清肺化痰逐瘀汤对AECOPD+患者血清IL-8,+TNF-α的影响

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1、 摘 要 【目的】: 通过观察导师自拟清肺化痰逐瘀汤对 AECOPD 患者细胞因子 IL-8, TNF-的影响,从而分析得出清肺化痰逐瘀汤对 AECOPD 病人的治疗作用 。 【方法】: 1.确定选用病例人数为 60 例,入选病人定为陕西中医学院附属医院呼吸科住院病人,确诊为 AECOPD 的病人且符合纳入标准的患者 60 例,随机分为治疗组和对照组。 2.对照组:给予控制性吸氧;沙丁胺醇 10ml,雾化吸入, 2 次 /日;喘息者给予多索茶碱 0.2 g,静滴, 1 次 /日,痰稠者不易咳出者给予盐酸按溴素 60mg,静滴, 1 次 /日;有明确感染情况下应用头孢他啶 3.0g,静滴, 2

2、次 /日(对头孢他啶过敏者给予头孢哌酮舒巴坦 2.25 g,静滴, 2 次 /日,或者给予阿奇霉素0.5 g,静滴, 1 次 /日),配合左氧氟沙星 100ml,静滴, 1 次 /日,抗感染。治疗组:在对照组的基础上给予清肺化痰逐瘀汤煎服。(煎服法:中药饮片为我院中药房采购,并由本院制剂室煎制,煎取 300ml,日一剂,早晚服,真空袋包装 150 ml/袋,日两袋)。疗程为: 2 周 。 3.在 AECOPD 患者入院第二天对两组病例进行血、尿、便常规检查,肝肾功检查,肺功能、血气分析、心电图和胸片 /CT 以及血清 IL-8和 TNF- 治疗前的检测,记录检查结果,经治疗 14 天疗程结束后

3、,再对上述项目进行复查,记录检查结果,并对结果进行对比分析。制定严密的病例分析报告表,在规定时间内逐项详细记录观察结果,血清 IL-8 和 TNF- 的检测结果分别由陕西中医学院附属医院核医学室及生化免疫室进行检测。 【结果】: 对两组患者入院治疗前后临床情况及血浆 IL-8、 TNF- 水平进行比较, 1.治疗后两组病人 情况明显好于治疗前,两组血清中 IL-8、 TNF-水平均有下降。 2.对照组血清中 IL-8、 TNF-下降程度明显低于治疗组,治疗组疗效明显优于对照组。( P0.05 表 4.两组年龄分布状况 组别 例数( n) 年龄(岁) 平均年龄(岁) X S 4050 5160

4、6170 7180 治疗组 30 4 7 10 9 64.43 6.8 对照组 30 3 8 11 8 64.64 5.2 经 2 检验,两组平均年龄相比 P0.05,无明显差异 表 5. 病程分布状况 组别 例数( n) 平均病程(岁) 治疗组 30 14.676.58 对照组 30 15.266.34 经 2 检验,两组在性别上差异不明显 P0.05 清肺化痰逐瘀汤对 AECOPD 患者血清 IL-8, TNF-的影响 13 二试验试剂与仪器: 应用药物: 清肺化痰逐瘀汤( 桑白皮 10g、鱼腥草 15g、全瓜蒌 10g、杏仁 10g、浙贝 10g、黄芩 10g、丹参 15g、当归 10g

5、、水蛭 6g、厚朴 6g、大黄 3g、干姜 3g)。(中药陕西中医学院中药房采购,并由本院制剂室煎制) 头孢他啶、 头孢哌酮舒巴坦、左氧氟沙星、多索茶碱、盐酸按溴素 以上药物均有陕 西中医学院药房采购。 实验试剂: IL 一 8 检测试剂盒北京北方生物技术研究所提供 TNF-a 检测试剂盒北京北方生物技术研究所提供 实验仪器: A1003 型电子分析天平 (上海天平仪器厂产品 ) DFM 96 型 16 管放射免疫计数器 (合肥众成机电技术公司产品 ) 低速自动平衡离心机 :LD25 一 2,(北京医用离心机) 2510 变频振荡器(上海新波生物技术有限公司) 台式恒温隔水培养箱: PYX-D

6、HS30X35 一 TBS(上海跃进医疗器械厂) 三实验方法 : 1.治疗方法 对照组:给予控制性吸氧;头孢他啶 3.0g,静滴, 2 次 /日(对头孢他啶过敏者给予头孢哌酮舒巴坦 2.25 g,静滴, 2 次 /日,或者给予阿奇霉素 0.5 g,静滴,1 次 /日),配合左氧氟沙星 100ml,静滴, 1 次 /日,抗感染;喘息者给予多索茶碱0.2 g,静滴, 1 次 /日,痰稠者不易咳出者给予盐酸按溴素 60mg,静滴, 1 次 /日。 治疗组:在对照组的基础上给予清肺化痰逐瘀汤煎服。(煎服法:中药饮片为我院中药房采购,并由本院制剂室煎制,煎取 300ml,日一剂,早晚分服。) 2.指标检

7、测、结果观察及记录 制 定严密的病例分析报告表,在规定时间内逐项详细记录观察结果。在AECOPD 患者入院第二天对两组患者进行血、尿、便常规检查,肝肾功检查,肺功能及血气分析、心电图和胸片 /CT 以及抽取患者抽取空腹外周静脉血 10ml,标记后放入一 40的冰箱,集中检测。经治规范化治疗 14 天后,再次对两组患者进行血、尿、便常规检查,肝肾功检查,及相应的复查,再次抽取患者 10ml 静脉血,集中后统一检测,记录检查结果,并对结果进行对比分析。 实验所需的台式恒温隔水陕西中医学院 2013届硕士学位论文 14 培养箱、低速自动平衡离心机、 2510 变频振荡器及 DFM 96 型 16 管

8、放射免 疫计数器等均由西中医学院附属医院核医学室提供。 2.1 血清标本收集 抽取患者治疗前、后空腹外周静脉血各 10ml。采血后在离心机中进行低速离心2000 转每分钟,离心 20 分钟后取出,采集上层血清 2-5ml,放入 -40的低温冰箱保存,收集集中后统一检测。 2.2 实验方法采用放射免疫分析法 (RIA ) 2.2.1 指标选取: 血清中 IL-8 测定: 采用放射免疫分析法,按照试剂盒说明书进行,测定步骤如下: (1)IL-8 标准品分别为 :0.2, 0.6, 1.2, 2.4, 4.8, 9.6ng/ml,每瓶用 1ml 缓冲液溶 解。 (2)NSB 用前加缓冲液 0.5ml

9、 溶解,只加 NSB 管 200ul/管, S0 管另加缓冲液100ul/管。 (3)125I-IL-8 用 10.5ml 缓冲液溶解。 IL-8 抗血清冻干品用 11ml 缓冲液溶解。充分摇匀免疫分离剂。 (4)取圆底聚苯乙烯试管若干进行编号。按下表加入试剂:表 6 试管 试剂 NSB S0 S1-S6 待测样品管 缓冲液 200 100 - - IL-8 标准品 - - 100 - 待测样品 - - - 100 125I-IL-8 100 100 100 100 兔抗 -IL-8 抗血 清 - 100 100 100 驴抗兔免疫分离试剂 500 500 500 500 充分摇匀后,室温放置

10、 15 分钟, 3500 转 /分钟离心 15 分钟,吸弃上清,测各沉淀管的放射性基数( cpm)然后在 4 3500rpm 离心 25min,吸弃上清液,测各管沉淀的放射性的计数( CPM)。 (5)计算各管的百分结合率。以 B/T 计算 NSB、 S0 结果百分率;以 S B/B0%计清肺化痰逐瘀汤对 AECOPD 患者血清 IL-8, TNF-的影响 15 数为 B0,各标准管计数为 B,求各管的百分结合率: B/B0%=( B-NSB) /( B0-NSB)100%, 用标准曲线的计算结果在半对数坐标纸上,绘制 B/B0% logT 图,根据样本 B/B0 百分率从标准曲线上查处其 I

11、L-8 浓度。 血清中 TNF-测定 采用液相竞争法,按照试剂盒说明书进行,测定步骤如下: (1)将缓冲液 10ml 加蒸馏水稀释至 50ml。 (2)将抗 TNF 血清冻干品加缓冲液 12ml 溶解。 (3)将 125I-TNF 瓶加 PBS10.5ml。 (4)TNF 标准品 5 瓶浓度依次为: 0.3, 0.9, 2.7, 8.1, 24.3ng/ml,用前加缓冲液 0.8ml。 (5)取聚苯乙烯试管编号,按下表操作:表 7 试管 试剂 NSB S0 SA-SG 待测样品 管 TNF 缓冲液 200 100 - - SA-SG 标准品 - - 100 - 待测样品 - - - 100 兔

12、抗 -TNF 抗体 - 100 100 100 充分混合,放 4 24h 125I-TNF 100 100 100 100 充分混合,放 4 24h 分离试剂 500 500 500 500 充分摇匀后,室温放置 15 分钟, 3500 转 /分钟离心 15 分钟,吸弃上清,测各沉淀管的放射性基数 ( cpm) 加入分离剂后充分混匀,放室温 20min, 4离心3500rpm25min,吸弃上清液,在自动 计数器上测放射性。 2.3.以 B/T 计算 NSB、 S0 结合百分率,以 B/B0 计算标准及待测样品结合百分率,在半对数坐纸上绘制标准曲线,并查出样品值。或自由动计数器预先编制程序,直

13、接给出有关参数、标准曲线及样品浓度。 2.4.统计分析: 实验数据采用( X s )表示,采用 SPSS17.0 统计软件对实验数据进行分陕西中医学院 2013届硕士学位论文 16 析处理,用配对样本 t 检验和相关系数对数据进行检验, 以 P0 05 有明显差异,以 P0 01 有显著差异 。 四 试验结果 两组患者治疗前后中医症候积分表(见附录 2),此表参照中药新药临床研究指导原则及中医诊断学相关内容制定),对患者进行症候评分,观察两组治疗前后症候积分及其预计值比值变化。 表 8. 治疗前后两组中医证候积分的比较 治疗组 (n=30) 对照组 (n=30) 症状 治疗前积分 治疗后积分

14、治疗前积分 治疗后积分 咳 嗽 168 50 156 68 咳 痰 126 24 120 36 气 短 114 36 124 54 喘 息 114 42 138 60 紫 绀 30 15 30 22 总积分 638 239 629 284 治疗前后两组 COPD 主要证候积分的比较 如表 6 所示,经检验, 2 组临床症状治疗后积分相比较,差异有统计学意义 ( P 0. 05);两组治疗后积分治疗组低于对照组,从总症候积分来比较治疗组较对照组偏低;表明治疗组在改善患者主要症候和总疾病症状方面优于对照组。 表 9.两组患者治疗前后血清 IL- 8、 TNF- 指标的检测 )( SX 指标 治疗组 (n=30) 对照组 (n=30) 治疗前 治疗后 治疗前 治疗后 IL- 8( ng/ml) 0.610.02 0.180.03 0.620.02 0.380.05 TNF-( pg/ml) 61.281.02 23.751.31 62.021.16 38.671.26 注:两组实验治疗前后相比, P

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