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1、1老年脑标本 5 羟色胺转运体的表达作者：石葛明 王磊李双成崔慧先刘砚星王伟【摘要 】 目的 观察老年人脑标本 5 羟色胺转运体的表达。方法 以免疫放射自显影技术显示 5 羟色胺转运体在人脑标本的分布和强度。结果 5 羟色胺转运体免疫反应标记强度在老年组明显降低，中缝背核、尾状核、壳及整个中脑的 5 羟色胺转运体免疫反应强度比青年组分别降低了 1622%(P005) 、1764%(P 005) 、3125%(P005) 和 2558%(P001) ，具有显著差异。结论 老年人脑标本 5 羟色胺转运体的低表达表明在衰老过程中 5 羟色胺转运体随年龄增加而表达减少。 【关键词】 5 羟色胺转运体；
2、免疫放射自显影；脑5 羟色胺转运体（serotonin transporter, SERT）是位于 5 羟色胺能神经末梢的一种膜蛋白1 ，其表达变化直接影响 5 羟色胺能神经元参与的神经活动。SERT 作为常用抗抑郁药物的作用靶点2 ，其在老龄后的蛋白表达变化报道较少。目前关于 SERT 老龄改变的结果多基于 SERT 配基的放射自显影 3,4及神经显像研究5,6 ，因受研究方法和所使用 SERT 配基特异性不高的限制，研究结果多不一致。本研究拟利用免疫放射自显影技术对老龄人脑标2本脑内 SERT 蛋白的表达进行分析，确定 SERT 蛋白表达的老龄改变，以期为今后临床应用正电子发射计算机体层扫
3、描（PET) 及单光子发射计算机体层扫描（SPECT）检测脑内 SERT 变化，诊断老年相关性疾病提供实验依据。1 对象和方法11 对象将死于非中枢神经系统疾病的人脑标本 12 例分为两组：青年组 6 例，年龄 2436 岁，平均（3267441 ）岁；老年组 6例，年龄 6275 岁，平均（696748 ）岁。12取材脑标本在其死亡后 1222 h 自颅内取出。按需要将脑切成厚约 5 mm 脑块，经 10%甲醛浸泡固定（96 h） 、常规脱水、透明、石蜡包埋。13 免疫放射自显影石蜡块行常规切片（8 m） 、裱片及脱蜡入水；001 mol/L3枸橼酸缓冲液（pH 60）抗原修复、02% Tr
4、itonX100、8% 正常羊血清预处理（4 ，1 h） ；1100 小鼠单克隆抗 SERT 抗体孵育（4，48 h） ；125I 标记的羊抗小鼠 IgG（1 Ci/ml）室温孵育 1 h。125I 标记的切片经洗片、风干，与贴有 125I标准、14C标准的载片置于放射自显影盒内，载片上覆以 Biomax MS 胶片 (REF 832 6886)，曝光 10 d（脑干） 、14 d（纹状体区）行显影、定影。对照实验不用一抗，其余步骤相同。以固蓝复染上述切片，用于图像分析时的结构辨认。14 图像密度分析扫描胶片（300 dpi）以 TIFF 格式储存,用 AIS 软件测量感兴区密度。按 Paxi
5、nos 等编著的人脑图谱, 镜下辨认复染切片的核团，用鼠标勾画相应核团图像边界。以 125I标准校正的 14C标准 dards 曲线测量边界内图像密度，计算胶片图像与切片对应核团的 125I 强度。所得值减去对照组相同核团背景标记值为特异性标记结果（nCi/mg） 。相关数据采用 t 检验。2 结果21 SERT 标记的一般观察4在所观察的脑区中，中脑除大脑脚底和红核以外的大部分区域均含有 SERT 免疫反应标记信号；端脑的尾状核、壳以及苍白球亦有 SERT 免疫反应标记信号存在。在这些标记区域中，以中脑中缝背核的 SERT 标记信号最强。两组无 SERT 标记信号分布上的差异，但存在 SER
6、T 标记信号强度的区别，老年组 SERT 标记强度低于青年组（图 1） 。22 SERT 标记的强度分析见表 1。除苍白球外，老年组中缝背核、尾状核及壳的 SERT免疫反应强度比青年组相同区域分别降低了1622%、1764% 、3125% （P 005 ） ；整个中脑水平降低了2558%(P001) 。所观察的对象中缝背核、尾状核、壳以及中脑每十年分别降低大约 324%、353% 、625% 和 512%。表1 5 羟色胺转运体在老年脑标本不同脑区的标记强度( 略)3 讨 论位于 5 羟色胺能神经末梢的膜蛋白 SERT1通过摄取突触间隙的 5 羟色胺而中止其对突触后神经元的作用，是反映 5 羟
7、色胺能神经元功能活动的重要指标7 。我们通过对脑内 SERT 投射源区(中缝背核) 和 SERT 投射靶区（尾状核、壳和中脑等）的免疫放射5自显影研究，发现老年组 SERT 蛋白表达明显低于青年组，表现出随年龄的增加而表达降低，其蛋白表达降低程度相当于每十年减少大约 3%6%。这一研究结果与近年利用 SPECT/PET 研究在体健康人脑内所观察到的结果基本相符5,6 ，即脑干 间脑 SERT 和配基的结合信号与年龄增加呈负相关(SERT 配基结合信号每十年降低4%10%)。有研究表明，SERT 在脑内的变化与人类的神经精神疾病密切相关8,9 。躁狂病人中脑 SERT123ICIT 结合信号明显
8、增加9 ，抑郁病人则出现不同脑区 SERT123ICIT 结合信号的显著降低8 。有实验证实，随着人类寿命的延长、老龄人口的增加，老年人出现抑郁症状的频率增高10，11 ，老年人易患抑郁是否与其较低的 SERT 蛋白表达有关值得进一步的深入研究。近年分析 SERT 在脑内变化的年龄关系，主要利用 SPECT/ PET11,12的配基神经显像技术观察活体5,6以及利用配基放射自显影方法观察人脑标本3,4 的 SERT 结合位点信号强度的改变，与使用这两种方法的研究相比，我们采用以 SERT 特异性抗体识别抗原的免疫放射自显影方法，检测的是脑组织内蛋白含量的变化，可真实反映脑内 SERT 蛋白含量
9、的改变，而前两种方法检测脑内 SERT 标记信号强度变化的方法属受体与配基的结合，所得结果并非 SERT 蛋白的表达差异。有研究表明，当脑内 SERT 结合位点强度（密度）改变时，SERT 蛋白含量仍可保持在正常的表达水平12 。另外配基神经显像技术所使用的配基主要是 CIT，CIT除结合 SERT 外，还能结合脑内 DAT，脑内大部分区域都有 SERT6和 DAT 的交织分布1 ，因而，应用 CIT 配基显像技术难以排除 DAT 标记信号的干扰，实际所得到的结果非 SERT 在人脑内的真实水平，此外，由于配基放射自显影以及 PET/SPECT 配基显像技术较低的分辨率和配基较高非特异性结合的
10、特点，因而很难分析较小核团 SERT 的变化，这些都可能是造成目前研究报道结果不完全一致的原因36 。也可能是我们目前的研究结果与以往应用配基放射自显影在尸检标本发现基底神经节（壳及尾状核）和中缝背核SERT 结合信号并无年龄变化结果不一致的原因 3,4 。通过对这些人脑标本的免疫放射自显影研究，我们证实老年人脑内 SERT 蛋白的表达降低，这就要求在应用 PET/SPECT 分析脑内 SERT 变化的研究中，充分考虑年龄这一重要的影响因素。另外，老年人脑内 SERT蛋白的低表达与老年人易患抑郁症之间是否存在相关关系有待进一步的研究证实。【参考文献】1 Miner L, Schroeter S
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