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1、国际麻醉学与复苏杂志2010年4月第31卷第2期Int J Anesth ResusADril 2010V0131N02 鞘内注射Roscovitine对小 张睿马正良梅凤关张娟顾晓萍 论著 鼠骨癌痛行为学的影响 【摘要】目的探讨鞘内给予细胞周期依赖性激酶5(cyclin-dependent kinases，Cdk5)特异性拮抗剂Roscovitine对小鼠骨癌 痛行为学的影响。方法24只C3HHej小鼠采用随机数字表法随机分为3组，s组(假手术后l4 d+溶媒)、C组(接种后14 d+溶 媒)、R组(接种后14 d+Roscovitine)，每组8只。C组和R组将含210 个纤维肉瘤NCTC
2、 2472细胞的最小必需培养基(d MEM)20 txl注射到小鼠右侧股骨远端骨髓腔内，制作骨癌痛模型。s组只注入不含肿瘤细胞的 MEM。术后14 d，R组小鼠鞘 内注射含有20 txg Roscovitine的二甲基亚砜(DMSO)5 trl，C组及S组小鼠鞘内注DMSO 5 tL1。观察给药前及给药后1、6、24、48、 72 h检测小鼠痛行为学的变化：机械缩足阈值(pawuithdrawalmechanicalthreshold，PMWT)和热缩足潜伏期(Pawwithdrawal thermal latencv，PWTL)。结果各组术前基础机械缩足阈值及热缩足潜伏期比较差异无统计学意义
3、(尸005)。接种后7 d，C组 PMWT(108024)g，与s组(185028)g相比明显降低(PO05(见表3)。 222 PWTL 鞘内注射20 Ixg Roscovitine后1 h，PWTL为 (1072+088)S，6 h后PWTL延长到(1416_+107)S， 与C组比P005(见表4)。 3讨论 113 (1052 Cdk5是小脯氨酸指向的丝氨酸苏氨酸蛋白激 酶家族的成员，可以磷酸化丝氨酸和苏氨酸残基。 与神经系统发育、神经元正常功能的维持密切相 关，参与发育过程中神经元的迁移、神经突起的生 长、轴突运输、胞吐、药物成瘾等 。近来还发现其与 疼痛有密切的关系。大部分Cdk5
4、以单体形式存在， 没有激酶活性，只有与调节因子p35或p39结合才 表现酶活性。Cdk5和p35在初级感觉神经元和脊髓 表1模型制备前后各组MWI变化比较(g， ，n=8) 注：各时间点的P组与S组比较，apo05；各组与各自0d的基础值比较， P005 表2模型制备前后各组PWTL变化比较(s， ，n=8) 注：各时间点的P组与S组比较，aP005；各组与各自0d的基础值比较，hp005 表3 鞘内注射DMSO与Roscovitine前后MWT变化比较(g， +j，n=8) 注：与S组比较，a尸005；与C组相应时间点比较，bJ)005；与给药前比较，cP005；与给药后1 h比较， djl
5、J005；与给药后6 h比较，毋O05；与给药后24h比较，fP005 表4鞘内注射DMSO与Roscovitine前后PWTL变化比较s， ，n=8) 注：与S组比较， )005；与C组相应时间点比较，bp005；与给药前比较， P005；与给药后l h比较， dP005；与给药后6 h比较， 005；与给药后24 h比较，tp005；与给药后48 h比较，gP005 114 国际麻醉学与复苏杂志2010年4月第31卷第2期Int J Anesth Resus，April 2010，Vo131，No2 背角神经元中都有表达。许多的底物与蛋白与Cdk5 存在相互作用，普遍认为Cdk5p35与M
6、EK-ERK通 路关系密切 。CaMK在伤害性疼痛的传导过程 中起重要作用 ，而Cdk5与其信号转导通路有 。Cdk5通过磷酸化NMDA受体和PQ typeVDCC 来调节痛觉过敏中出现的钙内流 。 Wang等 福尔马林诱导的急性疼痛大鼠模型 上，椎管内给予Cdk5的选择性抑制剂Roscovitine， 可剂量依赖性抑制缩脚反应，福尔马林诱导的Cdk5 下游的磷酸化靶位DARPP-32在Thr75磷酸化增 加，而Roscovitine则抑制其磷酸化，说明Cdk5在疼 痛信号中扮演重要的角色。初级感觉神经元和脊髓 背角神经元中过表达Cdk5、p35或p25都可产生明 显的热痛觉过敏，提示Cdk5
7、p35和Cdk5p25复合 物在初级感觉神经元和脊髓背角神经元中参与伤 害性信号传递。不同原因导致的痛觉过敏的机制可 能不同，Cdk5在骨癌痛的发生发展过程中的机制是 否与在急性疼痛中有着相似，尚有待进一步研究。 本研究小组已经对骨癌痛模型进行了长期的 研究，本实验中小鼠在结种后14 d内痛行为学的变化 同前面结果一致：部分肿瘤鼠在接种后第7天出现 机械陛痛敏；第10天出现热痛敏；痛行为学随时间逐 渐加重，14 d时小鼠的痛行为表现稳定而明显u引。 本实验研究结果表明，鞘内注射Roscovitine 20 g，给药后6 h痛行为学明显改善，24 h达到高峰但 并不能达到假手术水平，72 h后作
8、用消失。说明 Roscovitine对于骨癌痛有缓解作用，但是并不能达 到完全缓解。本实验研究间接揭示了Cdk5在骨癌 痛中起重要作用，但是具体机制尚不明确。 总之，本实验的结果表明鞘内注射Cdk5的特 异性拈抗剂Roscovitine可以对小鼠骨癌痛起缓解 作用，其具体作用机制和途径有待进一步研究。 参考文献 1 Pareek TK，Keller J，Kesavapany S，et a1Cyclin-dependent kinase 5 activity regulatespain signalingPNAS，2006，103(3)：791-796 2 Wang CH，Chou WY，Hun
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