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1、复方中药制剂对 9 种畜禽肠道病原菌的体外抑菌试验1 陈春林 1、2 曹国文* 2 郑华 1 陈诚（1 重庆市畜牧科学院 ，2 农业部养猪科学重点实验 室，重庆 荣昌，402460)摘要：畜禽泻痢性疾病是畜禽常发病，严重制约着养殖业的可持续发展。本试验采用牛津杯法分别测定了复方中药制剂水提液、药典处方四黄止痢颗粒配方水提液和西药对照药物复方阿莫西林溶液对 9 种畜禽肠道病原菌( 猪大肠杆菌 K88、K99 、987P，猪沙门氏菌SM2 和鸡大肠杆菌 O18、O37 、O39 ，鸡沙门氏菌 SM1、SM503)的抑菌试验。结果表明： 制备的药物对 9 种供试菌均有不同的抑菌效果。其中，对 9 种
2、畜禽肠道病原菌抑菌直径大小顺序分别是复方阿莫西林溶液、复方中药制剂和药典处方四黄止痢配方水提液。结论：复方中药制剂对畜禽肠道致病菌有很好的抑菌作用，完全可以替代抗生素治疗因该类病原菌引起的下痢性疾病。关键词：复方中药制剂； 水提物 ；复方阿莫西林溶液； 抑菌作用； 抑菌直径。In vitro antibacterial activity of a Compound Chinese Herbal against nine kinds of livestock and poultry intestinal pathogenic bacteriaChen Chun-lin, Cao Guo-wen
3、,Zheng Hua et,al(1Chongqing Academy of Animal Science, 2 Key Laboratory of Pig Industry Sciences,Ministry of Agriculture, Rongchang, Chongqing, China, 402460)Abstract：Diarrhea is a common disease in livestock, seriously restricting the sustainable development of breeding industry. In this study, ant
4、ibacterial test of a Compound Chinese Herbal was carried out by Oxford cup method on the nine kinds of poultry intestinal pathogenic bacteria, including E. coli (K88, K99 and 987P) from pigs, E. coli (O18,O37 and O39) and Salmonella (SM1 and SM503) from chickens. Meanwhile, the test of compound amox
5、icillin and pharmacopoeia prescription of Sihuang Zhili particles was set as control one. The result showed the three preparations could inhibit the growth of the nine kinds of bacteria in different degrees and in the order of antibacterial diameter that compound amoxicillins Chinese medicine prepar
6、ations Sihuang Zhili particles. Thus, it could be concluded that the Compound Chinese Herbal was capable of being a potent antibacterial agent so that it could take place of antibiotics in some degree to treat diarrhea disease caused by the nine kinds of bacteria.Key word: Compound Chinese Herbal; S
7、ihuang Zhili Granules; Aqueous extract;Compound amoxicillin;Bacteriostatic effect;Bacteriostatic size.项目资助：重庆市农发资金项目 12406; 公益性行业（农业）科研专项 201303040-X作者简介：陈春林（1974） ，男，重庆铜梁人，硕士，副研究员，主要从事兽医药理与毒理学研究、新兽药和新制剂的研制。*通信作者随着集约化养殖业的发展，畜、禽的肠道病发病率越来越高，尽管抗生素和化学抗菌药物能有效防治肠道疾病，但由于使用不当，造成的环境卫生和食品安全问题备受世人关注 中药 1属于天然药物
8、，具有无污染、毒副作用小 2 、 残留毒物量少 3等优点，在现代预防和控制细菌性感染疾病中发挥了积极作用目前，从中草药筛选抗菌药物用于防治疾病 已成为解决抗生素滥用问题的有效途径之一，近年来，有很多中草药体外抑菌试验的报道 410 本试验对复方中药制剂与复方阿莫西林溶液对 9 种畜禽肠道病原菌的体外抑菌活性进行定量分析，测定了其对猪、禽常见的 9 种肠道病原菌的抑菌直径，以期为复方中药制剂对畜禽肠道病原菌的抑制作用并不低于西药的临床应用和组方研究提供理论数据。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 复方中药提取液中药材均购至重庆市荣昌县长寿中药行，由重庆市畜牧科学院提取，主要是以白头翁、辣蓼、山
9、楂等组成的药物组方以及四黄止痢颗粒药方组成配方，分别以 10 倍、8 倍和 6 倍水煎煮三次，每次 30 分钟，过滤，取滤液合并浓缩至原药的 5：1（g/ml） ，过滤，静置 24小时或离心去沉淀置 4左右保存备用。1.1.2 复方阿莫西林溶液 由重庆市畜牧科学院兽药研究所现配制 主要由阿莫西林、头孢噻呋钠、增效剂等组成。1.1.3 菌种 猪大肠杆菌 K88、K99 、987P ，猪沙门氏菌 SM2 和鸡大肠杆菌O18、O37、O39，鸡沙门氏菌 SM1、SM503， 均由重庆市畜牧科学院兽医研究所保存， 试验前在斜面培养基上接种复活 1.1.4 试剂 蛋白胨( 批号 20120402)、琼脂
10、粉(批号 20120302)；牛肉浸膏( 批号 20120515) ；NaCl (批号 20120421)；KHPO4(批号 791107)；NaoH( 批号 720623) 均购自重庆化学试剂厂。 1.1.5 培养基 普通营养琼脂平板、普通营养肉汤按常规方法配制，高压灭菌后置 4冰箱保存备用 1.2 方法1.2.1 复方中药提取液制备 按比例称取 50g 生药，装入具塞的三角烧瓶中，加 10 倍量水浸泡 30min，加热微沸 30min，纱布过滤，药渣再加 8 倍量水煮沸 30min，纱布过滤合并2 次滤液，滤纸过滤，恒温水浴加热浓缩至 10mL (即：每 mL 水提液含 5g 生药提取物)
11、 ，4封存备用 1.2.2 复方阿莫西林溶液制备 按比例称取阿莫西林、头孢噻呋钠、增效剂等用碱调节水PH 使其溶解，溶液浓度为 1.0%阿莫西林含量。1.2.3 菌液制备 菌种接种于普通琼脂培养基上， 37培养 24h，挑取典型菌落接种于新鲜肉汤培养基中，37培养 18 h ，备用 1.2.4 西药对照药液阿莫西林、中药制剂和中药对照药液四黄止痢颗粒抑菌直径的测定经肉汤培养基培养 18h 的菌液用无菌生理盐水稀释 200 倍，取 100L 均匀涂布于琼脂培养基表面，将牛津杯安放在培养基上，每个牛津杯中加入溶液 100L，每个药液平行 3份， 置 37恒温培养箱中培养 21h，用游标卡尺测量抑菌
12、圈直径，计算平均值 11 2.结果与分析表 1 复方制剂对 9 种畜禽肠道病原菌的抑菌直径（mm ）制剂菌种复方阿莫西林溶液中药制剂水提液四黄止痢颗粒配方水提液K88 25 20 20K99 29 26 20猪大肠杆菌 987P 30 30 20O18 30 27 19O37 35 26 19鸡大肠杆菌 O39 30 30 19猪沙门氏菌 SM2 15 14 13SM1 19 17 16鸡沙门氏菌 SM503 20 20 192.1 试验结果从表 1 中可以看出，我们制备的中西药制剂均能有效抑制畜禽主要肠道致病菌（大肠杆菌、沙门氏菌）的生长，西药对照组复方阿莫西林溶液较其他试验组抑菌圈直径大，
13、其次是中药制剂组，最后是四黄止痢颗粒中药对照组。2.2 分析与讨论目前，畜禽泻痢病是畜禽养殖业中多发病、常发病，发病率高、危害性大，严重者会导致畜禽生产力下降，甚至死亡，给畜牧业生产带来很大的经济损失。而家畜消化道疾病形式多样，而所表现的病症更是形形色色，错综复杂，一旦发现此病，使养殖户经常无从下手或胡乱投药。传统的对此病的治疗方法一般多使用抗生素，它的使用在某种程度上缓解了此病的发生，但同时发现治疗作用越强，产生的副作用的可能越大，并因此而长成为医源性疾病的病因，而大量抗生素的使用常产生药物残留，危害到人们日常的饮食安全，并影响到畜产品正常的国际贸易。通过对中兽药复方制剂抑制常见肠道病原微生
14、物的生长，并且设定中兽药药典中四黄止痢颗粒作为中药药物对照，皆在说明研究的中药制剂与中药成型配方是否存在较大的差异，而试验结果表明：中药制剂对畜禽常见肠道菌抑制效果要好。因此，我们筛选出的复方中药制剂对畜禽肠道致病菌有很好的抑制作用。此试验结果为复方中药制剂治疗畜禽肠道疾病的运用提供了试验基础。湿热痢 12是痢疾证候类型之一。若湿热毒邪盛于血分，伤及肠络，下痢纯血者，叫“赤痢”、 “血痢”。若病邪伤及气血，肠中气滞，肠络损伤，下痢赤白相兼，脓血相杂，腹中绞痛，排便次数频多，叫“赤白痢”。而导致湿热下痢的主要致病菌为大肠杆菌、沙门氏菌，西医治疗方法主要是选择对致病菌敏感的抗生素。然而细菌对药物的
15、耐药性表现越来越突出，并具有多重耐药的趋势，给临床治病带来了极大困难。对此，我们采用中药、西药抑制该类菌药敏对比试验的方法，对造成畜禽消化系统感染的 9 种常见致病菌的抑菌效果进行对比观察。从实验结果来看，复方阿莫西林溶液与复方中药制剂抑菌效果差异不明显，从而证明中药制剂对湿热引起的下痢治疗效果并不亚于西药对畜禽常见下痢的治疗效果，说明中药制剂完全可以替代抗生素对该类疾病进行的药物治疗。参考文献 1 Pan Yingming ,Liang Ying, Wang Hengshan,etal Antioxidant activities of several Chinese medicine he
16、rbs H J . Food Chemistry，2004，88(3)：347350 2胡俊杰，周绪正，李剑勇，等乳源康的急性毒性和抗炎活性研究J 甘肃农业大学学报，2004，39(5)：508511 3魏瑞平，张苏艳，崔文兰，等中草药在畜禽疾病防治中的应用 J 畜牧兽医杂志， 2008，27(3) ：5455 4刘富来，陈志华，冯翠兰，等中草药对禽大肠杆菌的体外抑菌试验 J 甘肃畜牧兽医，2003，33(2)：1214 5 张海晖，裘爱泳，刘军海，等中药大黄提取物对几种畜禽致病菌的抑菌作用研究 J 饲料工业，2004，25(11)：2426 6李树明，张凤鸣，雷燕，等50 味中药对 8 种畜禽病原菌抑菌对比研究 J 中兽医学杂志，2000，4：5-8 7胡建军，刘利林，黄金奎，等植物提取物体外抑菌试验的研究 J 塔里木农垦大学学报
