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1、辫誊瓢虹。础；童溜 溅篙越蛩， _| ： 一，一。 1i；bk甜。一罐t晰蚌j懈竭湖嫩昏毹-；矗举世_坤I_溅i囊峨辅j粥如碘嵩飞一0W一篓懑皇王+0凶吐托博裾豢一汹藕谩誓“蓬缩略语CT(chitin)甲壳素CTS(chitosan)壳聚糖CMCTS(carboxymethyl chitosan)羧甲基壳聚糖HECTS(hydroxyethyl chitosan)羟乙基壳聚糖PET(polyethyleneterephthalate)聚对苯二甲酸酯ePTFE(polytetmfluoroethylene)聚四氟乙烯PU(polyurethane)聚氨酯VEC(vascularendotheli
2、al cells)血管内皮细胞HUVEC(human umbilieal vein endothelial cells)人脐静脉血管内皮细胞SMC(smooth muscle cells)平滑肌细胞PBS(Phosphate Buffered Saline)磷酸缓冲液FGF(fibroblast growth factors)成纤维细胞生长因子PDGF(Platelet Derivation Growth Factor)血d,板衍生生睦因子VEGF(vascular endothelial cell growth factors)血管内皮生长因子DAB(Diamino benzidine)一-
3、氨基联苯胺ECM(Extra cellular matrix)细胞外基质EPCs(endothdial progenitor cells)血管内皮祖细胞PGA Oolyethylene glycol acid)聚乙二醇酸PLA(polylacfiu acid)聚丙醇酸叫H吐显盛地韭丛工鱼暨簦出啦直皇瞧肛丑扛性赶盈PLLA(polyglycolic acid)TGF一1(transforming growth factor-1)转化生长因子一1SEM，Scanningelectron microscopy)扫描电镜Gel fgelatin)nJ胶EDTA fthylene diaminetetr
4、aacetic acid)K,二胺四乙酸二纳DMSO(dimethyl suphcoxide)二甲基亚砜HE(Hematoxylin and eosin)苏木精一伊红MTT(Methyl thiazolyl tetrazolium)g目甲基偶氮唑盐GAG(glycosaminoglycans)软骨基质糖胺多糖FN ffibronectin)纤维连接蛋白壳聚糖小口径可降解人工血管生物学性质与应用研究摘要心m管疾病是危害人类健康的常见疾病之一，对于问胚比较严重的患者，最常用的治疗手段及辅助治疗手段就是血管移植手术m，因此穆植血管的来源就成为一个很关键的问题。解决这一问题的一个重要手段就是构建人工血
5、管。合成高分子聚合物材料人工血管在代用大动脉血管方面已经取得了较满意的效果，然而在中动脉、小动脉和静脉(=100因此判定人工血管细胞毒性为0级。篙一嚣。胁一I岫一砌一盯Figure 3-3Theo印啪a口ofm硼b咖cofthemfificjavasculpr砷目iswellB山c conuuIs AB眦thephotos of恤cclb(10x)ofthenlTolsm 3柚d 5蛳，r即鲥MC，D，m船由妇of嘶ctlls110x)mcImfm咖h血#oflhe日舒d日IL如吲he哪“3d 5d即。n币a“嘶thc吐tochonMd activity硝蜘F姗ee,lltozlty器。图34
6、工血管覆提灌培养L929目腿MTT结果Figu”34MTTwofL929cdl啪a口orme螂瑚m”p岫如3-,5却衅p州insto coutrol gToup23人工血管体外抗凝性观察凰3-5显示，古肝素和不含肝素的人工血管体外抗凝效果。含有肝素的人工血管在浸入新鲜血液中后24 h内保持管腔通畅，无血栓出现，试管内的血液也保持持续抗凝。而无肝素的人工血管在浸入新鲜血液后，2min内血液凝固，官腔被凝固的血液栓塞试管内的血液也都凝集成血块。65432lO0000n0丑睦旌盎墨童尘旦兰厶王查置曲生蛔堂性厦盏应田互拄坳宜对含肝素的人工血管进行生理盐水溶液浸提，不同观察点结果显示，在溶菌酶浸提25d
7、内，人工血管抗凝血性能始终良好。所有样品与新鲜血液接触的24 h内，可持续保持抗凝血，无血凝发生。 一一 c D圈3-5古肝素和不古肝置凡Im臂体外抗凝血测试B为古肝蠹的工血管在浸入新鲜血掖后的横q 面和外形观察；CD为不吉肝囊的工血管在浸入薪鲜血最后舶擞面和外形观察。Fl口时35Tk删嘲*Il咖甜tbc硎五c叫Y鳓Ilr呻曲醯谳叫wh啪h单蚰Bthc哪5硎蜘岫m“hPm日e硎ob蚓d妇of妇仰dIh螂柚口呻埘蛸uwilhh印疵CDB也e口o科b曲蚶v曲n皿dmc删Ie枷曲曲9口删舶ofme触越v僦口ro札h嘲日埘mam n24人工血管体外溶血率人工血管体外溶血率实验结果如表3名听示，人工血管
8、体外溶血率为0 5，满足了临床上对医用材料溶血率不i暂于5的要求。因此人工血管体外溶血率是符合医用标准要求的。表30人工m管件蚪溶血率潮试结果竺兰!竺竺竺竺：!：竺：!竺：竺：竺竺=咖NI m N3 N4 N5 ODMkmlys4 ralcmlmve蛐I nO凹 OOlO 0008 0011 0009 n呦0003 0N皑Ehc州I n70796 0831 0814 0772 0 799-00112 100ExMImm目Fq 0012 0014 0013 0014 0012 0013=I-00003 O 525人工血管血小板粘附实验含肝素的人工血管及不含肝素的人工血管血小扳粘附的扫描电镜结果如
9、图42丑睦旌盎基箍d!旦霆厶王照壁殴生扭生拄厦皇区田丑it盘鲤珏所示。从图36中可以看出，含肝素的人工血管内膜表面光滑，均匀的多孔结构没有血小板的粘附。不舍肝素的人工血管内膜表面被大量血小板枯附，表面粗糙已经观察不到多L结构。A B胃3体外血小扳帖附扫描电饿月片。A为对m组是T舍素的人Tm管内膜-B为蛮验组是害有*寨的】：m管内膜Figure 3SEM photosofplak旧adhion“Pmm饥【in卅A删b01mcmembraneofthemb哪eisnm咖simd ofhoTin B：岫jbrjncoflhemificlal哪Jlisiaed ofthe al“岬nh26人工血管肝素
10、体外缓释测定肝素标准曲线如图37所示。不同观察点人工血管每周释放量以及人工血管中肝紊的累计释放率测定及计算数据如表3-3所示，不同观察点人工血管每周释放量以及人工血管中肝素的累计释放率曲线分别如图3-8和图39所示。结果显示，在超过2各月的降解期内，人工血管可以稳定且持续的释放肝素，在整个过程中也没有突释的现象出现说明肝素和其他原才斟稳定的交联在一起-而不是游离存在。图37肝素浓度标准曲线Figure 3-7The standardofhc口arln conccnhafion表30人二血管肝素体外释放结果测定(平均值标准方差)Tablc 3-3The result offhereleaseof
11、hepafin ofartificial vascularprosthesisin vitroW弃&抽m口#Im*m*袖学”m日月#研目week 肝素每周释放含量(J,gm1) 肝素每周累计释放率()l 0 67910 056 0 16士0 022 5 698士0147 l 50士0153 3 828i0165 2AI士0 244 4 66l士0 186 35l0285 5柏瑚253 478士0 566 1l 248i0 528 743：1：0 727 l 5390062 779士0768 4234：-0474 87910 799 6 9820 391 10 43i0913。2520强15lo
12、 。名。誓。誓“1：5：2。3。0I巴磊f2 7人工血管组织相容性图3-10和图3-11为人工血管皮下降解过程和植入部位的组织腿染色观察-圈3一12和图3-13为人工皿管肌肉植入部位降解过程观察和组织HE染色观察。结果显示，在植入初期，对照组和实验组炎症反应均比较严重，且在肌肉植入一个月时人工血管周围有包膜产生。在植入六个月以后，与对照组相比人工血管出现明显降解，炎症反应已经减轻很多，此时炎症细胞已由外圉主要转移到材料内部结构，内部可见大量细胞开始长入。而且炎症反应已经明显减轻。在植入十二个月以后，人工血管完全降解，实验组的炎症细胞已经基本消失，在皮下和肌肉中的材料也已完全降解吸收，原来的材料
13、部位由正常皮下和肌肉组织细胞长入。皮下降解和肌肉降解相比，人工血管的皮下降解速度要快于肌肉降解。而对照组的尼龙手术缝合线在整个植入过程中都没有明显降解且整个过程中都有明显的炎症反应。D E F目3-10工血管厦赣奇缝皮下植入唇群孵敷袋i觋寮。A-C分别为在植后第16。12十月时的缝台线z D-F分射为在檀后第16，12个月时的工m管。F嘧噼3-10Theob蚋ati0ofthedei”detlm蚰dinfiwmq蜘ofthechlt一-hepafiIIu枷珊d_“6鼬I vkp髓d劬(At)mdn啪I州(D-F)m3驴，9018俨4畔，msp嘲i虹日 CD E F圈3-11工血管厦缝音线皮T植
14、八部位组织的m染色田片c分别为缝合线皮下植入1612十月后的植入鄙位蛆织m垂色田片(】0)D-F分别为人工血管皮下植16，12个月后的植入部位组织HE搬色图片(IOxl。Figure 3-Il HMWIil眦inalning oflhe speeim哪柚dHmclmbeingpmibthebacks日hmLm籼(10咄_cethemH咄l，t12months aft叮b商gimparaed,fp硎vo眦mdD-F_tthea日岫衄t|l鲫9柚旨k哪雕坤1q12momhk”叩劬由Them们mmon蛳I岫outlhe呻辩岫have，Hm捌h衄蚯D E F目313人工m管厦缝台线肌冉植八邦位组织的脏
15、染色田片。A-C分别为缝合线肌内植入I612十月后的植邮位组织HE染色图片10x】D-F分别为人Im管肌冉檀八I612十月后的植都位组织HE她圈片(10x)Figtee 3-J3H叫蚋h血岫s of岫i咖摹andn帆I妇妊雌pztintomemi曲越Bdc(10x)“wmthe controlsbeinginI，6，12thmonth,mdD-Fisthee删beingHinI，t12thm眦k rp枷vdy28人工血管急性全身毒性小鼠尾静脉注射1 m1人工血管生理盐水没提液，对照组注射等体积生理盐水。分别在注射48 h、96h、144h后，根据观察指标分别观察实验组小鼠和对照组小鼠急性全肾毒性反应情况。结果表明，两组小鼠的体重变化、外观、活动行为、食欲、大小便、被毛等各指标均正常。无明显中毒反应。判断急性全身毒性试验合格。裹34急性全身实验中动物体重变化Table3-4Themeas盯ementofchangedweightin ecute systemictoxicitytest亳鬻萋鬻、i1式?冬；量羹：?一，1、一t。强毪戆、文i0乏蕊
