新修订GMP微生物控制学习总结-通篇

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1、一 开篇 我国药品微生物检验控制-发展与机遇胡昌勤1.中药饮片增加微生物控制指标的原因：能被用于微生物生长的水为活度水2.2000 版就想无菌 4 天，后来博弈后暂未上，在进出口部门推进下 2005 版上了（与国际接轨的重要性）3.改版原因：ICH 观察国身份，协调一致，利于国计民生。4.修订目标：全面与国际接轨；为从终产品检验向过程控制转变服务。新的微生物检验标准体系将推动药品微生物实验室从简单的终产品检验实验室向微生物风险调查分析型实验室方向发展。辉瑞-氟康唑注射液案例。5.修订内容：A.形成微生物检验的完备标准体系（ 15 个左右的检查方法及指导原则）B.微生物检测系统与国外完全一致C.

2、对检验环境进行了重大修订6.无菌检验的趋势是 B+A 或 D+隔离器；微生物及阳性间 D+生物安全柜；现下要求各省级药检所本版药典达到 B+A 和 D+B7.重试的概念 无菌、微生物不能像理化 OOS 那样复试。重试的概念。8.一个流程图（附件 1） ，微生物检验过程中的关键点过程控制9.新的微生物检验理念A.实验者由严格按照标准检验，想依据统一的原则，选择适宜的方法转变B.（样品前处理方法（经验证） 、细菌的选择性培养（中间产品检验方法可与药典不同） 、细菌的鉴定与溯源分析）二 新修订 GMP 微生物控制要点及参数放行实施展望-张华1.霉菌现在缺乏有效的鉴定及控制方法（双氧水、碱）2.地漏设

3、计和空气阻断（附录 1 29）3.更衣间压差控制应该是相邻区域两道门之间分别有压差表或一三门之间有压差表（附录 1 30）4.O3 只适合用于封闭纯化水系统的消毒；也不建议使用甲醛对空间进行日常消毒（通常首次启用或长时间停用后启用时使用） ，甲醛一般用于没有空调的密闭空间，如自循环体系或医疗室等（附录 1 39）5.推荐一本书（附录 1 21 条） 生物安全-原理与准则 ，里面介绍了人体什么部位长什么微生物（http:/ 1 58） ，可参见 ICH Q6A7.培养基模拟灌装实验不一定是从灌装开始，应该叫培养基模拟实验（如果制剂是从无菌配制开始，则这一部分也必须模拟，而不能只从灌装开始） （附

4、录 1 47）8.无菌药品包装容器的密闭性应当经过验证（验证指南中有方法，目前可使用） （附录 1 77）9. 附录 1 第六十三条 任何灭菌工艺在投入使用前，必须采用物理检测手段和生物指示剂，验证其对产品或物品的适用性及所有部位达到了灭菌效果。A 广州百特总部有专门一个部门负责制备生物指示剂，测定芽孢数、测定 D 值。B 生物指示剂中芽孢数量是关键，不是测增值体看是否能用。能够测定 D 值最好了（设备贵）D 值 Z 值 FO 值（这几个值的概念）10.病毒的去除或灭活（附录 2 30） ，这部分内容上海走在全国前列11.GMP 检查员建议无菌检验应在 B+A 或相当的环境中进行。12.最终灭

5、菌制剂的参数放行（略）三 洁净监测技术及中国药典2015 版洁净监测指导原则解析-张亚杰1. 中国药典2015 版洁净监测指导原则 只适用于药品分析实验室2. 指导原则不是强制性附录（分前言、人员、确认、监测、微生物控制五部分）3.各级别洁净环境物理参数建议标准及最长监测周期洁净度级别过滤完整性 气流组织 空气流速 换气次数 压差 温度 相对湿度A 单向流监测周期24 个月0.25-0.5m/s监测周期12 个月B 单向流（静态）监测周期24 个月 非单向流单向流（静态）0.25-0.5m/s监测周期12 个月 非单向流单向流 非单向流 40-60h-监测周期12 个月 1C 非单向流20-4

6、0h-监测周期12 个月D检漏实验监测周期24 个月非单向流6-20h-监测周期12 个月洁净区与非洁净区之间10Pa不同洁净区之间压差10Pa监测周期每周一次20-24监测周期每次试验45-65%监测周期每次试验4.监测所用培养基为胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA） ，当监测结果有意思真菌或考虑季节因素影响时，可增加沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA） 。培养时间对比表 15 版药典后环境监测碟培养至少 3 天名称 ChP（2015 ） GB/T 16293-2010TSA 3 天 不少于 2 天SDA 5 天 不少于 5 天建议：生产过程也适当延长沉降菌碟的培养时间。5.P78 表 2 推荐的药品洁

7、净实验室的监测频次及项目（菌检室人员重点看）6.无历史数据的实验室浮游菌、沉降菌警戒限、纠偏限制定（P80）7.建议对受控微生物环境的微生物进行到“种”水平的检测，且关键区域分离的菌落优先鉴定。8.微生物监测的重要性-P95（扫描页）9.目前悬浮粒子监测方法（光散射发-常用、光衍射法、光学显微镜法）：悬浮粒子数是洁净环境定级的依据（其它如浮游菌、沉降菌等均为该级别的监测指标）仪器的校准：应符合 JJF 1190-2008 的标准10.浮游菌监测：采样器主要有被动沉降类、动力分离类、其他类别（国标法采用的是狭缝式、离心式或真空式动力分离原理） ；选择采集器时应注意灵敏度、采样效率、可重复性、使用

8、方便、利于微生物存活等特性11.浮游菌监测时应注意，采样器消毒后先不放入培养皿，开启仪器至少 5min 后，使消毒剂完全蒸发后采集。12.沉降菌：12.1 用于环境监控的培养基须特别防护，最好双层包装和终端灭菌，如不能终端灭菌，那么在使用前应进行 100%预培养以防止外来污染物带入环境中及避免出现假阳性。12.2 沉降菌碟暴露失水会导致降低某些微生物的生长能力，研究表明，单向流暴露 4 小时，平板失重 16%；故而最后选择 12 小时更换一次，累积计数。12.3 进入 A 级的平板，三层透明包装是最合适的。12.4 进入隔离器的平板其最内层包装必须是过氧化氢蒸汽不可渗透的，以免假阴性。应使用为

9、隔离器设计的培养基平板。12.5 日常监测：老师的建议是每次、每个区域都要有阴性对照；A 级区域采样点数目不小于 3 个且每个点平皿数不小于一个。13 表面微生物监测后，应使用消毒剂或杀孢子剂擦拭以清除培养基的残留。14.表面微生物监测方法验证时应注意取样回收率应在 50%-200%范围内，各种表面均应在生物安全柜内被模拟；计数方法验证应考虑抑菌成分的影响。四 无菌药品生产过程中的微生物控制及验证要素-马义岭1.药物污染及降低风险举例（P131）2.关键区域人员的验证要素（人员更衣验证、无菌操作模拟验证、消毒剂效果验证、人员表面微生物监测、定期无菌操作模拟、无菌操作考核）3.更衣程序验证策略（

10、P145）4.洁净室的灯光照明系统宜采用内嵌至棚顶的吸灯，和棚顶同面，利于清洁。5.设备微生物污染示例（P154）6.制药用水微生物限度参考值（表中把各种水都定了警戒、纠偏，并进行定期监测）P1577.建立菌落地图的方法（P161）8.消毒剂选择（P169）9.消毒剂应有微生物负荷检验、质量标准、检验报告10.USP 1072 适用于生产环境的消毒剂相关内容分析（P177）11.国内消毒剂验证可参考的标准： GB 15981-1995 第三篇 液体消毒剂消毒效果评价方法与标准12.建议洁净室的清洁、消毒应采用“双桶法” 。13.介绍了微生物在线检测技术（传统的缺点、在线检测原理、系统验证） 、

11、环境监测系统的组成五、无菌检查及疑似结果的溯源性调查-戴翚1.洁净室使用次数与浮游菌的关系（68 月微生物繁殖旺盛是之一，还有近三年开始的国抽集中在这段时间检验，使用频率增大、样品增多等原因）2.环境微生物归属方法（附件 2）3.感染性微生物相对危险度等级：2 级（配备生物安全柜 II A2 即可） ，A2 生物安全柜结构图（P216）4.隔离器与传统洁净技术的比较（P221）5.微生物实验室常用菌株（附表 3）6.两个说法：G-球菌一般在医疗中的人感染分离出来；G+球菌一般在实验室、空气介质中常见（非观点） G-杆 水、液态药液 7.微生物检验的方法适用性试验（微生物检验方法的验证试验涉及较

12、多方面内容，企业只需要进行检验方法的适用性确认） 样品制备过程（表面活性剂、中和剂的微生物无毒性、处理方法的微生物兼容性）样品检查过程（可用的去除活性或中和活性的方法）新建方法 方法验证与方法适用性药典方法 方法转移与方法确认（其他成熟方法） （ 部分菌株的验证）有案可查、溯源性；建立实验室自身的方法依据体系其它：准确度、精密度、专属性、检测限、定量限、线性、粗放性8.常用中和剂（0.1%大豆卵磷脂、 0.7%吐温 80）卵磷脂、吐温及 L-组氨酸用于中和醛类、酚类及季铵盐类化合物卵磷脂中和氯已定，吐温 80 中和双三氯酚及汞化合物9.表面活性剂 HLB 值越接近 20，其亲水性越强；相反，越

13、接近于 0，亲油性越强10. 薄膜过滤法冲洗时，最好采用分次（100ml/次）的方法，以提高方法的回收率（P234）11.菌种传代推荐保存方式：-80，甘油：肉汤=1:1 或者甘油：TSA=1:1 的 11.5ml 冻存管保存。应选取增殖体（调整期、对数期、稳定期、衰亡期） 。0.5 麦氏浊度的相当于 106CFU，可比例稀释得到 102 悬液。12.菌种从保藏中心获得 0 代后，第一代就可以用作工作菌株（WHO 的规定） 。13.可参考的工作菌株保藏流程图（P235） 。14.建议使用无菌级过氧乙酸喷雾手消器。15.三联集菌器较合适，最多浪费一桶（两个阴性、两个样品、一个或两个阳性桶） 。1

14、6.原始记录列好下列信息：样品信息（表头）&方法信息、仪器信息及状态、检验结论（前置，便于核对） 、校对& 复核信息（前置） 、材料信息、试剂信息、培养基信息、检验方法/过程描述、检验结果记录、过程监控信息（监控方案、培养调剂、培养结果） 、是否有偏差及变更等偏差调查表包含：样品信息、环境保障调查、仪器运转、环境监控、检验操作调查、培养基、检验用具、阴性、阳性、操作细节、结果判断调查等。17.结果判断前提：阳性必须显示阳性反应，阴性必须无菌生长。供试管浑浊，即判定不合格除非能证明实验结果无效，即生长的微生物非供试品所含，如：设备、环境的微生物监测结果超标，分离得到同属菌回顾实验过程，发现污染因

15、素鉴定微生物确认是操作引入的无菌试验经确认无效，可以重试。18. 葡糖糖酸钙注射液与氯化钠注射液 安瓿表面杆菌污染案例（p243）引申，外表消毒方式表安瓿表面消毒方案比较表a. 杀孢子剂（过氧乙酸）喷洒后立即（3、5、10min）用 75%乙醇钝化，再用湿棉签擦拭取样b. 酒精灯过火 1s（3、5、10s）直接用湿棉签擦拭取样消毒方案 作用时间 残留菌落数 菌属类型立即 2cfu Bacillus（杆菌）3min 0杀孢子剂5 010 01s 4 Bacillus（杆菌） Brevibacillus（短小芽孢杆菌）3 10 Bacillus（杆菌） Brevibacillus（短小芽孢杆菌）Penibacillus（类芽孢杆菌 ）5 0过火10 0实验表明，杀孢子剂具有较好的表面消毒能力，过火的经典方法应至少过火 5s 以上。19.保证药品微生物检验结果可靠的有效途径及无菌溯源调查（决策图）药品微生物实验环境微生物的监测 药品的微生物检测微生物鉴定结果的准确性过程微生物信息的全面性环境微生物与阳性结果的比较结论20.微生物警戒限与行动限的意义从污染微生物的种类、数量进行分析，了解环境情况的潜在的变化，及时分析原因，采取行动，使环境保持在要求的条件下。a. 若微生物数量远低于警戒限，应考虑限值的合理性b. 若微生物上升趋势明显，应考虑操作、清洁流程是否合