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1、1猴马尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定猴血清，血浆及相关液体样本中马尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)的水平。实验原理：本试剂盒采用双抗原夹心酶联免疫法（ELISA）测定标本中猴马尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)水平。用纯化的猴马尔堡病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中猴马尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)相结合，经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后再与 HRP标记的马尔堡病毒抗原结合，形成抗原-抗体- 酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB
2、 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（ OD 值） ，与 CUTOFF 值相比较，从而判定标本中猴马尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)的存在与否。试剂盒组成：试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存说明书 1 份 1 份封板膜 2 片（48） 2 片（96）密封袋 1 个 1 个酶标包被板 148 196 2-8 保存阴性对照 0.5ml1 瓶 0.5ml1 瓶 2-8 保存阳性对照 0.5ml1 瓶 0.5ml1 瓶 2-8 保存酶标试剂 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存样品稀
3、释液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存显色剂 A 液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存显色剂 B 液 3 ml1 瓶 6 ml1 瓶 2-8 保存终止液 3ml1 瓶 6ml1 瓶 2-8 保存浓缩洗涤液 （20ml20 倍）1 瓶 （20ml30 倍）1 瓶 2-8 保存样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/
4、 分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（2000-3000 转2/分） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织
5、标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融.7. 不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP ）活性。操作步骤：1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空
6、白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置 37温育 30 分钟。 4. 配液：将 30（48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9
7、. 显色：每孔先加入显色剂 A 50l，再加入显色剂 B 50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 15分钟10. 终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值1.00; 阴性对照平均值0.10临界值（CUT OFF）计算：临界值= 阴性对照孔平均值 +0.15阴性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为猴马尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)阴性阳性判定：样品 OD 值 临界值（CUT OFF）者为猴马
8、尔堡病毒抗体(Marburg virus-Ab)阳性注意事项1操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。35底物请避光保存。6试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm7所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1试剂盒保存：；2-8。2有效期：6 个月4FOR
9、RESEARCH USE ONLYMonkey Marburg virus-AbDrug NamesGeneric Name： Monkey Marburg virus-Ab ELISA Kit.PurposeThis kit allows for the determination of Marburg virus-Ab concentrations in Monkey serum, and other biological fluids.Principle of the assayThe kit assay Monkey Marburg virus-Ab level in the samp
10、le，use Purified Monkey Marburg virus antigen to coat microtiter plate wells, make solid-phase antigen, then add Marburg virus-Ab to wells, Combined With Marburg virus-Ab, after washing and removing non-combinative antibody and other components ,then Combined Marburg virus which with HRP labeled beco
11、me antigen - antibody - enzyme- antigen complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution, TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength
12、 of 450 nm. Compared with the CUTOFF value, according to this to judge Marburg virus-Ab exist in the sample or not.Materials provided with the kit5Materials provided with the kit 48determinations 96 determinations StorageUser manual 1 1Closure plate membrane 2 2Sealed bags 1 1Microelisa stripplate 1
13、 1 2-8Negative control 0.5ml1 bottle 0.5ml1 bottle 2-8Positive control 0.5ml1 bottle 0.5ml1 bottle 2-8HRP-Conjugate reagent 3ml1 bottle 6ml1 bottle 2-8Sample diluent 3ml1 bottle 6ml1 bottle 2-8Chromogen Solution A 3ml1 bottle 6ml1 bottle 2-8Chromogen Solution B 3ml1 bottle 6ml1 bottle 2-8Stop Soluti
14、on 3ml1 bottle 6ml1 bottle 2-8wash solution （20ml20 fold）1bottle （20ml30 fold）1bottle 2-8Specimen requirements1. serum- coagulation at room temperature 10-20 mins，centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.2. plasma-use sui
15、ted EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again.3. Urine-collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,
16、If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.4. cell culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 r.p.m. remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）, Cell concentration reached 1 milli
