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1、1. 目的规范 QTRAP5500 型质谱仪的操作和维护。2. 范围适用于 QTRAP5500 型质谱仪的操作和维护。3. 职责QTRAP5500 型质谱仪的操作与维护人员负责执行此规程。4. 操作步骤4.1 开机次序4.1.1 开启压缩空气管道及液氮罐阀门，确认 Curtain Gas 在 0.35Mpa，Gas1/Gas2在 0.7Mpa，Exhaust Gas 在 0.35Mpa；4.1.2 开启 UPS，转换到逆变状态；4.1.3 打开主机电源开关（ON 状态） ，约 30 秒后机械泵自动启动。Vacuum Status的指示灯闪烁，直至指示灯不再闪烁，真空稳定仪器可正常使用；4.1.
2、4 开启电脑，打开 Analyst software，即可进行操作。4.2 PPG 质量校准4.2.1 在 project 工具条中选择 installation，在硬件配置 Hardware Configure 菜单下 Active 激活 MassSpecOnly（只连质谱机） ，硬件配置表中 MassSpecOnly出现绿勾后，表示 API 质谱仪主机与计算机通讯正常，关闭 Hardware Configure Editor。4.2.2 点击左边工具菜单 Navigation Bar 的 Tune 进入调谐模式。此时应听见 “扑”开气的声音，Exhaust 及 Gas1/Gas2 在此时已
3、打开，仪器处于可使用状态（ready ） ，软件右下角图标为绿色。4.2.3 双击左边工具菜单中的 Mannual Tuning，打开一个空白质谱参数设置及运行窗口，进入手动调谐模式。4.2.4 点击 File open 钮，选择 Acquisition Method 打开四极杆质量校准方法列表，根据要校准的目标（Q1 正离子、Q1 负离子、Q3 正离子、Q3 负离子）选择相应的方法打开。4.2.5 进质量校准溶液，对于负离子校准，采用 NEG PPG310-5 标准溶液，针泵流速为 10L/min；对于正离子校准，采用 POS PPG210-7 标准溶液，针泵流速为 5L/min。把质量校准
4、溶液吸入针筒，用集成的针泵连续进样。设立使用的针筒的内部直径尺寸为 4.61mm，设定流速为 5 或 10，单位为L/min，按 Start Syringe Pump 开针泵。离子阱校准采用 ES Tuning Mix。4.2.6 调整喷雾针的垂直位置，针垂直位置约为 5mm 左右即可。4.2.7 采集 PPG 标准品质谱数据，在质谱参数设置及运行窗口中回到 MS method。扫描速度分别选择 10、200、1000、2000Da/s，用 MCA ON 方式采集,分别设定 10、50、50、100 cycles，点击 Start。离子阱校准扫描速度分别选择 50、250、1000、10000
5、、20000Da/s，所有都设定 50 cycles。在右边的质谱图中按鼠标右键出现一菜单，选菜单中 Open file，得到一张几个不同扫描区的独立质谱峰的质谱图。M/Z906.6 在 Q1 Positive Mode 和 Q3 Positive Mode 扫描速度为 10、200Da/s 时响应值分别不应低于 1.4107 和6.8107；M/Z933.6 在 Q1 Negative Mode 和 Q3 Negative Mode 扫描速度为10、200Da/s 时响应值分别不应低于 1.0107 和 4.0107。M/Z922.0 在 ER Positive Mode 扫描速度分别为 5
6、0、250Da/s 时响应值分别不低于 2.0107 和3.2107；M/Z601.9 在 ER Negative Mode 扫描速度分别为 50、250Da/s 时响应值分别不低于 4.8107 和 1.2107。激活其中一个 PPG 质谱峰的图，然后在 Tools 菜单中选 Calibrate From Spectrum，出现 Mass Calibration Options 窗口，从 Standard 选择合适的标准品类型 PPGs Pos(正离子 )或 PPGs Neg(负离子)，校准的目标设备是 Q1 还是 Q3，目标分辨率是单位分辨率 Unit（半峰宽 0.70.1amu） 、还是
7、高分辨率 High（半峰宽 0.50.1amu） ，正在校准的是正离子还是负离子。4.2.8 手动调整分辨率，如果某些 PPG 峰宽超出分辨率范围，应进行手动调整。点击 Resolution 标签，找到 Advanced 按钮，出现 Resolution Table 含有校正的 PPG 离子质量数和相应的 DC Offsets 值，调整 Offset 值改变各离子质量数的分辨率。当分辨率偏小时就减小 Offset，分辨率偏大时增加 Offset。改变 Offset 后按 Apply 钮，并在开始采数据时按 Yes 确认要保存这些修改。再采集数据（10scans）然后再校准，确定分辨率是否有改善
8、，重复此步骤，直到所有离子合乎分辨率范围。一般情况下，都是在单位分辨率 Unit（半峰宽 0.70.1amu）下校正。4.2.9 当 Offset 值设定合适，所有 PPG 离子的分辨率在范围内后，进行最后的质量校准。在 Mass Calibration Report 按 Update（修改）钮进行更新，当出现提示时回答“Yes” 。质量校正完毕。4.3 针泵进样 ESI 源 MRM 定量方法手动优化4.3.1 确定母离子选择你的 Project，点击 Hardware Configure 激活 MassSpecOnly；先点 T，再双击 Manuel Tuning。针泵开始进样，从 Scan
9、 Type 下拉菜单中选择 Q1 Scan，选择需要的扫描模式（正、负离子） ，输入质量扫描范围及扫描时间，初看一下所需要的母离子，确定存在需要的母离子后，选用 MCA on 累加50，选用 Acquire 采集并存储扫描图谱，根据质谱图，确定母离子的 M/Z 值，精确到小数点后一位。4.3.2 确定子离子从 Scan Type 下拉菜单中选择 Product Ion Scan。输入母离子，设定扫描范围，从 50amu 到比母离子大 10amu，设定 CE 碰撞能量，记录所有碎片离子分布，MCA on，Acquire 采集数据并存储。4.3.3 确定二级子离子（如若需要）选择响应值较高的碎片作
10、为二级母离子，CAD 选择 high，MCA on，Acquire 采集数据并存储。4.3.4 优化 MRM 定量分析质谱参数从 Scan Type 下拉菜单中选择 MRM，输入找好的母离子及子离子，点击Edit Ramp 钮，从 Ramp Parameter Settings 窗口下选择 Declustering Potential（DP） ，点击 Start 得到一个所有离子的电压曲线图。根据曲线选择分子离子峰最强的 DP 值，确定各离子对最佳 DP。按照相同的操作优化最佳碰撞能（CE） 、CXP、EP，将优化好的各参数输入各检测反应离子对。将优化好的方法命名存储。4.4 液质联用定量分析
11、方法和批文件的建立与使用4.4.1 开启 HPLC 电源，点击 Hardware Configure 激活 MassSpec 及 HPLC 配置文件；在文件菜单打开针泵连续进样优化好的 MRM 质谱方法，在 Acquisition Method 按鼠标右键出现 Add Device Method，点击增加液相泵、自动进样器、柱温箱。4.4.2 点击 Acquisition Method 题头，设置同步方式确保 LC 与 MS 设备同时启动，LC Sync。然后点击 Mass Spec 中的 Edit Parameter 根据流动相的比例及流速设定 CUR、Gas1、Gas2、IS 及 TEM。
12、点击 Autosampler 自动进样器，设定液相条件，编辑完毕后将联用方法存储，则定量分析方法就建立了。4.4.3 批文件建立，双击 Build Acquisition Batch 打开一个空白窗口。在 Method Editor 中选择已经建立的带液相同步的质谱方法 Acquisition Method，设定Set 名称，点击 Add sample，在此输入需要添加的样品数及样品存储的文件夹名称，点击 OK 后，plate code 选择 54Vialplate，分别标记样品名及样品位置 Vial Position，将样品信息编好后，在 Submit 项下提交样品，即可点击Start 开始
13、进样。4.5 定量分析方法的建立和数据分析从 Navigation Bar 中双击 Quantitation Wizard，出现样品数据文件选择窗口，双击要选的数据，进入 Selected Samples，点击 Next 进入下一步；在 Select Settings 窗口中，Settings to Use 设为 Default，Default Query 为 None，点击Next 进入下一步；在 Select Method 窗口中，选中 Create New Method 并命名，点击 Next 进入下一步；在 Select Representative Sample 窗口中，选中间浓度的
14、数据然后点击 Next；在 Define Peaks 窗口中，输入内标定义名称，并将 Q1/Q3 选出，同样将待测物命名并将离子对选出，然后点击 Next；在Define Integration 窗口中，点击 Advanced 确定 Bunching Factor，确保积分一致，点击 Next 进入下一步；在最后的窗口 Specify Calibration 中，定义Fit 为 Linear，Weighting 为 1/x2，Regression Parameter 基于 Area。选择Finish 完成定量分析方法的建立。将数据分析后命名保存。4.6 关机当提交的样品测定结束后，编辑一个方法
15、将 TEM 设定为 0，只有 Gas1/Gas2以使加热装置降温，降温 6min 后，在 Acquire 菜单下点击 standby，在Hardware Configuration 菜单下点击 deactive。关闭 Analyst 软件，关闭电脑。长期不使用质谱仪，则需要关闭质谱。持续按 Vent 按钮 1 秒，分子涡轮泵缓慢停止工作，机械泵仍将工作约 15 分钟。待机械泵停止工作后，关闭仪器电源开关。5. 维护保养及注意事项5.1 仪器正常工作时，电脑需每天重启一下，避免进样过程中出现死机现象；5.2 每周需要将数据备份一次，每周需要将磁盘整理一次；鼠标点击速度不要太快，要等上次点击的功能
16、完成后再点击；在大批量样品采集时，不能反复地处理样品以免死机。5.3 死机后的处理方法5.3.1 仪器操作过程中出现死机现象，一般采用 Ctrl-Alt-Del，Windows 任务管理结束任务，关掉 Analyst 软件，然后重新打开 Analyst；若这样还不可行，则将电脑重新启动。5.3.2 还可 deactive 后，再 active；5.3.3 关掉 Analyst 软件，Stop Service 后重新打开 Analyst 软件；5.3.4 重新启动控制仪器的电脑，重新启动 HPLC，再 Active；5.3.5 Stop Service 后进入 Scu21.exe 中，Clear GPIB Bus；5.3.6 Stop Service 后进入 Scu21.exe 中，Reset System Controller。5.4 液相每天开机后应采用 10%异丙醇清洗泵头。5.5 液相流动相的水相需每天更换，避免弱酸、弱碱水中生菌，延长柱子寿命。5.6 每次开机后，需采用 PPG 进行质量校正。5.7 退出软
