleumether/Acetone,Petroleumether/Ether,Petroleumether/CH2Cl2, ethylacetate/MeOH,CH
13、Cl3/ethylacetate展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂，就首先尝试使用该类展开剂，然后不断尝试比例，直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件：对的所需成分有良好的溶解性;可使成分间分开;待测组分的 Rf 在 0.20.8 之间，定量测定 在 0.30.5 之间;不与待测组分或吸附剂发生化学反应;沸点适中，黏度较小 ;展开后组分斑点圆且集中;混合溶剂最好用新鲜配制。一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系
14、由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。很多时候,展开剂的选择要靠自己不断变换展开剂的组成来达到最佳效果。一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为 1/3 的混合溶剂, 如果有分开的迹象,再调整比例(或者加入第三种溶剂 ),达到最佳效果; 如果没有分开的迹象(斑点较“ 拖”) ，最好是换溶剂。对于在硅胶中这种酸性物质上易分解的物质，在展开剂里往往加一点点三乙胺，氨水，吡啶等碱性物质来中和硅胶的酸性。(选择所添加
15、的碱性物质，还必须考虑容易从产品中除去，氨水无疑是较好的选择。)分离效果的好坏和所用硅胶和溶剂的质量很有关系：不同厂家生产的硅胶可能含水量以及颗粒的粗细程度，酸性强弱不同，从而导致产品在某个厂家的硅胶中分离效果很好，但在另一个厂家的就不行。溶剂的含水量和杂质含量对分离效果都有明显的影响。温度，湿度对分离效果影响也很明显，在实验中我们发现有时同一展开条件，上下午的 Rf 截然不同展开剂的选择主要根据样品的极性、溶解度和吸附剂的活性等因素来考虑在进行薄层层析时，首先应该知道未知化学成分的类型，其极性的大致归属，从提取液或从色谱柱的流动相极性可知，另外某样品里含多种化学成分先按极性不同大致分，然后细
16、分，对于分离未知的化学物质，展开剂的选择也是一个摸索的过程，不应该仅仅从展开剂考虑，多因素综合衡量!洗脱剂：层析过程中溶剂的选择，对组分分离关系极大。在柱层析时所用的溶剂(单一剂或混合溶剂)习惯上称洗脱剂，用于薄层或纸层析时常称展开剂。洗脱剂的选择，须根据被分离物质与所选用的吸附剂性质这两者结合起来加以考虑在用极性吸附剂进行层析时，当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂;被分离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性物质用吸附性较弱的吸附剂(如以硅藻土或滑石粉代替硅胶)，则洗脱剂的极性亦须相应降低。在柱层操作时，被分离样品在加样时可采用于法，亦可选一适宜的溶剂将样品溶解后加入。溶解样品的溶剂应选择极性较小的，以便被分离的成分可以被吸附。然后渐增大溶剂的极性。这种极性的增大是一个十分缓慢的过程，称为“梯度洗脱 ”，使吸附在层析柱上的各个成分逐个被洗脱。如
