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1、符号说明付丐饥明ATP：Adenosine Triphosphate，腺嘌呤核苷三磷酸CAT：Catalase，过氧化氢酶DCFHDA：2，7Dichlorofluorescein 3,6diacetate，2，7二氯荧光黄双乙酸盐DNA：Deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸DMSO：Dimethyl Sulphoxide，二甲基亚砜EDTA：Ethylene Diamine Tetra Acetic Acid，乙二胺四乙酸LPO：Lipid peroxidation，脂质过氧化MDA：Malondialdehyde，丙二醛OD：Optical density,光密度OEC
2、D：Organization of Economy and Cooperation Development，经济合作与发展组织OTM：Olive Tail MomentOlive，尾距ROS：Reactive oxygen species，活性氧PBS：Phosphate Buffered Saline，磷酸盐缓冲液SCGE：Single Cell Gel Eletrophoresis，单细胞凝胶电泳实验SD：Standard deviation，标准偏差SOS：Sodecyl sulfate，sodium salt，十二烷基硫酸钠SOD：Superoxide Dismutase，超氧化物歧化
3、酶SPSS：Statistical Package for the Social Sciences，社会科学统计软件包TBA：Thiobarbituric Acid，硫代巴比妥酸TBARS：Thiobarbituric Acid Reactive Substances，硫代巴比妥酸反应物Tris：Tris(Hydroxymethyl)Aminomethane，三羟甲基氨基甲烷U：Activity Unit，酶单位UV：Ultraviolet，紫外目 录中文摘要IAbstract。I I1前 言11fju 舌111离子液体的研究进展1111离子液体概况1112国内外研究状况112离子液体毒性测定
4、所选取的指示生物313本实验各项测定指标一414本课题研究内容72材料与方法821药品试剂一822仪器设备923供试生物及染毒方式924蛋白浓度的测定10241标准曲线的绘制10242样品蛋白测定1025抗氧化酶活性的测定11251斑马鱼体内SOD活性的测定11252斑马鱼体内CAT活性的测定1226斑马鱼体内ROS含量的测定1327斑马鱼体内MDA含量的测定13271各试剂配制13272组织匀浆液的配备13273斑马鱼体内MDA含量的测定1428彗星实验14281各试剂的配制14282斑马鱼肝细胞悬浮液的制备15283电泳胶板的制作15T284细胞裂解15285 DNA解旋1 5286电泳1
5、 5287中和、脱水一1529数据处理1631三种离子液体对斑马鱼肝脏抗氧化酶活性的影响17311三种离子液体对斑马鱼肝脏SOD活性的影响17312三种离子液体对斑马鱼CAT活性的影响1832三种离子液体对斑马鱼体内ROS含量的影响2033三种离子液体对斑马鱼体内MDA水平的影响2334三种离子液体对斑马鱼肝脏细胞DNA的损伤情况25341彗星图像25342三种离子液体对斑马鱼肝细胞DNA损伤(0TM)的影响25343【C4mimBr和C6mimBr对斑马鱼肝细胞DNA损伤程度的分级264讨论3041三种离子液体对斑马鱼的氧化胁迫作用3042三种离子液体对斑马鱼体内MDA水平的影响分析3 l4
6、3三种离子液体对斑马鱼DNA的损伤情况研究3244几种离子液体的毒性差异3345氧化胁迫和DNA损伤实验中斑马鱼的雌雄差异3446实验中各生物指标间的相互关系345结论366本论文创新之处377参考文献388致谢一449攻读学位期间发表论文45山东农业大学硕士学位论文中文摘要离子液体(Ionic Liquids)是指在室温下呈现液态的、完全由阴阳离子所组成的盐。由于其在水中的溶解性高，ILs会通过工业排污或意外泄漏进入环境中。为探究ILs在环境中的存在及迁移情况，其毒性方面的研究势在必行。本实验选取了备受关注的三种不同碳链长度的溴化咪唑类ILs【ClomimBr、C6mimBr和C4mimBr
7、进行较长期低浓度毒性实验，将斑马鱼的雄鱼和雌鱼分别暴露于空白对照和5，10，20和40 mgL离子液体溶液中，于染毒后的第7，14，21和28天，分别进行各指标的取样测定。通过测定离子液体对斑马鱼的抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)乘I过氧化氢酶(CAT)】活性、活性氧(ROS)含量、脂质过氧化(MDA)程度和DNA损伤情况，综合评价了离子液体的氧化胁迫能力和遗传毒性，为全面地认识和了解离子液体可能给水生生态系统带来的影响提供理论基础。本实验结果显示，不同浓度的离子液体对斑马鱼具有一定的毒性效应，本实验中所测定指标均有显著的诱导或抑制效应，具体来说：1斑马鱼肝脏中SOD活性在C4mimBr作用下
8、呈现出先激活后抑制的规律，而在C6mimBr和CiomimBr作用下SOD活性呈现始终抑制；斑马鱼CAT活性在C4mimBr和C6mimBr作用下呈现出先激活后抑制的规律，而在ClomimBr作用下呈现始终抑制。斑马鱼抗氧化酶活性在三种ILs作用下变化则不尽相同，但高浓度都呈抑制趋势。在C4mimBr染毒初期，雌鱼肝脏SOD酶活性受到显著刺激，雄鱼SOD活性在5mgL时受到刺激。2C4mimBr染毒后，斑马鱼体内的ROS在高浓度时显著增加，MDA含量也相应的发生变化；C6mimBr矛lClomimBr作用下，各处理组ROS含量和MDA水平都有所增加。三种ILs染毒后，DNA损伤程度均随着离子液
9、体染毒浓度的升高而增强。C4mimBr染毒后第1428天，雄鱼高浓度处理组MDA含量上升的程度远大于雌鱼相应的处理组。DNA损伤情况来看，雄鱼情况较雌鱼严重。3本研究还探索了不同碳链长度的咪唑类离子液体对斑马鱼体的氧化胁迫和基因毒性的大小，其顺序为：C4mimBrC6mimBrC4mimBrThe explorationof the order of ILs with different lengths of alkyl chain may provide a theorethical basis forthe estimation on toxicity of lLs and further
10、 application in industryKeywords：Ionic liquid，zebrafish，oxidative stress，comet assayIII山东农业大学硕士学位论文LLj1 日IJ 舌11离子液体的研究进展111离子液体概况ILs是指在室温或接近室温下呈现液态的、完全由阴阳离子所组成的盐，也称为低温熔融盐。通常由有机阳离子和无机或有机阴离子构成，在化学反应、分离过程等方面有广泛的应用。常见的阳离子有季铵盐离子、季鳞盐离子、咪唑盐离子等如图1，阴离子有六氟磷酸根离子、四氟硼酸根离子、卤素离子，另外还有(CF3S02)2N、 (CN)2N。等(蒋伟燕等，2008)
11、。ILs种类繁多，改变阳离子和阴离子，可以设计合成出不同的lI，S。早lI+nNK眉亍二PR露k烷基铵阳离子 烷基鳞阳离子 N、N 7二烷基咪唑阳离子 N烷基吡啶阳离子图1离子液体常见阳离子组成Fig1 Common cations of ionic liquids近年来有关新ILs的合成和其物理、化学性质的研究以及应用方面已有较多报道，它们具有一些独特的物理、化学性质，如无挥发性，不易燃，高沸点，可循环利用，具有高的化学稳定性、热稳定性及较强的溶解性能，因此被认为是继水和超临界二氧化碳后的又一大类绿色溶剂(何爱珍等，2009)。最近十年来，ILs被广泛应用于化工分离、有机合成、电化学、材料加工等领域(Koel etaL，2005；Liu etal，2007；Stumpfetal，2007；Wilkes et
