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1、第28卷,第4期 光谱实验室 Vol. 2 8 , No . 42 0 1 1 年 7 月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory July , 2 0 1 1紫外分光光度法测定阿霉素聚乳酸微球的含量nullnull 安徽省优秀人才基金项目( No: 2008jqw1159)null 联系人,手机: ( 0) 15855762656; E-mail:wujingmei 126. com作者简介:吴景梅( 1974) ,女,山东省菏泽市人,讲师,硕士,主要从事生物医用降解材料研究工作。收稿日期: 2011-03-24;接受日期: 2011-04-16
2、吴景梅null 邰燕芳秦英月(蚌埠学院应用化学与环境工程系安徽省蚌埠市曹山路1866号233030)K1采用复乳-溶剂挥发法制备阿霉素聚乳酸微球,通过扫描电镜观察微球的形态,采用紫外分光光度法测定微球中阿霉素的含量。结果表明,所制备的阿霉素聚乳酸微球外形圆整,阿霉素溶液在1. 7034. 1nullg/mL 浓度范围内线性良好,校准曲线回归方程为A = 0. 0422C+ 0. 1845,相关系数r 为0. 9997,平均回收率为 99.5% (RSD= 0.50%)。1oM乳化溶剂挥发法;阿霉素;聚乳酸微球;紫外分光光度法ms|:O657. 32DSM:BcI|: 1004-8138(201
3、1)04-1940-031引言阿霉素( Adriamycin, ADM) 属蒽环类抗生素,是当今公认的强效广谱抗癌药物,具有较强的细胞毒性作用,临床上广泛应用于白血病和各种恶性肿瘤的治疗 1,但该药具有较强的心脏毒性及骨髓抑制作用,在一定程度上限制了其临床应用。如将阿霉素制备成具有缓释作用的微球制剂,理论上可减轻阿霉素对机体的心脏毒性及骨髓抑制作用,提高化疗效果 2。生物可降解材料聚乳酸(Polylactide, PLA)因其优良的生物相容性及生物可降解性,被广泛地用于药物缓/控释系统 3。本文采用复乳-溶剂挥发法 4制备了阿霉素聚乳酸微球,考察了微球的形态,并用紫外分光光度法测定了载药微球中
4、阿霉素的含量。2实验部分2. 1k4N聚乳酸( PLA,分子量30000,济南岱罡生物科技有限公司) ;阿霉素(浙江海正药业有限公司,国药准字: H33021980);明胶、Tween-60、二氯甲烷均为分析纯; 0. 9%生理盐水。实验用水为去离子水。FA 2004型电子天平(上海舜宇恒平公司); 79-1型恒温磁力搅拌器(金坛中大仪器厂);UV 1102型紫外分光光度仪(上海天美公司); 0406-1型离心沉淀器(上海医疗器械集团公司);S-450扫描电子显微镜(日本日立公司)。2. 2LZE将0. 5g 聚乳酸溶解于5mL 二氯甲烷中,加入1mL 5mg/mL 阿霉素水溶液,高速搅拌10
5、min得到初乳液,室温下倒入含0. 15% Tween-60的1%明胶溶液100mL中,高速搅拌乳化20min得复乳液,然后低速搅拌3h使二氯甲烷挥发完全,于1500r/min转速下离心分离3min,收集微球,用蒸馏水冲洗,常温干燥得粉末状桔红色固体微球。用扫描电镜分析微球形态,用紫外分光光度法测定微球中阿霉素的含量。3结果与讨论3. 1o#V+图 1阿霉素聚乳酸微球的扫描电镜 a(500),b(1000)从图1可以看出,阿霉素聚乳酸微球呈球形,有少量空白微球,可能是搅拌速度过快所致。微球表面粗糙,有较小的凹凸现象,这可能是溶剂挥发过程所致,这也将成为内部药物与外相溶液自由“交换”的通道。并且
6、由于聚乳酸的玻璃化转变温度较低,熔点较低,微球在局部放大时,由于真空条件下电子束能量很高容易使微球变形 5,所以对于聚乳酸微球放大倍数一般不要超过5000倍,以防止聚合物的融化变形。在药物释放过程中,除了随着聚乳酸的降解药物释放以外,这些小的凹凸也有助于药物分子从微球本体逃逸到体液中。3. 2o4以阿霉素原药制剂为对照品,取阿霉素对照品的生理盐水溶液(6. 82nullg/mL),以生理盐水为空白,在200400nm 波长范围内作紫外扫描,阿霉素在波长232. 5nm 处有最大吸收,故选定232. 5nm为测定波长。图 2阿霉素浓度与吸光度的关系曲线3. 3nwL准确称取干燥恒重的阿霉素对照品
7、3. 41mg置于小烧杯中, 加20mL 生理盐水溶解后转入100mL容量瓶中,用生理盐水稀释定容,配制浓度为34. 1nullg/mL 的标准液。分别取0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、10. 0mL 标准溶液,以生理盐水定容至10mL,配成系列浓度。在232. 5nm波长处以生理盐水为空白, 测定吸收度值( A) , 绘制校准曲线 ( 图 2), 并计算得回归方程A= 0. 0422C+ 0. 1845(r= 0. 9997,n= 8),线性范围为1. 7034. 1nullg/mL。3. 4L取浓度为6. 82nullg/mL的阿霉素对照品生理盐水溶液
8、,室温下避光放置,分别于0、1、2、3、4、5h测其吸光度值,结果几乎没有变化,说明5h内含量测定结果的稳定性良好。1941第 4期 吴景梅等:紫外分光光度法测定阿霉素聚乳酸微球的含量3. 5lqL取阿霉素含量为5. 96nullg/mL的阿霉素聚乳酸微球样品溶液3份,分别准确加入浓度为8. 52、17. 05、25. 58nullg/mL 的标准溶液,测定吸光度,根据校准曲线(图2) ,计算实测结果,根据回收率=100%(测得量- 样品原含量) /加标量计算回收率,结果见表1。3种浓度的阿霉素溶液的平均回收率为99. 5%,相对平均偏差RSD为0. 50%。V1lqL( n= 3)样品原含量
9、(nullg/ mL)加标量(nullg/ mL )测得量(nullg/ mL)回收率( %)平均回收率( %)相对偏差( %)相对平均偏差( %)5. 96 8. 52 14. 38 98. 8 0. 705. 96 17. 05 23. 04 100. 2 99. 5 0. 70 0. 505. 96 25. 58 31. 38 99. 4 0. 103. 6oc称取阿霉素聚乳酸微球样品3份分别置于带塞具的刻度试管中,加入二氯甲烷溶解聚乳酸,再加入生理盐水振荡30min,取水层在波长232. 5nm处测吸光度,代入回归方程,计算得微球中阿霉素含量平均值为6. 53nullg/mg。4结论采
10、用复乳-溶剂挥发法制备了阿霉素聚乳酸微球,扫描电镜分析表明所制得的微球外形圆整。利用紫外分光光度法测定微球中阿霉素的含量,突出优点是操作简单易行,回收率符合要求,重现性好,尤其适应微球研制初期反复大量地进行含量测定的需要,具有很高的实用价值,亦适用于其它水溶性药物聚乳酸微球的载药量的测定。参考文献 1 Dos Santos R A, Takahashi C S. Anticlastogenicand Antigenotoxic Effects of Selenomethionine on Doxorubicin-Induced Damage inVitro in Human Lymphocyt
11、es J . Food and Chemical Toxicology, 2008,46( 2) : 671677. 2 林本兰,沈晓东,崔升.磁性纳米粒阿霉素微球制备的初探J .中国医院药学杂志, 2005,25( 5) : 424426. 3 杨帆,陈一岳,林茵.聚乳酸的降解性能及其微球剂的研究J .中国药房, 2002,13( 5) : 263265. 4 饶骏,陶霞,陈建峰.阿霉素微胶囊的制备与表征 J .北京化工大学学报, 2008,35( 4) : 6972. 5 Zhang Y W, Jiang M, Zhao J X et al. Hollow Spheres from She
12、ll Cross-Linked, Noncovalently Connected Micelle ofCarboxyl-T erminated Polybutadiene and Poly( Vinyl Alcohol) in Water J . Macromolecules. , 2004,37( 4) : 15371543.Determinationof AdriamycininPolylacticAcidMicroballoonbyUltravioletSpectrophotometryWU Jing-MeiTAI Yan-FangQIN Ying-Yue(Department of A
13、pplied Chemistry and Environmental Engineering, Bengbu College, Bengbu, Anhui 233030, P. R.China)AbstractAdriamycin polylactic acid microballoon was prepared with double emulsion-solventevaporation technique, and the shape of the microballoon characterized by scanning electronmicroscopy (SEM). The c
14、oncentration of adriamycin in the microballon was analyzed by ultravioletspectrophotometry. The results showed that the microballoon had smooth spherical surfaces. Thelinearity of adriamycin was better in the range of 1. 70 to 34. 1nullg/mL, A = 0. 0422C+ 0. 1845,r= 0. 9997. The average recovery was 99. 5%(RSD= 0. 50%).Key words Emulsion-Solvent Evaporation Technique; Adriamycin; Polylactic AcidMicroballoon; Ultraviolet Spectrophotometry1942 光谱实验室 第28 卷
