《TL1A在ox-LDL诱导HUVECs凋亡中的作用（毕业设计-病理学与病理生理学专业）》由会员分享，可在线阅读，更多相关《TL1A在ox-LDL诱导HUVECs凋亡中的作用（毕业设计-病理学与病理生理学专业）（50页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、分类号 密级U D C 编号硕 士 学 位 论 文TL1A 在 ox-LDL 诱 导 HUVECs凋亡中的作用研 究 生 姓 名：陈 娟指导教师姓名、职称：冯大明 教授学 科 、 专 业 名 称：病理学与病理生理学研 究 方 向：动脉粥样硬化的病因发病学与防治2010 年 5 月南 华 大 学 学 位 论 文 原 创 性 声 明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及 取 得 的 研 究 成 果 。 尽 我 所 知 ， 除 了 论 文 中 特 别 加 以 标 注 和 致 谢 的 地 方 外 ， 论文 中 不 包 含 其 他 人 已 经 发 表 或 撰 写 过 的 研 究 成
2、 果 ， 也 不 包 含 为 获 得 南 华 大 学 或其 他 单 位 的 学 位 或 证 书 而 使 用 过 的 材 料 。 与 我 共 同 工 作 的 同 志 对 本 研 究 所 作 的贡 献 均 已 在 论 文 中 作 了 明 确 的 说 明 。 本 人 完 全 意 识 到 本 声 明 的 法 律 结 果 由 本 人承 担 。作 者 签 名 ： 年 月 日南 华 大 学 学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书本学位论文是本人在南华大学攻读 （博/ 硕）士学位期间在导师指导下 完 成 的 学 位 论 文 。 本 论 文 的 研 究 成 果 归 南 华 大 学 所 有 ， 本 论 文 的
3、 研 究 内 容 不得 以 其 它 单 位 的 名 义 发 表 。 本 人 同 意 南 华 大 学 有 关 保 留 、 使 用 学 位 论 文 的 规 定 ，即 ： 学 校 有 权 保 留 学 位 论 文 ， 允 许 学 位 论 文 被 查 阅 和 借 阅 ； 学 校 可 以 公 布 学 位论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 ， 可 以 采 用 复 印 、 缩 印 或 其 它 手 段 保 留 学 位 论 文 ； 学 校可 根 据 国 家 或 湖 南 省 有 关 部 门 规 定 送 交 学 位 论 文 。 同 意 学 校 将 论 文 加 入 中 国优 秀 博 硕 士 学 位 论 文 全 文
4、数 据 库 ， 并 按 中 国 优 秀 博 硕 士 学 位 论 文 全 文 数 据库 出 版 章 程 规 定 享 受 相 关 权 益 。 同 意 授 权 中 国 科 学 信 息 技 术 研 究 所 将 本 学 位论 文 收 录 到 中 国 学 位 论 文 全 文 数 据 库 ， 并 通 过 网 络 向 社 会 公 众 提 供 信 息 服务 。 对 于 涉 密 的 学 位 论 文 ， 解 密 后 适 用 该 授 权 。作 者 签 名 ： 导 师 签 名 ：年 月 日 年 月 日目 录一 、 中 文 摘 要 -1二 、 英 文 摘 要 -3三 、 正 文 -51、 前 言 -52、实验材料 -83
5、、 试 验 方 法 -104、 实 验 结 果 -145、 讨 论 -226、 结 论 -25四 、 参 考 文 献 -26五 、 附 录 -331、 主 要 英 文 缩 略 语 索 引 -33六 、 文 献 综 述 -35七 、 成 果 目 录 -45八 、 致 谢 -46中 文 摘 要氧 化 低 密 度 脂 蛋 白 (ox-LDL)是 致 动 脉 粥 样 硬 化 (AS)的 关 键 因 素 。 ox-LDL引 起 的 内 皮 细 胞 功 能 障 碍 被 认 为 在 动 脉 粥 样 硬 化 及 其 并 发 症 的 发 生 发 展 中 有重 要 的 作 用 。 内 皮 细 胞 凋 亡 是 内
6、皮 细 胞 损 伤 的 一 种 表 现 形 式 ， 有 证 据 表 明 ：ox-LDL 能诱导血管内皮细胞凋亡，但其机制尚未阐明。肿瘤坏死因子配体相关 分 子 1A (TL1A)是新近发现的肿瘤坏死因子超家族的成员，是血管内皮细胞特 异 性 抑 制 因 子 ， 其 基 本 作 用 是 引 起 内 皮 细 胞 凋 亡 。 本 实 验 观 察 ox-LDL 对 人脐 静 脉 内 皮 细 胞 (HUVECs) TL1A 表 达 的 影 响 ， 研 究 TL1A 在 ox-LDL 所 致 血 管内 皮 细 胞 凋 亡 中 的 作 用 。目的观 察 ox-LDL 对 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞 (H
7、UVECs) TL1A 表 达 的 影 响 ， 探 讨TL1A 在 ox-LDL 所致血管内皮细胞凋亡中的作用。方法RT-PCR、 Western Blotting 方 法 检 测 不 同 浓 度 (0、 20、 40、 60、 80g/ml)ox-LDL 与 HUVECs 细胞共同孵育 24h 以 及 40g/ml ox-LDL 培 养 HUVECs 0、6、 12、 24、 48h， TL1A 在内皮细胞中的表达情况。将 5.6mmmo/L DMEM 培养基正常组作为正常对照(Control)，以纯化重组人 TL1A(50ng/ml)蛋白作为内源 性 TL1A 的对照，以及 40g/ml
8、ox-LDL 培养的 HUVECs 中不加人或加入不同 浓 度 的 TL1A 单克隆抗体( 1， 3， 9g/ml)， 24h 分 析 各 实 验 组 内 皮 细 胞 凋 亡 情况 ， 采 用 吖 啶 橙 /溴 化 乙 锭 (AO/EB)双荧光染色观察细胞凋亡形态，Annexin V/PI双染色流式凋亡计数以及检测 Caspase-3 活性。结果结 果 显 示 40g/ml ox-LDL 培 养 的 HUVEC 时，内皮细胞中 TL1A mRNA和 蛋 白 质 的 水 平 表 达 最 高 。 采 用 40g/ml ox-LDL 培 养 HUVECs 细 胞 0、 6、 12、24、 48h，
9、内 皮 细 胞 中 TL1A mRNA 和蛋白质均呈时间依赖性上调。培养液中同 时 加 入 anti-TL1A Ab 和 ox-LDL(40g/ml)处 理 HUVECs 24h 与 仅 加 入ox-LDL(40g/ml)相 比 ， 呈 核 固 缩 及 黄 染 的 内 皮 细 胞 数 量 明 显 减 少 ， HUVECs1凋 亡 率 随 着 抗 体 浓 度 的 增 加 从 (17.672.69)%下 降 到 (5.011.44)% (P 0.05)，Caspase-3 的活性也随着 anti-TL1A Ab 浓度的增高而下降。结论1. ox-LDL 可诱导体外培养的人血管内皮细胞 TL1A 高
10、 表 达2. TL1A 在 ox-LDL 诱导人血管内皮细胞凋亡起着重要作用关键词氧 化 低 密 度 脂 蛋 白 人 脐 静 脉 内 皮 细 胞 凋 亡 肿 瘤 坏 死 因 子 配 体 相 关分 子 1A2Effects of TL1A on the ox-LDL Induced Apoptosis inVascular Endothelial CellsAbstractIt is widely appreciated that oxidatively modified form LDL (ox-LDL) is acritical factor in atherogenesis. Endoth
11、elial dysfunction elicited by ox-LDL hasbeen identified in the course of atherogenesis and its complications and thepathogenesis has not yet been elucidated. In recent years, investigations found thatTNF-like ligand 1 aberrance (TL1A), as the important and specific endogenousvascular endothelial gro
12、wth inhibitor, could be secreted by the endothelial cells andinduce apoptosis of endothelial cells. TL1A, belonging to tumor necrosis factorligand superfamily (TNFS), the ligand of death receptor3 (DR3) and decoy receptor(DcR3), has been identified and coloned. Inducing apoptosis in vascular endothe
13、lialcells is one of the form of endothelial dysfunction, playing an important role in thedevelopment of atherogenesis. We investigate the expression of TL1A mRNA andprotein induced by ox-LDL and the effect of TL1A under the condition ofox-LDL-induced cell apoptosis.Objective This study is targeted to observe th
