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1、 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传递的机制研究分类号：学号：2009109023密 级：单位代码：10759石河子大学硕 士 学 位 论 文初级感觉传入突触前抑制在CCI模型DRG 神经元内信息传递的机制研究学位申请人教师王洋李思源副教授指 导司军强 教授申请学位门类级别学科、专业名称研 究 方 向所 在 学 院医学硕士人体解剖与组织胚胎学细胞信号传导石河子大学医学院中国新疆石河子2012年5月1 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传递的机制研究The primary afferent presynaptic inhibition in DRG ne
2、urons of theCCI model of signal transmission mechanismA Dissertation Submitted toShihezi UniversityIn Partial Fulfillment of the Requirementsfor the Degree ofMaster of Natural ScienceByWang Yang(histology and embryology)Dissertation Supervisor: Prof. Li Si-YuanMay, 20122 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传
3、递的机制研究石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确的说明并表示谢意。研究生签名： 时间： 年 月 日使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论文并向国家主管部门或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允许被查阅。有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和摘要汇编
4、出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。研究生签名：导师签名：时间：时间：年年月月日日3 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传递的机制研究目录中文摘要.英文摘要.缩略语表.前言.1材料与方法.4实验结果.13讨论.17结论和展望.22参考文献.23文献综述.27致谢.42作者简介.43导师评阅表.444 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传递的机制研究摘要目的：本研究通过建立坐骨神经慢性压榨模型（chronic constriction injury of the sciaticnerve model, CCI），运用穿孔膜片钳全细胞模式记录技术和酶联免
5、疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA ），观察坐骨神经慢性压榨损伤(CCI)致神经病理性疼痛后，大鼠背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)神经元 -氨基丁酸 A受体(GABAA受体)激活电流的改变及其细胞内第二信使系统的变化，并探讨其可能机制，为进一步揭示神经病理性疼痛的发生机制提供一定的实验理论依据。方法：将 SD（Sprague Dawley）大鼠随机分为正常 对照组、假手术组和 CCI模型组。用穿孔膜片钳全细胞记录模式观察三组大鼠 DRG神经元 GABAA 受体特异性激动剂蝇蕈醇（muscimol）的激活电
6、流，比较各组激活电流的特点；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测三组大鼠 DRG神经元内 IP3、cAMP和 cGMP浓度的变化。结果：正常对照组、假手术组和 CCI模型组大鼠 DRG神经元在不同浓度 muscimol时激活电流均为内向电流且幅值均呈浓度依赖性，各组的 EC 50值无统计学差异。CCI模型组在不同浓度 muscimol时激活电流幅值与正常对照组和假手术组相比均显著减小，正常对照组和假手术组在不同浓度 muscimol时激活电流幅值无统计学差异。CCI模型组 DRG神经元中 cAMP和 cGMP的浓度与正常对照组和假手术组相比均显著升高，假手术组和正常对照组之间无统计学差异。正常
7、对照组、假手术组和 CCI模型组大鼠 DRG神经元中 IP3的浓度无统计学差异。结论：在坐骨神经慢性压榨损伤的过程中，受损伤侧 DRG神经元 GABAA 受体激活电流显著减小，受损伤侧 DRG神经元内 cAMP和 cGMP的浓度显著升高。GABAA受体功能的减弱导致的突触前抑制作用减弱可能是神经病理性疼痛产生的重要原因之一，并且这种功能的减弱是细胞内 cAMP和 cGMP浓度的改变共同参与调节的结果。关键词：神经病理性疼痛；背根神经节（DRG）；-氨基丁酸 A 受体；穿孔膜片钳；第二信使论文类型：A（基础研究）5 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传递的机制研究Abstra
8、ctObject: To investigate the changes of GABA-activated currents and the second messagesystem in isolated dorsal root ganglion neurons of neuropathic pain model in rats.Methods: SD rats were randomly divided into normal control group, sham operation group,chronic constriction injury (CCI) group. The
9、Perforated whole-cell recording techniquewas used to record muscimol-activated currents in three groups and muscimol-activatedcurrents were compared. To detect the content of IP3, cAMP, cGMP in three groups byusing ELISA.Results: Muscimol-activated currents were all inward current in a concentration
10、-dependentmanner and there were no statistical differences in EC50 among these groups.Muscimol-activated currents of injured side of CCI group were notablely decreasedcompared with normal control group and sham operation group, while between normalcontrol group and sham operation group there were no
11、 statistical differences. The contentof cAMP, cGMP in CCI group were notablely increased compared with normal controlgroup and sham operation group ,but there were no statistical differences between normalcontrol group and sham operation group ,and there were no statistical differences in IP3 ofDRG
12、neurons among all groups.Conclusion: The data indicates that the chronic constriction injury changes the function ofGABAA receptors and the content of cAMP, cGMP. Decreased presynaptic inhibition ofGABAA may be the possible reason of neuropathic pain, and this phenomenon may beproduced by the change
13、s of the cAMP and cGMP content.Key words: neuropathic pain; dorsal root ganglion (DRG); GABA-AR; perforatedpatch-clamp technique; second messengerType of thesis: A (Basic Research)6 初级感觉传入突触前抑制在CCI模型 DRG神经元内信息传递的机制研究英文缩省略语表List of Abbreviations英文缩写CCI英文全名 中文译名chronic constriction injury of the sciat
14、ic nervecyclic adenosine monophosphate坐骨神经慢性挤压伤模型环单磷酸腺苷cAMPcGMP cyclic guanosine monophosphate 环单磷酸鸟苷Calcium/calmodulin-dependent protein kinase钙离子/钙调蛋白依赖的蛋CaMKII 白激酶 IIDRGELISAGABAGABAAIASPIP3Dorsal root ganglionenzyme linked immunosorbent assaygamma-aminobutyric acidgamma-aminobutyric acid A recep
15、torinternational association for the study of paininositol triphosphateNeuropathic painprotein kinase A背根神经节酶联免疫吸附试验氨基丁酸氨基丁酸 A型受体国际疼痛病研究协会肌醇三磷酸神经病理性疼痛蛋白激酶 A蛋白激酶 CAMP依 赖性蛋白激 酶蛋白酪氨酸激酶辣根过氧化酶缩爪潜伏期社会科学统计软包小时NPPPKAPKCPKGPTKHRPPWLSPSShprotein kinase CcAMP-dependent protein kinasecprotein tyrosine kinasehorseradish peroxidasepaw withdrawal late
