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1、1冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖和 IL2 产生的作用【摘要】 目的 探讨冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖反应和 IL2 的产生的免疫学作用。方法 取小鼠 24 只,随机分为对照组和实验组,分别用生理盐水和 100%冬虫夏草水浸出液定期给小鼠灌胃,然后检测小鼠淋巴细胞增殖和 IL2 的产生。结果 实验组对以上两项免疫学指标均有显著增强作用,与对照组相比均有非常显著性差异(P 0.01) 。结论 冬虫夏草可明显增强机体免疫功能。 【关键词】 冬虫夏草 淋巴细胞增殖 白细胞介素2 小鼠 【Abstract 】 Objective To research the effect of cordyceps sin
2、ensis sacc.( CSS) from the viewpoint of immunology.Methods 24 mice were divided into 2 groups(control group and experimental group) randomly.Filled the stomaches with NS and 100% water extract of CSS respectively and tested lymphocyte proliferation and interleukin2 production.Results Compared with c
3、ontrol group the lymphocyte proliferation and interleukin2 production increased significantly in experimental group (P0.01).Conclusion The results indicated that CSS could enhance immune function obviously . 【Key words】 cordyceps sinensis sacc.(CSS),lymphocyte 2proliferation, IL2,mouse 冬虫夏草,始载于本草纲目拾
4、遗 ,因其冬季为虫,夏季为草,故名;为麦角菌科真菌冬虫夏草cordyceps sinensis (Berk.) sacc., CSS ,寄生蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体,主要功效为益肾补肺、止血化痰、止嗽定喘1 。我们对冬虫夏草进行了淋巴细胞增殖和 IL2 免疫学方面的初步研究。 1 材料与方法 1.1 试剂和仪器 冬虫夏草购采自滨州医学院附属医院。水煎液制备:取冬虫夏草 200 g,加 2 000 ml 水,浸泡 2 h,水煎 2 次,每次煮沸 30 min,合并水煎液,浓缩成 200 ml 备用。RPMI1640 为 GIBO 公司产品,LPL 和 ConA 为美国 Sigm
5、a 产品,MTT 为 FLUKA 公司产品,二甲基亚砜(DMSO) 为苏州化工研究所产。美国产全自动酶标仪(Multiskan),CO2 培养箱,由美国Former 公司生产,低速冷冻离心机(Beckman,USA),超净工作台由苏州净化设备厂生产,100 目不锈钢网,50 ml 离心管。 12 动物分组与给药 BALB/C 小鼠 24 只,体重 1822 g,雌雄不限,购于北京医科大学实验动物中心。将动物随机分为两组,每组 12 只。组为生理盐水对照组,组为冬虫夏草实验组。 组用生理盐水灌胃,0.5 ml/(次只) ,1 次/天;组用冬虫夏草液灌胃, 0.5 ml /(次只) ,1 次/天,
6、共 15 次。 13 检测指标及方法 131 淋巴细胞增殖反应2:无菌制备小鼠脾细胞悬液,3用 RPMI1640 不完全培养液洗涤 2 次,每次 1 000 r/min ,离心 10 min ,然后用完全培养液配成 5106 /ml , 取 100 l加入 96 孔细胞培养板(每孔含 5106 /ml 个细胞) ,加入终浓度为 5 g/ml 的 ConA ,置 37,5%CO2 培养箱中培养 48 h 后,每孔加入 10 l MTT 溶液(5 mg/ml) ,再继续培养 12 h,然后加入 DMSO 100 l ,充分震荡后静止 20 min,全自动酶标仪用560 nm 波长进行比色分析。 1
7、.3.2 IL2 的诱生:取上述已制备的脾细胞悬液 5106 /ml,放入培养瓶,置 37,5%CO2 培养箱中培养 40 h,离心收集上清液,置-20 冰箱保存备用。 制备活化的脾淋巴细胞3 ,4:按上法无菌取正常 BALB/C小鼠脾脏,制成 5106/ml 细胞悬液,加入 ConA 使其终浓度为 5 g/ml ,置 37,5%CO2 培养箱中培养 48 h,收集细胞,离心洗涤 2 次,用完全 RPMI 1640 配成 5105/ml 细胞悬液,作为检测 IL2 的反应细胞。 133 IL2 活性检测 3:取-20保存的 IL2 上清液,并做 1/2 和 1/4 的稀释,在 96 孔平底培养
8、板中,每孔加入 IL2 上清液或不同稀释度的 IL2 上清液 100 l 及上述反应细胞 100 l;阳性对照不加 IL2 上清,加 100 l 1640 培养液。每组各设 12 个复孔,置 37,5%CO2 培养箱中培养 48 h,每孔加 MTT(5 mg/ml) 10 l,继续培养 4h ,吸弃 100 l 上清液,加入酸化异丙醇 100 l(0.04 mol/L HCl异丙醇) 4 ,充分震荡后静止 20 min,全自4动酶标仪用 560 nm 波长进行比色分析。 14 结果处理 实验结果采用组间均数差异 t 检验的方法进行统计学分析。 2 结果 冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖反应和 IL2
9、 产生的影响见表 1。 表 1 冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖反应和 IL2 产生的影响 表 1 显示实验组对脾淋巴细胞增殖反应明显,IL2 的产生明显增强,与对照组相比有非常显著性差异(P0.01) 。 3 讨论 本实验研究了冬虫夏草对小鼠淋巴细胞增殖和 IL2 产生的影响,结果表明冬虫夏草可使 ConA 激发的 T 淋巴细胞增殖反应明显增强,表明冬虫夏草对 T 淋巴细胞功能具有增强作用,同时对 B 淋巴细胞免疫功能也具有明显增强作用。已知 T 细胞是机体免疫系统赖以实现免疫调节的重要细胞,在机体特异性免疫应答中起核心作用 ,T细胞功能障碍会直接影响机体的细胞免疫应答和免疫调节。本研究还发现冬虫
10、夏草对细胞因子 IL2 的产生有促进作用。IL2 主要是由辅助 T 细胞产生的非特异性细胞因子,作用于活化的 T 细胞促进其增殖,并对 B 细胞有调节作用。 冬虫夏草可明显促进小鼠脾细胞产生 IL2,间接增强体液免疫应答。分析上述免疫指标改变的原因可能是冬虫夏草对 T 淋巴细胞的直接促进作用,或作用于巨噬细胞促进 T 淋巴细胞的产生,从而促进了 T 淋巴细胞及 IL2 的产生。以上两项免疫学指标均明显增强,组间相比均有非常显著性差异5(P 0.01) ,说明冬虫夏草可明显增强机体免疫功能,是良好的保健食品。 【参考文献】 1 高学敏.中药学(下册) M .北京:人民卫生出版社,2000:16901696. 2 高梅,贾镭,陈芬,等. 虎尿对小鼠淋巴细胞增殖和 IL2产生的影响J.中国实验临床免疫学杂志,1999,11(3):39. 3 邱世翠,李宗山,郭毅, 等. 枸杞对辐射损伤小鼠造血功能恢复的影响J.中国中医药科技,2000,7 (6):362. 4 邱世翠,李波清,王运平,等.康宝饮对小鼠的抑瘤作用J. 中国现代医学杂志,2001,11(2):33.