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1、 54 上海畜牧兽医通讯2014年第1期 牛人工授精操作中的注意事项和关键技术环节 仁青加王光明 (青海省天峻县畜牧兽医工作站青海天峻817200) 影响牛群受胎率的因素很多，包括营养、管理、 环境、遗传以及产科疾病等因素，其中因人工授精 操作问题而造成受胎率低和母牛难孕是一个不容 忽视原因。掌握牛人工授精正确的输精方法，是提 高牛人工授精受胎率的关键所在。笔者通过十几 年的牦牛冷配工作，谈几点个人粗浅的体会，供大 家参考。 1牛人工授精操作中注意事项 11人工授精站的设置 111配种站(点)应设在母牛密度大、易于集中、 交通方便的地方。 112 操作室要向阳干燥，精液处理室要窗明台 净，设置
2、天棚、地板(水泥地坪)。操作台在操作前 1 h用75 96酒精棉球消毒，地面每天操作前后都需 擦拭干净。室内操作人员需穿白衣、拖鞋，戴白帽、 口罩，非操作人员严禁入内。 113室内必须保持器械整洁，无尘、无烟、无蝇、 无味，不准存放损害精液的物品，做到无菌操作。 114参配母牛要逐头登记繁殖及配种情况。应 记录清楚配种牛所在的乡、村、畜主，及牛品种、毛 色、年龄等特征。 12 人工授精器械、用具的清洗和消毒 121人工授精备用的器械、药品等，需放置于清 洁的厨柜内，切忌和兽药械串混使用。常用的器 械、药品等应放在操作台上，用灭菌的双层纱布或 白布盖好。 122各种器械用前(后)，用中性洗衣粉或
3、2 碳 酸氢钠水洗刷除去油污，再用除去杂质的沉淀温开 水或蒸馏水冲洗23遍。器皿应光亮无水滴附着。 玻璃器皿洗净后，口向下倒置于架上，使水分充分 流尽，器皿上覆盖34层清洁纱布，以防止尘土 污染。 123 玻璃、金属器械在空气中控干后，可在 120电热干燥箱内消毒30 min，也可用高压蒸气 或煮沸消毒30 min。无条件的地区可用75 96酒精 吸注和擦拭消毒，自然挥发和酒精火焰烘干均可。 124布类、冲洗液、解冻液必须经高压蒸气或煮 沸消毒。玻璃输精器、刻度吸管等通过洗净之后， 用70的酒精消毒，再用消毒过的生理盐水冲洗2 3遍。 125注射器、输精器、试管经灭菌消毒后，用冲 洗液冲洗3遍
4、后方可解冻和吸注精液。 126 装器械、用具的瓷盘，取颗粒精液的镊子 等，用酒精棉球擦拭消毒，最后用无烟火焰将酒精 挥发尽才能使用。 127 为防止疾病传染及其它污染，消毒过的输 精器只能给1头母牛输精，输精完毕，必须按上述方 法清洗、消毒后，才能给另1头母牛输精。 13 用手触摸应保持无菌的部位 用酒精消毒过的手触摸器具或接触精液和牛 子宫的部位。 14 牛外阴的消毒问题及推荐方法 不擦洗牛外阴就直接把输精器插入阴道，将病 原菌甚至牛粪带入阴道。另外一些配种员用水或 消毒液清洗外阴后，未擦干就插入输精器，阴门存 留的清洗液进入了输精器头部，影响精子的活力。 还有的配种员用毛巾擦洗，反复使用后
5、成为污染源。 推荐方法：用自来水或水壶的干净流水冲，用 刷子或带手套擦洗，洗去粪迹后用纤维较粗、较厚 的卫生纸擦干。擦洗牛阴门时，先擦阴门裂中部， 再向外擦，卫生纸的一个面擦了一次后，换一个面 再擦。取水不太方便时，可用卫生纸干擦，将脏物 擦掉，干擦法是国外普遍采用的方法。不论采用哪 种方法，关键是要有无菌和卫生的概念，操作中注 意避免污染。 15 输精枪(器)的使用问题 擦洗细管或装输精枪(器)时，用手触摸细管前 端开口(这是部分配种员最容易犯的错误)和输精 枪头部。使用颗粒冻精时，有些配种员输完1头牛， 仅用酒精棉球简单擦洗输精管的外部后，又接着吸 取精液给下1头牛输精。还有些配种员用后不
6、清洗 消毒输精器，下次使用前用酒精棉球擦洗后，将棉 球点燃用火焰消毒输精管。殊不知，这样的操作使 输精管内壁结了一层变性炭化的蛋白，影响精子的 活力及卫生。 16 液氮容器的保管、使用 161液氮罐的检查：启用新购入的容器，应检查 外部有无凹陷或其它异常情况，内部有无异物，是 否清洁。若罐外挂霜，液氮蒸发量超过基准值时， 应查明原因，及时更换和维修。 162液氮的充填：充填时，先用少量液氮对容器 上海畜牧兽医通讯2014年第1期 55 进行预冷，让罐内已蒸发的氮气顺利排出，充氮以 颈管底部为限。存有冻精时，液氮在残留13体积 时应予补充。 163冻精的提取和转移：贮存冻精的提筒，按号 扣入定位
7、槽内，提取时不要扭曲提筒杆，提筒不能 超过颈管I3(10 cm)，时间为10 S。如经10 S尚未 取放完毕，应将提筒或其它包装浸入液氮中，再行 提取。冷冻精液从一容器转移到另一容器，速度要 快，时间不能超过5 s；如需过长时间，操作应在浸泡 液氮的状态下进行。 164 运输：(1)移动贮存冻精容器时，要小心轻 放，不可碰撞、冲击、倾斜、倒置和重叠堆放。(2)利 用车辆运输时，除利用原保护套外，应加木箱或其 它保护装置，铺垫要厚软，适当加以固定，以防颠簸 冲撞。(3)长途运输，途中应注意液氮消耗，做到及 时补充。 165 液氮罐的冲洗：液氮罐在配种结束后最少清 洗1次，常年使用的应更换清洗，其
8、步骤是：(1)打开 盖塞，取出提筒，把冻精转移到其它液氮罐中，倒出液 氮及其它残留物，然后在室内放置2 d，使容器内部温 度回升到0。(2)用4050温水，配以中性去垢 剂(洗衣粉也可)注入容器内部，尔后用布擦洗干净， 倒出污水。(3)用清水冲洗数次，直至干净为止。倒 置容器，使其干燥。干燥可采用自然风干和热风吹 干，若用热风吹干，热风温度不能超过50。 2 操作方法 21 解冻操作 211颗粒冻精解冻：(1)解冻液的配制：目前可采 用下列3种配方。29 g柠檬酸钠加双重蒸馏水 100 mL。3 g葡萄糖、14 g柠檬酸钠，加双重蒸馏 水100 mL。以上2配方应配成溶液，过滤3遍，经高 压蒸
9、气或煮沸消毒3O min冷却后，每100 mL再添加 青链霉素各510万单位，分装于玻璃瓶内，保存于 4冰箱或冷暗处备用。脱脂鲜奶：取新鲜牛奶， 用四层纱布过滤，装入灭菌烧杯内，隔水煮沸3次，每 次待冷却后，揭去乳皮，每lO0 mL冷却后的奶液添加 青霉素1O万单位，随配随用，防止变质。(2)冲洗液 可用29 柠檬酸钠液。(3)解冻方法：采取高温水浴 快速解冻，温度3540。在消毒冲洗后的试管内， 注入115 mL解冻液，置于354O的水浴杯 (锅)中，当解冻液温度达水浴温时，用预先冷过的长 把镊子，迅速取出冻精12粒，投人试管中轻轻摇 晃，待冻精融化至iz或13时，迅速将试管提离水 浴面，仍
10、轻轻摇晃至全部融解后镜检、待用。夹取2 粒冻精必须一次完成，避免因第二次投放的冷打击， 降低冻精的活力。 212 细管冻精解冻：用预冷后的长柄镊子将细 管冻精从容器内夹出，迅速放人382的温水中 直接浸泡解冻，约1015 S后取出水面，用无菌纱 布擦去细管上面的水分，用消毒过的专用剪刀剪去 超声波热合封口端，镜检、待用。 22 镜检操作 冷冻精液由不同的公牛和种公牛站生产，经过 长期保存、运输、分发和解冻等多个环节，很难保证 质量万无一失。一般检查时取很少量样品(输精前 检查采样时，细管头部和输精器头端不能接触载玻 片)或用输精后棉塞处剩余的一点精液即可。取样 多了则减少了输精的精子数，有经验
11、的配种员没有 必要每次把每一只细管都检查。 解冻后的精液须做显微镜冻精活力检查，在显 微镜保温箱3840的温度下进行。为准确评定 精子成活的比例，须定期用血球计算器检查。即先 用1 96生理盐水做20倍稀释，在计数板上数出死亡 精子数，再用3 生理盐水与第一次同倍稀释，杀死 全部精子，准确数精子总数，二者之差就是活精子 数。精子活率必须达到030、前进运动精子数 1 000万以上者吸人输精器。为了检验输精器的消 毒是否彻底，应从输精器内取出1滴精液再镜检，活 率与解冻时无差异，方可进行输精。为了慎重起 见，输精完毕后，还须将输精器内残留的精液再镜 检1次，如果精子死亡，必须另行输精。 23 输
12、精 母牛的排卵时间一般是在发情的终3期，也就 是说在开始发情后的115 d排卵，一般常规人工 输精是在发情后812 h为好，冷冻精液经过冷冻 后，精液中的某些有效成分受到破坏。所以冻精配 种，应在接近排卵时间输精较好。另外，从母牛阴 道黏液状态来看，在黏液量多且又混浊阶段输精 为好。 231授精最佳时间：(1)一个情期授精1次者，应 在外观停止发情(拒绝爬跨)后12 h内输精，35 h 内授精情期受胎率最高。青年牛和营养好的母牛， 可在发情后立即输精。(2)一个情期输精2次者，可 在母牛外观发情后(接受爬跨)812 h输第1次 精，间隔812 h输第2次。即早上发情下午输第1 次，翌晨输第2次
13、；下午发情，翌日输第1次，同日下 午输第2次。(3)采用直肠触模卵泡发育，输精应在 卵泡壁薄、胀而软、富有弹性、波动明显、接近排卵 前输精1次，如经812 h卵泡仍未破裂可再授精1 次，直至检到排卵为止。发现(手中排)或排卵不久 者，可以追输，一般情期受胎率可达3O 左右。 (下转第57页) 上海畜牧兽医通讯2014年第1期 57 - 保种场现有的饲养规模和棚舍难以满足农业 部提出的配种数量和后备畜禽测定、选种数量等新 的保种要求。部分保种场还饲养保种品种以外的 其他品种，对保种造成影响。现有的保种群体没有 备份，一旦发生重大疫病后果不堪设想。 22保种水平有待提高 限于经费和技术，目前保种仍
14、然以传统方式为 主，选种以体型外貌选择为主，开展测定积极性不 高，即使开展生产性能测定，测定项目和测定数量 都未达到要求。 23保种经费仍需增加 尽管市财政每年安排保种专项经费，但受外来 品种冲击、保种成本较高等原因，与保种工作需求 相比存在差距，致使保种工作停留在维持现有保种 群体及日常饲养工作，而无力进行性能测定、提纯 复壮或分子生物学水平的选种选育，更难以进行开 发利用和探索。 24 开发利用难度较大 目前，保种场的开发利用还处于起步阶段，缺 乏系统的市场运作，没有发挥出地方畜禽品种肉质 风味的优势，成本高，产出低，久而久之将严重影响 保种场参与品种开发利用的工作热情。 3保护与开发对策
15、 31 积极争取政策和经费支持 随着国家对地方畜禽遗传资源保护和开发利 (上接第55页) 232 授精方法和部位：(1)部位：采用直肠把握 子宫颈深部输精，将精液输在子宫颈深部或子宫体 内。(2)外阴部消毒：用2 高锰酸钾液擦洗外阴， 再用29 柠檬酸钠棉球擦拭阴唇和阴裂，做到外 阴无粪便和污物。输精器沾粘粪便后，应用29 柠檬酸钠棉球由前端向手握方向擦拭干净后再用。 (3)输精步骤：保定好发情母牛，输精员左手呈锥 形，沾湿手臂伸入直肠，刺激肛门括约肌，送风排出 宿粪，将子宫颈握于掌心固定。用肘臂压开阴裂， 右手将输精器或输精枪自下而上插入阴道，避开尿 道口后展平，左右手配合，对准子宫颈口，使
16、输精器 前端达到输精部位，徐徐输出精液。输完抽出输精 器或输精枪，尔后用左手轻轻按摩子宫颈和子宫 体，缓抽左手，术毕。若发现努责等不利输精状况 时，应待恢复常态后，予以输精，切忌粗暴操作。 (4)严防身体碰撞输精器内栓塞，避免精液过早 输出。 用日益重视，资金扶持力度不断增加，消费市场对 优质地方畜禽产品需求逐年扩大，保种相关技术也 日趋完善，地方畜禽品种保种工作将迎来良好机 遇。崇明县畜牧兽医办公室将积极争取多方面的 政策和项目资金支持，为保种和开发工作创造条件。 32 开展畜禽遗传资源动态监测 探索建立崇明地方畜禽遗传资源动态监测机 制，加强对地方畜禽遗传资源种群规模、种质变化、 保种效果、开发利用等常态工作的监测和评估，及 时掌握资源动态变化，科学预测近期和中长期发展 趋势。 33加强市场运作 利用新闻、媒体、电视、互联网等，积极开
