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1、51化验室标准操作规程 编号：zmljykxm-019革兰氏染色镜检的操作规程 第 1 页 共 3 页起草人 庄红梅 起草日期 200512 生效日期 2005.12审核人 张庆芳 审核日期 200512 颁布后重审日期 2005.12批准人 许清泉 批准日期 200512 颁布部门 检验科颁布部门 走马岭中心卫生院革兰氏染色镜检的操作规程1.目的：鉴定 G 阳性菌.G 阴性菌（球菌、杆菌、真菌） 。指导临床用药。2.原理：革兰氏染色法是 1884 年由丹麦病理学家 C.Gtam 所创立的，此方法可将所有的细菌分 G+和 G-两大类，G -菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层
2、较薄，交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G +菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染性的颜色。3.实验器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。4.试剂：4.1 试剂来源：购买，四川迈克。4.2 试剂合组成:R1 结晶紫 110ml R2 碳酸钠 110 ml R3 碱性碘液 110ml R4 丙酮酒精 120mlR5 碱性复红 110ml5.标本采集与处理：5.1 阴道,子宫等分泌物应由医生采集,收集于
3、无菌试管内送检。5.2 载玻片的预处理:5.2.1 载玻片用前以乙醇擦拭脱脂，经干燥、清洁、无油污、无划痕的新载玻片制备涂片。5.2.2 在玻片背面一端的 1/3 处注明编号。5.3 涂片：5.3.1 用棉签可直接在玻片上均匀涂抹.525.3.2 菌液涂片时,用接种环沾取菌液,点在玻片上.化验室标准操作规程 编号：zmljykxm-019革兰氏染色镜检的操作规程 第 2 页 共 3 页起草人 庄红梅 起草日期 200512 生效日期 2005.12审核人 张庆芳 审核日期 200512 颁布后重审日期 2005.12批准人 许清泉 批准日期 200512 颁布部门 检验科颁布部门 走马岭中心卫
4、生院5.3.3 菌落涂片时,先取生理盐水一滴置玻片上,用接种针挑取菌落,在盐水中涂布。6.染色方法:6.1 将标本均匀涂布于玻片上,自然干燥,火焰固定。6.2 冷却后加 R1、R2 各两滴初染 30 秒后水洗。6.3 用 R3 媒染 30 秒.水洗后用 R4 脱色至无兰色脱落为止(约有 5-10 秒),水洗。5.4 用 R5 复染 5 秒,水洗,待干,镜检。7.镜检:7.1 取已干燥的涂片,用低倍镜览片,再用高倍,最后用油镜观察,并在已干燥的涂片滴 1-2 滴香柏油,仔细观察.7.2 判断菌体的革兰氏染色反应性,呈紫色为 G+菌,呈红色为 G-.8.报告方式: 检出革兰氏阳性球菌,革兰氏阳性球
5、菌.检出革兰氏阴性球菌，革兰氏阴性球菌。9.实验完后的处理:9.1 显微镜头的处理:用擦镜纸将油镜头的油擦去,再用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦 2-3 次,最后用干净的擦镜纸将镜头擦 2-3 次.注意向一个方向擦拭.9.2 废弃标本和污物的处理:9.2.1 染色玻片放入 5%84 消毒液中浸泡 30-60 分钟,消毒液要每天更换.9.2.2 废弃标本及污物应弃于有盖的污物桶内,由专人收并送焚烧炉内彻底焚化.10.注意事项:10.1 涂片应均匀,厚薄适度,自然干燥后再加热固定.10.2 脱色要至无兰色脱落为止.53化验室标准操作规程 编号：zmljykxm-019革兰氏染色镜检的操作规程 第 3 页 共 3 页起草人 庄红梅 起草日期 200512 生效日期 2005.12审核人 张庆芳 审核日期 200512 颁布后重审日期 2005.12批准人 许清泉 批准日期 200512 颁布部门 检验科颁布部门 走马岭中心卫生院10.3 复染时间不可过长,以免细菌均染成革兰氏阴性,定期检查各种染液质量,以免发生误差.11.临床意义. 11.1 鉴别细菌 11.2 选择药物12.参考文献:全国临床检验操作规程(中华人民共和国卫生部医政司)修改代号 修改单号 修改人/日期修改状态/日期 修改记录54
