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1、临床医学检验技士考试辅导临床免疫学和免疫检验 第 1 页第三章免疫原和抗血清的制备第一节免疫原的制备 第二节免疫佐剂第三节抗血清的制备第四节抗血清的鉴定和保存第五节抗血清的纯化 第一节 免疫原的制备免疫原指能诱导机体产生抗体或致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应的物质。 免疫原相当于抗原一、颗粒性抗原的制备颗粒性抗原：各种细胞、细菌、绵羊红细胞） 一般情况下经生理盐水或其他溶液洗净，集菌后处理颗粒性抗原大多用静脉内注射免疫法，较少加佐剂作皮内注射 二、可溶性抗原的制备和纯化（一）可溶性抗原的制备蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的
2、可溶性抗原，免疫前常需提取和纯化 1）高速组织捣碎机法 （2）研磨法，个细胞获得的方法（1）机械捣碎（2）酶处理法，常用胃蛋白酶或胰酶 第二步 细胞破碎方法有：（1）反复冻融法 （2）超声破碎法 （3）自溶法 （4）酶处理法，常用溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶（5）可提取及纯化，但如分解成片段（如 段、段、轻链片段等）作为免疫原可制备出分辨力更高的特异性抗血清（1）非共价键解离法 临床医学检验技士考试辅导临床免疫学和免疫检验 第 2 页（2）共价键解离法 （3）溴化氰裂解法 （4）酶解法（二）1）核酸去除法（2）盐析法 （3）有机溶剂沉淀法 （4）子交换凝胶、抗原和抗体、酶和酶抑制物、酶蛋白和辅酶、
3、激素和受体、 之间有特殊亲和力，一定条件下，两者可紧密结合成复合物，如将复合物的一方固定于固相载体上，则可从溶液中分离和提纯另一方常用的有琼脂糖珠（B、6B）、琼脂糖、聚丙乙烯酰胺、多孔玻璃球等抗原或抗体与支持物的结合的方法有：载体结合法、物理吸附法、）用紫外光吸收法、双缩脲法、酚试剂法等,常用的是紫外光吸收法，该法测定280 260吸光度值，用聚丙烯酰胺凝胶电泳（、凝胶过滤法等 用醋酸纤维膜电泳、细管电泳、等电聚焦、用双向免疫扩散法、免疫电泳法或 等 三、半抗原性免疫原的制备半抗原指某物质在独立存在时只具有抗原性而无免疫原性，这些物质称为半抗原半抗原与蛋白质载体或高分子聚合物结合后才有免疫原
4、性 （一）乙烯吡咯烷酮、药用炭、羧甲基纤维素等皆常用 （二）附的载体有淀粉、聚乙烯毗咯烷酮、硫酸葡聚糖、羧甲基纤维素 床免疫学和免疫检验 第 3 页（三）疫佐剂一、佐剂的种类（一）化合物包括氢氧化铝、明矾、矿物油、吐温氏不完全佐剂（羊毛脂与液状石蜡的混合物）以及人工合成的多聚肌苷酸：胞苷酸、脂质体等（二）氏佐剂分为弗氏完全佐剂（弗氏不完全佐剂加卡介苗）和弗氏不完全佐剂两种 使用时加入水溶性抗原并充分乳化，使抗原与佐剂形成油包水乳剂佐剂和抗原的比例为 1：1乳化的方法有两种：研磨法 搅拌混合法是否乳化的鉴定方法是将 1 滴乳剂滴入水中，若立即散开，则为未乳化好，若不散开，则为乳化完全 二、佐剂的
5、作用机制（一）改变抗原的物理性状，延缓抗原降解和排除，从而更有效地刺激免疫系统（二）刺激单核强其处理和提呈抗原的能力 （三）刺激淋巴细胞增殖和分化免疫佐剂：与抗原同时或预先注射于机体能增强机体免疫应答或改变免疫应答类型的辅助物质第三节抗血清的制备一、抗血清的概念含有抗体的血清，就是抗血清将免疫原接种给动物，该动物在抗原刺激下，体内多个 B 细胞激活并产生针对某一抗原的抗体，其混合物为多克隆抗体采集动物血液，分离血清，即得到抗血清二、免疫动物的选择能用于制备抗血清的动物主要是哺乳类和禽类，常用的有家兔、绵羊、豚鼠、鸡、山羊和马（一）抗原来源与动物种属的关系抗原来源与动物种属差异越大，免疫原性越强
6、，免疫效果越好 （二）动物个体的选择动物个体必须适龄、健康、体重合适抗体需求量大时，可选用马、绵羊等大动物抗血清需求量少时，可选用家兔、豚鼠和鸡等小动物（三）抗血清的分为 R 型和 H 型临床医学检验技士考试辅导临床免疫学和免疫检验 第 4 页R 型抗血清是用家兔及其他动物免疫产生的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较宽，适于作诊断试剂H 型抗血清是用马等大动物免疫获得的抗体，抗原抗体反应比例合适范围较窄，一般用作免疫治疗（四）抗原的性质对于蛋白质抗原大部分动物皆适合，常用的是山羊和家兔在某些动物体内有类似物质时，蛋白质抗原对这些动物免疫原性极差，如 绵羊、胰岛素对家兔、多种酶类对山羊，免疫后均不
7、易产生抗体 三、免疫程序（一）免疫原的剂量免疫原剂量过大或过小都可使动物产生免疫耐受，在一定剂量范围内，免疫原剂量越大，产生的抗体效价越高 （二）免疫途径有皮内、皮下、肌内、静脉、腹腔、淋巴结等途径皮内或皮下免疫时一般采用多点注射初次免疫一般选择皮内接种，加强免疫和颗粒性抗原一般选择静脉注射。宝贵抗原可选择淋巴结内微量注射法。（三）免疫间隔时间首次免疫后，因机体正处于识别抗原和进行 B 细胞活化增殖阶段，如果很快进行第 2 次注入抗原，极易造成免疫抑制 若间隔时间太长，则刺激减弱，抗体效价不高第 1 次与第 2 次免疫间隔时间以 1020 天为好 第 3 次及以后的间隔一般为 710 天 四、
8、动物采血法动物经免疫 35 次后，如抗血清鉴定合格，应在末次免疫后 57 天及时采血。如抗血清效价不理想可追加免疫 12 次后再行采血。目前较常用的动物采血方法有 3 种。（一）颈动脉采血法 最常用（二）心脏采血法 （三）静脉采血法 五、血清收集动物采血后，应尽快分离血清，分离血清的方法常采用室温自然凝固，然后置 37或 4使血块收缩后，收集血清 第四节 抗血清的鉴定和保存一、抗血清的鉴定（一）抗体特异性的鉴定 常用双向免疫扩散法 （二）抗体效价的测定颗粒性抗原采用凝集试验可溶性抗原采用双向免疫扩散试验、）抗体纯度的测定采用 双向免疫扩散试验、免疫电泳等方法临床医学检验技士考试辅导临床免疫学和
9、免疫检验 第 5 页（四）抗体亲和力的测定二、抗血清的保存（一） 28保存：用于短期保存（二）冷冻保存：是常用的抗体保存方法将抗体分为小包装，在20保存，一般可保存 5 年，效价不会明显下降，但应避免反复冻融（三）真空干燥保存：用真空冻干机进行干燥，封装后可长期保存，一般在冰箱中可保存 510 年第五节 抗血清的纯化抗原免疫动物制备的抗血清是成分复杂的混合物，除含有特异性抗体外，还存在与目的抗体不相关的成分 最常见的是提取抗血清中的特异性 单价抗体一、特异性 清蛋白的分级分离常用凝胶过滤法，按分子大小可分为 3 组：第 1 组包括 一些脂蛋白；第 2组主要是 较少量的 ；第 3 组主要是白蛋白、血清黏蛋白、转铁蛋白等。、单价特异性抗血清单价特异性是指血清只与其特异性抗原发生反应免疫得到的抗血清总是有抗白蛋白等杂抗体存在。杂抗体的去除有两种方法：
