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1、实验二 培养基母液的配制及保存一、目的要求了解并掌握植物组织培养中 MS 培养基母液、生长调节剂母液配制与保存的基本知识及操作规范，能根据配方准确计算各种药品的称取量。二、基本原理在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、有机物、铁盐、激素等分别配制成比需要量大若干倍的浓缩母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液即可。本实训以MS培养基为例，学习培养基母液的配制方法。三、试剂与主要用具1仪器、用具电子天平(感量 0.01g 和 0.0001g)、药 匙 、 玻 璃
2、 棒 、 称 量 纸 、 吸 水 纸 、 滴 管 、洗 瓶 、 标 签 纸 、 烧杯（50ml、100ml、200ml）、容量瓶（100ml、200ml、500ml、1000ml）、试剂瓶（100mL、200mL、500ml、1000ml）、量杯、量筒、移液管、移液枪、洗耳球、电炉、冰箱等。2 试 剂 （ 1） 95%乙 醇 、 1mol/L NaOH、 1mol/L HCl（2）MS 培养基各成分试剂（3）植物生长调节剂：2，4-D、6-BA、IAA、NAA 等（4）洗涤剂、蒸馏水四、方法步骤1大量元素母液的配制按照MS培养基配方的需要量，将各种化合物称量扩大10倍，用电子天平称取，并分别用
3、少量蒸馏水溶解，如溶解速度慢，可稍加热。完全溶解后，按表4-1顺序依次混合已溶解的化合物溶液，并搅拌，以免产生沉淀，注意最后加入氯化钙溶液，混匀，用量筒定容到500ml，倒入试剂瓶中并贴好标签。保存于4冰箱待用。表 4-1 MS 培养基大量元素母液（10 倍）的配制剂量母液 化合物名称配方用量（ mg/L）扩大倍数母液体积(mL)称取量(mg)配 1L 培养基吸取母液量（mL）KNO3 1900 9500NH4NO3 1650 8250MgSO47H2O 370 1850KH2PO4 170 850大量元素CaCl22H2O 44010 50022001002微量元素母液的配制按照MS培养基配
4、方需要量，将微量元素各种化合物（如表4-2）扩大100倍，用万分之一的电子天平分别准确称取，用少量蒸馏水溶解，也可以混合溶解，混合后定容到500mL。将配制好的母液倒入试剂瓶中，并贴好标签，保存于4冰箱中。表4-2 MS培养基微量元素母液（100倍）的配制剂量母液 化合物名称配方用量（ mg/L）扩大倍数母液体积(mL)称取量(mg)配 1L 培养基吸取母液量（mL）MnSO44H2O 22.3 1115ZnSO47H2O 8.6 430H3BO3 6.2 310KI 0.83 41.5Na2MoO42H2O0.25 12.5CuSO45H2O 0.025 1.25微量元素CoCl26H2O
5、0.025100 5001.25103. 铁盐母液的配制 常用的铁盐是FeSO 47H2O和Na 2-EDTA的螯合物，必须单独配制。配制时，按照扩大100倍的用量（如表4-3），分别称取FeSO 47H2O和Na 2-EDTA，分别溶解后，将Na 2-EDTA溶液缓缓倒入 FeSO4溶液中( 需加热溶解 )，搅拌均匀使其充分螯合，用蒸馏水定容到500mL后贮放于棕色玻璃瓶中，贴好标签，保存于4冰箱中。表 4-3 MS 培养基铁盐母液（100 倍）的配制剂量母液 化合物名称培养基用量（mg/L）扩大倍数母液体积(mL)称取量(mg)配 1L 培养基吸取母液量（mL）Na2-EDTA 37.3
6、1865铁盐FeSO47H2O 27.8 100 500 1390 104有机物母液的配制 按照表 4-4 中各成分浓度扩大 100 倍后的用量，用感量 0.0001g 电子天平分别称量各有机物。分别溶解定容后装入试剂瓶中，也可以混合溶解定容，装入同一试剂瓶中，写好标签，放入冰箱中保存。一般有机物都溶于水，但叶酸（VBc ）先用少量稀氨水或 1mol/L NaOH 溶液溶解；V H（生物素）先用 1mol/L NaOH 溶液溶解； VA、V D3、V B12 应先用 95%乙醇溶解，然后再用蒸馏水定容。表 4-4 MS 培养基有机物母液（100 倍）的配制剂量母液 有机物名称培养基用量（mg/
7、L）扩大倍数母液体积(mL)称取量(mg)配 1L 培养基吸取母液量（mL）甘氨酸 2.0 100盐酸硫胺素（VB1 ）0.1 5盐酸吡哆素（VB6 ）0.5 25烟酸 0.5 25有机物肌醇 100100 500500010注：表中各成分的扩大倍数与称取量仅是举例，可以根据各实际需要，确定扩大倍数、计算实际称取量。5激素母液的配制 激素母液必须分别配制，浓度根据培养基配方的需要量灵活确定，一般是0.12mg/ml，根据需要确定配制的浓度。称量激素要用感量万分之一天平。配制激素母液时应注意，各激素的溶剂不同，具体见表 4-5。表 4-5 常用植物激素及生长调节物质的溶剂中文名 缩 写 溶 剂2
8、， 4-二氯苯氧乙酸 2,4-D NaOH/乙醇吲哚乙酸 IAA NaOH/乙醇吲哚丁酸 IBA NaOH/乙醇-萘乙酸 -NAA NaOH/乙醇6-苄基氨基腺嘌呤 6-BA NaOH/ HCl腺嘌呤 Ade H2O激动素 KT HCl / NaOH玉米素 ZT NaOH赤霉素 GA 乙醇脱落酸 ABA NaOH注：称取 10mgNAA 溶解后定容至 100ml，即得到 0.1mg/mlNAA 贮备液。称取 100mg 6-BA 溶解后定容至 100ml，即得到 1mg/ml6-BA 贮备液。激素 称配量（mg） 定容体积（ml） 浓度（mg/ml）6在配制母液时应注意：（1）培养基各试剂应使
9、用分析纯，用蒸馏水溶解及定容。（2）在称量时应防止药品间的污染，药 匙 、 称 量 纸 不 能 混 用 ， 每种试剂使用一把药 匙 ， 多 出 的 试 剂 原 则 上 不 能 再 倒 回 原 试 剂 瓶 。（3）使用电子天平时注意不要把药品撒到称盘上，用完以后，用洗耳球将天平内的脏物清理干净。（4）母液配制好后，贴上标签，标明母液名称、试剂浓度或扩大倍数、配制日期，并存放在 4冰箱中。使用前，要进行检查，若发现试剂中有絮状沉淀、或长菌、或铁盐母液的颜色变为棕褐色，都不应再使用。五、结果与分析1 为什么要配制培养基母液？2 在配制培养基时，配制 1 升 MS 基本培养基应吸取本实验中所配制的四种混合母液各多少毫升？3 仔细观察在配制母液过程中的现象与遇到的问题，如是否产生浑浊或沉淀，并分析出现混浊的原因。
