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1、 安徽医科大学硕士学位论文目 录缩略词5 中文摘要6 英文摘要8 前言12 材料与方法14 结果23 讨论27 结论30 参考文献31 个人简历34 致谢 36 综述 37 1 英文缩略词对照表（Abbreviation）英文缩写 英文全名 中文全名18F-FDGBcl-218F-2-Deoxy-2-Fluoro-D-GlucoseB cell lymphoma/leukemia-2proliferating cell nuclear antigenPositron emission tomographyflow cytometry18氟-氟代脱氧葡萄糖B细胞淋巴瘤/白血病-2增殖细胞核抗原P
2、CNAPET 正电子发射计算机断层扫描术流式细胞术FCMEP Eppendorf Eppendorf离心管磷酸缓冲液二甲基亚砜碘化丙啶PBSDMSOPIPhosphate-buffered solutionDimethyl sulfonidePropidium iodideHematoxylin eosinGrayHE 苏木精-伊红戈瑞GyBSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白S期 DNA synthesis phasecomplementary DNADNA合成期互补 DNAcDNAM期 Mitotic phase 有丝分裂期G1期 Pre-DNA-synthesis
3、 phaserevolutions per minutePost-DNA-synthesis phasefetal bovine serumDNA合成前期每分钟转数rpmG2期 DNA合成后期FBS 胎牛血清2 安徽医科大学硕士学位论文18F-FDG对小鼠Lewis 肺癌移植瘤生长抑制作用的实验研究摘 要“世纪分子”18F-氟代脱氧葡萄糖( 18F-FDG) 是目前临床上应用最多的肿瘤代谢显像剂，广泛用于PET/CT显像。近年研究发现，该显像剂具有抗肿瘤功效，能抑制肿瘤的起始、促进和F衰变时产生平均能量为0.635Mev的F-FDG是葡萄糖类似物，其进入细胞后不能像普通葡萄糖分子那样被代谢成
4、CO2与 H2O 而在细胞内聚集，且 F-FDG 在体内聚集程度与细胞代F-FDG在肿瘤细胞内的聚集度就高 ，聚集越多，6进展。人及动物组织摄入的 18 +射线及其湮没辐射产生的射线会对组织产生内照射，损伤细胞。 1818谢水平呈正相关。恶性肿瘤细胞代谢旺盛，18产生的内照射剂量就越大，辐射效应就越强，抑制和破坏肿瘤组织达到治疗的效果就越好。目的：为探讨正电子药物治疗肺癌的可能性,建立Lewis肺癌移植瘤模型进行体内实验，观察18F-FDG对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长的抑制作用及对细胞增殖与凋亡和肿瘤组织内微血管数(MVC, microvessel count)的影响，为临床治疗提供 实验依
5、据。方法：(1)细胞培养 Lewis肺癌细胞用含10%小牛血清的RPMI1640培养液，于37、饱和湿度、5%CO2条件下培养；(2)细胞传代 种植Lewis肺癌细胞于C57BL/6小鼠右腹股沟下，每2周传代一次，传至第3代用于实验；(3)移植瘤模型建立 将第3代传代小鼠脱臼处死，酒精消毒，取肿瘤，研磨器研磨，200目筛网过滤，调细胞浓度为10/L，进行腹股沟皮下注射，每只小7鼠注射0.2ml，建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型18只，按随机数字法分为高剂量18F-FDG治疗组、低剂量 F-FDG治疗组和对照组，每组6只，于接种后第7天腹腔内一次给药，18分别给于 18F-FD
6、G18.510种后第7、10、13、16、19和22天，用精度为 0.1mm的游标卡尺测量并记录小鼠皮下瘤结节大小，计算肿瘤体积，V (cm)=0.52 ab( a为瘤体最长径，b为最短径)，取每组均数，制作肿瘤生长曲线。(5)抑瘤率测定 22天后引颈脱臼处死小鼠，迅速剥离小鼠皮下肿瘤，称瘤重，F-FDG组平均瘤重 ) /对照组平均瘤重Bq、9.2510 Bq和0.2mL等体积的生理盐水。(4)瘤体积监测 接7 73 2计算肿瘤抑制率，肿瘤抑制率=(对照组平均瘤重 18100%；(6)蛋白表达捡测 用SP法免疫组化检测移植瘤组织Bcl-2、Survivin、PCNA、VEDF与CD34蛋白的表
7、达。(7)流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡 22天后引颈脱臼处死小鼠，少许瘤组织，PBS洗3次，0. 25%胰蛋白酶消化并吹打成单细胞悬液，调整细胞浓度为110/ml，收集1ml；63 20预冷的70%酒精固定，44h。离心弃去固定液，PBS洗，滤网过滤， 5mg/mlRNA酶，37保温30min，50g/ml PI避光染色15min。上机检测，Win MDI2.9软件分析结果。结果：(1)肿瘤体积动态变化 接种后第7天全部小鼠成瘤，均可触摸到皮下直径超过 0.5cm的结节，肿瘤体积变化见表1。 F-FDG治疗组小鼠的肿瘤生长速度逐渐减缓，高剂量 F-FDG18 18组明显受抑，而对照组小鼠的肿瘤生
8、长速度较快，生长曲线上升明显，见图 1。实验后期，各组两两比较，肿瘤平均体积之间差异有统计学意义 ( P 4 分为强阳性( + + + ) 。肿瘤 MVC 计数标准:以 CD34 染色标记微血管，参照 Weidner等 12报道的方法，先以100倍视野观察切片，选择 3个血管密度最高区， 然后在 200倍视野下计数每个区中1个视野的微血管数(任何被染成棕黄色或棕褐色的内皮细胞或内皮细胞簇团，只要与邻近肿瘤细胞及周围结缔组织成分分界清楚，即可被认为1个微血管计数)， 取8个视野的微血管数的平均值作为MVD值。2.12 流式细胞仪（FCM）检测细胞的凋亡率2.12.1 组织固定:瘤体剥离称重后，取
9、少许瘤组织，PBS洗3次，以0. 25%胰蛋白酶消化，吹打成单细胞悬液，1500rpm,室温离心5min；2.12.2 PBS重悬，计数活细胞并调整细胞浓度为110/ml，收集1ml；62.12.3 1500rpm，室温离心5min去PBS，加入-20预冷的70%酒精固定，44小时；2.12.4 1500rpm离心弃去固定液，以3ml PBS洗涤 1次，吸管吹散细胞后用300目尼龙滤膜过滤；2.12.5 1500rpm离心，加入100l 5mg/mlRNA酶 ，37保温30min，然后冰浴终止RNA酶作用；2.12.6 1500rpm，室温离心5min后，加入600l 50g/ml PI，混匀
10、避光反应15min。2.12.7 400目不锈网过滤。2.12.8 采用细胞流式仪检测。用WinMDI2.9软件分析结果数据。2.13 统计学分析 用SPSS软件进行统计分析。实验数据均表示为( xs)，肿瘤平均体积比较采用重复测量方差分析，肿瘤平均瘤重比较采用成组t检验，当P3cm的淋巴678结检出率，发现PET对1cm的淋巴结检出率的差异无显著性。Konishi9等分析56例患者306枚淋巴结显示阳性预测值分别为73%、98%、70%、98%和95%，而CT为55%、96%、55%、96%，与病理诊断结果比较，PET13%分期过高、6%分期过低，而CT分别为15%、13%。Could18F
11、-FDG PET的敏感性、特异性、准确性与10等对多篇文章数据进行Mata综合分析得到的结论更具有说服力：PET诊断纵膈淋巴结转移比CT敏感性更高。同时，此研究也发现，PET对CT显示有肿大淋巴结的病例的检测敏感性高于CT（90%-100%）VS（65%-100%），而特异性较低（68%-100%）VS(92%-100%).因此，我们应该充分利用其高度敏感性指导胸腔镜及纵膈镜等有创性检查进一步核实。3.18F-FDG PET对肺部孤立性结节(SPN)良恶性的 鉴别诊断肺部孤立性结节的正确诊断及临床分期是至关重要的，因为它不仅是制定治疗方案的基础，同时直接关系到疗效和预后，又可避免某些患者因误诊
12、的过高分期而丧失根治术机会。目前评价肺部孤立性结节(SPN，solitary pulmonary nodule)的方法包括CT检查、经胸穿刺抽吸活检（TTNA,transthoracic needle aspirtation）、支气管镜检查和直视下胸腔镜检查等方法。CT是检查和评价肺部孤立性结节(SPN)的传统方法，但该方法有较多假阳性结果。研究表明 18F-FDG-PET对肺部孤立性结节(SPN)的诊断有较高价值，它对于肺部孤立性结节(SPN)36 37良恶性鉴别诊断的敏感性、特异性、准确性及阳性预测值和阴性预测值分别为94.6%-95.8%、66.7%-82.0%、89.0%-90.7%、
13、86.0%-94.6%与66.7%-93.0%，明显优于CT或MRI 11-13。Dewan等报道对以传统影像检查难以鉴别的30例直径2.5 作为判断良、恶性病变的阈值，但对此仍有较多争议，Could 14等检索了MEDLINE和CANCERLIT数据库中1966-2000年间用PET研究肺部结节或肿块的文章，并采用Meta分析方法对1474个肺部局限性病灶（包括结节和肿块）和 450 个孤立性肺结节（直径3cm) lymph node lesions.39 Chest 2000,117:773-778.9 Konishi J,Yamazaki K,Tsukamoto E,et al.Medi
14、astinal lymph node staging by FDG PET in patients withnon-small cell lung cancer analysis of false positive FDG PET findings.Respiration,2003,70:500-506.10Gould MK,Kuschner WG,Rydzak CE,et al.Test performance of positron emission tomography and computedtomography for mediastinal staging in patients with non-small cell lung cancer :a meta analysis.AnnInternMed,2003,139 :879.11Dunagan D,Chin R J r,McCain T,et al.Staging by positron emission tomography predictsurvival in patientwithnon-smalcell lung cancer.Chest,2001,119 (2)333-339.12Pitma
