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1、标准血清及标准红细胞的制备一、标准 A 、B 、O 血清的制备选择 A 型、B 型、O 型的健康青、壮年，无菌操作采取静脉血液，使其在 37 凝 固，待血清开始出现后，放冰箱内 12 小时或 24 小时，使冷凝素被自身红细胞吸收。取 出离心沉淀分离血清，再将分离出来的血清置于 56 水浴中 30 分钟或 60 5 分钟灭活 补体，然后测定其效价和凝集力，符合规定要求时，即成标准血清。各级血站亦可将试 验后的无异常、无乳糜的 A 、B 、O 血型管分别抽出，按以上步骤处理，即成标准血清。（一） 凝集效价的测定1取小试管 20 支，分两排放置于试管架上，前排标明 A ，后排标明 B ，再将各排 由
2、左而右注明号码。2各管均加生理盐水 02 ml 。3吸取 A 型被测血清 02 ml ，加入 A 排第 1 管中，混匀，吸出 02 ml 加入第 2 管中， 如此稀释至第 10 管，从第 10 管吸出的 02ml 弃掉，用同样的方法取 B 型被测血清在 B 排中稀释，最后两排管的血清稀释倍数分别为 12 、1 4 、18 、116 、132 、164 、1 128 、 1256 、1512 、11024 。4A 排管各加 B 型 2 红细胞生理盐水悬液 02ml；B 排管各加 A 型 2 红细胞生理 盐水悬液02ml ，混匀。5放置室温 （18 22 ） 1 2 小时观察结果，以稀释倍数最高而
3、又显凝集者为其 凝集效价。上述操作过程见表 20 2 和表 20 3 。表 20 2 A 型标准血清效价测定管 号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理 盐水 （ ml）A 型血 清 （ ml）2 B 型 红细 胞 （ ml） 稀释 倍数0 20 20 2202020240 20 20 280 20 20 216020202320 20 20 2640202021280202022560 20 20 25120202021024表 20 3 B 型标准血清凝集效价测定管 号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理 盐水 （ ml）B 型血 清 （ ml）2 A 型红 细胞 （ ml）
4、 稀释 倍数0 20 20 2202020240 20 20 280 20 20 216020202320 20 20 2640202021280202022560 20 20 25120202021024混匀后，放室温 （18 22 ）1 2 小时观察结果。如被测血清在第七管仍显凝集，则其凝集效价为 1128 。如第八管仍显凝集则其凝 集效价为 1256 。O 型标准血清抗 A 、抗 B 的凝集效价测定，可参照上述方法进行。（二） 标准血清的质量要求A 型 （抗 B） 效价应在 1 64 以上，B 型 （抗 A） 效价应在 1128 以上，如果低于上 述标准，不能使用。并要检查效价低的原因，
5、重新制备，如果效价太高，可按效价规定 加适量等渗盐水稀释。且不含其它血型抗体，不形成缗钱状的假凝集，冷凝集素效价14 。（三） 亲和力的测定所谓亲和力是指标准血清与相对应的红细胞混合后出现的凝集速度及凝集块的大小 而言。测定方法如下：取待测血清 01ml 放于玻片或瓷板上，取对应的 10 红细胞生理盐水悬液 005 ml ， 加于血清中混匀并涂成直径约 1cm 的圆形，立即记时。观察出现凝集的时间。并继续转动玻片或瓷板，至 3 分钟时观察凝集块的大小。标准血清亲和力的质量要求，在 15 30 秒以内应出现凝集，3 分钟时凝集块应在1m- m2 以上，标准血清中不应含脂肪 （脂肪可使效价迅速降低
6、），不可污染细菌。（四） 标准血清的保存方法合格的标准血清每 50ml 加 1ml1 硫柳汞水溶液防腐。再于 A 型血清中加入 1 的 伊红水溶液；B 型血清中加入 1 的煌绿水溶液，以识区别。最好小量分装，冰箱保存。 用时拿出放置室温融化后再使用。二、标准红细胞悬液的制备2 标准红细胞悬液的制备：按需要型别，取全血 1ml，加等渗盐水 2 3ml，充分 摇匀离心沉淀，弃去上清液，然后再加生理盐水 2 3ml 按上述方法洗涤，共三次，最 后取压积红细胞 2 滴，加新鲜等渗盐水 4 ml ，轻轻摇动，即成所需 2 的标准红细胞悬液。取压积红细胞 5 滴，加新鲜等渗盐水 4 ml ，即成 5 红细胞悬液。 取压积红细胞 5 滴，加新鲜等渗盐水 2 ml ，即成 10 红细胞悬液。 标准红细胞盐水悬液临用前制备，最多存放 3 天，用 ACD 溶液保存最长可保存 1
