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1、1羟苯磺酸钙胶囊不同含量测定方法的比较【摘要】 目的 建立 UV 吸收系数法和 HPLC 法测定羟苯磺酸钙胶囊的含量，并与文献方法进行比较。方法UV 吸收系数法:溶剂为水，测定波长为 301 nm，吸收系数 1%1 cm 为 188（以C12H10CaO10S2 计） ；UV 对照品法: 溶剂为水，测定波长为301 nm；铈量滴定法；HPLC 法: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.2% 磷酸二氢钾 甲醇（体积比 9010）为流动相；检测波长为 301 nm。 结果 UV 吸收系数法、UV 对照品法和铈量滴定法 3 种方法的结果基本一致， HPLC 法测定结果较其他 3 种方法的低。结论 H
2、PLC 法的可以有效分离可能存在的降解产物，比其他 3种方法更能有效反映产品的真实质量，有利于产品的质量控制。 【关键词】 羟苯磺酸钙胶囊；高效液相色谱法；紫外吸收系数法 Abstract:Objective To establish an HPLC and UV spectrophotometry for analyzing the content of calcium dobesilate in calcium dobesilate capsules, and compare the results with those of references.MethodsIn UV absorba
3、nce coefficient, water was used as the solution, the detection wavelength was 301 nm. The absorption coefficient was 188(calculated as C12H10CaO10S2）.In control method, water was used as solution And the detection wavelength was 301 nm. In HPLC, samples were analyzed on a C18 2column by using 0.2% p
4、otassium dihydrogen phosphatemethanol (9010) as the mobile phase. The detection wavelength was 301 nm.Results Result among UV absorbance coefficient, control method and(3) was conformable, but the result of HPLC was lower than others.Conclusion Degradated substances or other related substances can b
5、e separated effectively by HPLC. So the method of HPLC was more suitable for quality control than other three methods. Key words:calcium dobesilate; HPLC; bsorption coefficient; UV 2,5羟苯磺酸钙（羟苯磺酸钙） ，是一种微循环血管改善剂，能选择性作用于毛细血管壁，调节和改善毛细血管的渗透性和脆性，主要用于各种原因引起的毛细血管疾病，是目前唯一防治糖尿病视网膜病变的有效药物。 目前，对本品的含量测定文献报道的有 UV
6、 对照品法1，2和铈量滴定法3 ，本文建立 UV 吸收系数法和 HPLC 法用于本品的含量测定，并与文献方法进行比较分析，现将结果报道如下。 1 仪器与试药 日本岛津 UV2450 紫外分光光度计，Waters2996 Series高效液相色谱仪,Mettler100 型电子天平。羟苯磺酸钙对照品（质3量分数：95.0%，批号：100573-200401，由中国药品生物制品检定所提供） ，羟苯磺酸钙胶囊（批号：0705301、0705302、0705303，规格：500 mg，由国内某药厂提供） ，对苯二酚（广州化学试剂厂） ，甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。 2 UV 吸收系数法 2.1
7、测定方法 取本品 20 粒内容物，精密称定，研细，混合均匀，精密称取适量（约相当于羟苯磺酸钙 100 mg） ，置 100 mL 量瓶中，加水适量振摇使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液 5 mL，置 200 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外 可见分光光度法（中国药典 2005 年版二部附录 A） ，在 301 nm 的波长处测定吸光度；按 C12H10CaO10S2 的吸收系数为 1884 计算即得。 2.2 专属性考察 2.2.1 溶剂的选择 根据文献和试验，本品在水中极易溶解，故选用水为溶剂。 2.2.2 专属性与测定波长的选择 取羟苯磺酸钙对照品适量，加水溶解
8、并稀释制成每 1 mL 中约含羟苯磺酸钙 25 g 的溶液，照紫外-可见分光光度法，在 250350 nm 的波长范围内扫描。另取空白辅料和胶囊壳，同法配置成空白辅料的水溶液，在 200350 nm的波长范围内扫描。图谱见图 1。结果表明，羟苯磺酸钙在 301 4nm 波长处有最大吸收；空白辅料和胶囊壳的水溶液在 301 nm 处无干扰吸收，不影响本品的测定。 2.3 线性试验 取供试品内容物适量，精密称定，用水制成每 1 mL 中含羟苯磺酸钙 0.25 mg 的溶液，分别精密量取 1.0、3.0、5.0、7.0 及 10.0 mL，各置 50 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别制成每
9、1 mL 中含羟苯磺酸钙 5、15、25、35 及 50 g 的供试品溶液，分别于 301 nm 波长处测定吸光度，以吸光度（A ）对质量浓度（）作线性回归，得回归方程：=0.1236A+0.0229，r=0.999 7，n=5，表明羟苯磺酸钙的质量浓度在 550 g/mL 范围内与吸光度线性关系良好。 2.4 回收率试验 取本品中各空白辅料，按处方比例配制，分别按标示量的80%、100%、120%加入羟苯磺酸钙对照品，加水适量配制成每 1 mL 中含羟苯磺酸钙 20、25、30 g 的溶液各 3 份，在 301 nm 的波长处测定吸光度，计算，测得平均回收率为 99.99%（RSD 为0.1
10、2%，n=9） 。 2.5 重复性试验 取同一批号（0705301 ）样品 6 份，按“2.1”项方法测定含量，结果分别为 100.8%、101.2% 、100.6%、101.3%、100.7%和 100.9%，平均含量为 100.9%，RSD 为 0.3%（n=6 ） 。 2.6 稳定性试验 5取供试品溶液，分别于 0、2、4、6 、8、10 h 测定吸光度，吸光度基本不变，RSD 为 0.3%。 3 HPLC 法 3.1 色谱条件 采用 Kromasil C18 柱（5 m，4.6 mm250 mm） ，以 0.2%磷酸二氢钾 甲醇（体积比 9010）为流动相，检测波长为 301 nm。该
11、色谱条件下，羟苯磺酸钙的理论板数为 4800，保留时间约为 10 min，对苯二酚的保留时间约为 14 min。见图 2。 3.2 专属性考察 3.2.1 酸降解产物的检测 取本品适量，加 1 mol/L 盐酸溶液溶解并稀释制成约 2 mg/mL 的溶液，放置 15 h，加 1 mol/L 氢氧化钠溶液中和后，进样，记录色谱图，见图 3。 HPLC chromatogram of sample in acid solution 3.2.2 碱降解产物的检测 取本品适量，加 1 mol/L 氢氧化钠溶液溶解并稀释制成约 2 mg/mL 的溶液，放置 15 h，加 1 mol/L 盐酸溶液中和后，
12、进样，记录色谱图，见图 4。 3.2.3 氧化产物的检测 取本品适量，加 3%过氧化氢溶液溶解并稀释制成约 1 mg/mL 的溶液，放置 4 h，进样，记录色谱图，见图5。 3.2.4 光降解产物的检测 取本品适量，加水溶解并稀释制成约 1 mg/mL 的溶液，置 4 500 LX 光照下照射 24 h，进样，记录色谱图，见图 6。 6取本品适量，置 4 500 LX 光照下照射 10 d，加水溶解并稀释制成约 1 mg/mL 的溶液，进样，记录色谱图，见图 7。检测结果显示，各条件下的降解物质在该色谱条件下均能达到较好的分离。 3.3 线性试验 取供试品内容物适量，精密称定，用水制成每 1
13、mL 中含羟苯磺酸钙 0.202 3 mg 的溶液，分别精密量取1、5 、10 、20 、35、50 及 100 L，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积（A）对进样量（m）作线性回归，得线性回归方程 m=1.464810-6A-0.03717，r=0.999 9（n=7） 。 3.4 回收率试验 取本品中各空白辅料，按处方比例配制，分别按标示量的80%、100%、120%加入羟苯磺酸钙对照品，加水适量配制成每 1 mL 中含羟苯磺酸钙 0.16、0.2 、0.24 mg 的溶液各 3 份，按“3.9”项方法测定，平均回收率为 99.67%,RSD 为 0.41%(n=9)。 3.5 精密度试
14、验 精密量取供试品溶液 20 L，注入液相色谱仪，重复进样 6 次，测得羟苯磺酸钙峰面积的 RSD 为 0.23%。 3.6 重复性试验 取同一批号（0705301 ）样品 6 份，按“3.9”项方法测定含量，结果分别为 100.9%、100.8% 、100.8%、100.9%、100.3%和 100.3%，平均含量为 100.7%，RSD 为 0.3%（n=6 ） 。 3.7 稳定性试验 7取供试品溶液，分别于 0、2、4 、 6、8、10 h 进样测定，羟苯磺酸钙的峰面积基本不变，RSD%为 0.32%。 3.8 方法耐用性考察 取 3 条不同品牌的色谱柱，分别测定，各系统适用性参数见表1
15、。结果表明 ，本方法耐用性良好。表 1 方法耐用性考察结果 3.9 含量测定方法 取本品 20 粒内容物，精密称定，混合均匀，精密称取适量（约相当于羟苯磺酸钙 250 mg） ，置 100 mL 量瓶中，加水适量，振摇使溶解后加水稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液 2 mL，置25 mL 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取 20 L，注入色谱仪，记录色谱图；另取羟苯磺酸钙对照品 20 mg，精密称定，置100 mL 量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。 4 4 种含量测定方法的比较 分别采用以上建立的 UV 吸收系数法、 HPLC 法和文献报道的UV 对照品法
16、1及铈量滴定法2 对 3 批样品进行含量测定，测定结果见表 2。表 2 4 种含量测定方法的结果比较 标示量 5 讨 论 5.1 羟苯磺酸钙的分子结构中含有 2 个酚羟基，决定了其光不稳定性和易氧化等化学性质4 。为此，本文建立了专属性较高的高效液相色谱法，该方法可有效分离羟苯磺酸钙在合成过程中引入的杂质对苯二酚以及在储存过程中产生的其他降解产物。 85.2 从表 2 的结果分析，铈量滴定法、UV 对照品法和 UV 吸收系数法 3 种方法的结果基本一致，而 HPLC 法的结果较前 3 种方法低约 0.3% 1.7%，表明 HPLC 法对可能存在的降解产物有较好的专属性和分离效果，较其他 3 种方法更能有效反映产品的真实质量，有利于产品的质量控制和政府监管部门的稽查监督工作。 5.3 国家标准收载的铈量滴定法，需要使用剧毒物质三氧化二砷标化滴定液，不利于实验室的管理和环境的保护，建议控制使用或尽量避免使用该方法。 5.4 5
