不同产地当归炮制前后质量研究

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1、目录摘要1. 当归的炮制方法及工艺参数1.1药材1.2炮制品1.2.1酒炙法1.2.2包装2.薄层色谱（TLC）鉴别2.1试药及对照品与设备2.1.1试药及对照品2.1.2设备2.2实验方法2.2.1利用当归对照药材建立的薄层色谱鉴别方法2.2.1.1对照药材溶液的制备2.2.1.2供试品溶液的制备2.2.1.3薄层色谱条件2.2.2利用阿魏酸对照品建立的薄层色谱鉴别方法2.2.2.1对照品溶液的制备2.2.2.2供试品溶液的制备2.2.2.3薄层色谱条件2.3实验结果2.3.1利用当归对照药材建立的薄层鉴别图谱2.32 利用阿魏酸对照品建立的薄层鉴别图谱2.3.3讨论分析3当归炮制前后 HP

2、LC特征图谱及阿魏酸的含量3.1试剂与仪器32 方法与结果3.2.1色谱条件3.2.2对照品溶液的制备3.2.3供试品溶液的制备3.3特征图谱方法学考察3.3.1精密度试验3.3.2稳定性试验3.3.3重现性试验3.4炮制前后特征图谱分析3.4.1特征图谱的建立3.4.2特征峰的指认3.5阿魏酸含量测定方法学考察3.5.1标准曲线3.5.2精密度试验3.5.3稳定性试验3.5.4重复性试验3.6当归炮制前后阿魏酸的含量测定4 讨论 4.1样品提取方法的选择4.2样品提取溶剂的选择4.3波长选择4.4流动相4.5色谱柱4.6柱温和流速选择5实验结果不同产地当归炮制前后质量研究摘 要：目的 研究不

3、同产地炮制前后的质量变化。方法 采用高效液相色谱法、薄层色谱法等测定四川、甘肃等产地当归炮制前后当归素、异当归素的含量变化。结果 炮制使不同产地当归中当归素、异当归素的含量增加，而产地不同，当归的有效成分量不同。结论 炮制能使不同产地当归中有效成分增加，显著提高中药当归的生物活性，产地不同，药物质量评价不同。当归为伞形科植物当归的干燥根。具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功效。主要用于血虚诸证；月经不调；经闭；痛经；症瘕结聚；崩漏；虚寒腹痛；痿痹；肌肤麻木；肠燥便难；赤痢后重；痈疽疮疡；跌扑损伤。1. 当归的炮制方法及工艺参数1.1药材当归药材及饮片样品由浙江中医药大学中药饮片厂加工炮制而成，

4、每批药材样品各自加工成相应的炮制品，经南京中医药大学陈建伟教授鉴定为当归药材及饮片。样品编号如下表所示。3个产地当归药材和炮制品来源品种 批号 产地 来源080728 四川中江 浙江中医药大学中药饮片厂080606 甘肃渭源 浙江中医药大学中药饮片厂当归药材080605 甘肃岷县 浙江中医药大学中药饮片厂080728 四川中江 浙江中医药大学中药饮片厂080606 甘肃渭源 浙江中医药大学中药饮片厂酒当归080605 甘肃岷县 浙江中医药大学中药饮片厂1.2炮制品1.2.1酒炙法将当归薄片 55.0 kg，加黄酒 5.5kg拌匀，润透。启动炒药机（型号：自控温鼓式炒药机 CGY-750W） 。

5、加热铁锅_5_min 至 60。A将闷润好的当归薄片置 30 kg置预热好的热锅中，温度为 70110 炒_30_min 至干，取出，晾凉。B将闷润好的当归薄片置 30 kg 置预热好的热锅中，温度为 100130 炒_22_min 至干，取出，晾凉。1.2.2包装酒当归饮片按每包装袋 1kg称重，装入相应的塑料包装袋内，封口，贴上标签。原药材 55 kg，共收酒当归饮片_ 38.84kg。成品收率 70.6_%2 薄层色谱（TLC）鉴别2.1实验材料2.1.1试药及对照品当归对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：120927-200613)；阿魏酸对照品(朗泽植提)。乙醚、甲醇、环己烷、乙

6、酸乙酯、二氯甲烷等试剂为分析纯。2.1.2实验仪器薄层色谱扫描系统(瑞士 CAMAG公司)，包括半自动点样仪 Linomat 5-150743及自动成像系统 Visualizer-151204。硅胶预制薄层板 GF-254(青岛海洋化工厂)，用前 105活化。R-210旋转蒸发仪（瑞士 BUCHI公司） ，KQ5200DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） 。2.2实验方法22.1利用当归对照药材建立的薄层色谱鉴别方法2.2.1.1对照药材溶液的制备取对照药材粉末约 0.5 g，精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶中，精密加入乙醚 30 mL，密塞，超声处理（200W，40 KHz

7、）10min，过滤，滤液在 60下减压蒸干，用 95%乙醇定容至1mL，即得到对照药材溶液，冷藏备用。2.2.1.2供试品溶液的制备取当归药材及饮片样品粉末约 0.5 g，精密称定，分别置 100 mL具塞锥形瓶中，精密加入乙醚 30 mL，密塞，超声处理（200W，40 KHz）10min，过滤，将滤液在 60下减压蒸干，分别用 95%乙醇定容至 1mL，即得到当归药材和饮片的供试品溶液，冷藏备用。2.2.1.3薄层色谱条件采用瑞士 CAMAG公司的薄层色谱系统进行自动点样和图像采集。点样：2uL，条带状点样，条带宽度为 6mm，点样距两边各为 12mm，条带距底边 12mm.展开剂：正己烷

8、-乙酸乙酯（4：1）为展开剂。精密量取正己烷 20mL，乙酸乙酯 5mL。展开缸：双槽展开缸，10cm10cm。展开：展开缸预平衡 15分钟，上行展开，展距约为 9cm。检视：置 366nm紫外灯下检视。2.2.2 利用阿魏酸对照品建立的薄层色谱鉴别方法2.2.2.1 对照品溶液的制备取阿魏酸 5mg，精密称定，置于 5 mL容量瓶中，混匀，得浓度为 1.0mg/mL的对照品溶液，冷藏备用。2.2.2.2 供试品溶液的制备取当归药材及饮片样品粉末约 3.0g，精密称定，加入 1的碳酸氢钠溶液 50mL，超声10min，离心过滤，滤液用稀盐酸调 pH至 2-3，用乙醚萃取两次，每次 20mL，合

9、并萃取液，蒸干，用甲醇定容至 1mL，即得。2.2.2.3薄层色谱条件采用瑞士 CAMAG公司的薄层色谱系统进行自动点样和图像采集。点样：3uL，条带状点样，条带宽度为 6mm，点样距两边各为 12mm，条带距底边 12mm.展开剂：环己烷：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲酸4：1：1：0.1 为展开剂。展开缸：双槽展开缸，10cm10cm。展开：展开缸预平衡 15分钟，上行展开，展距约为 9cm。检视：置 366nm紫外灯下检视。2.3 实验结果2.3.1 利用当归对照药材建立的薄层鉴别图谱当归药材和酒当归样品的薄层色谱图如下图所示： 1 2 3 4 5 6 7 8各点依次为：1. 对照药材、 2.

10、四川中江（药材）080728、 3. 甘肃渭源（药材）080606 4. 甘肃岷县（药材）080605 5. 四川中江（酒当归）080728、6. 甘肃渭源（酒当归）080606 7. 甘肃岷县（酒当归）080605、 8. 对照药材（T:16，RH:35%）2.3.2 利用阿魏酸对照品建立的薄层鉴别图谱当归药材和酒当归样品的薄层色谱图如下图所示： 1 2 3 4 5 6 7 8各点依次为：1. 阿魏酸 2. 四川中江（药材）080728、 3. 甘肃渭源（药材）080606 4. 甘肃岷县（药材）080605 5. 四川中江（酒当归）080728、6. 甘肃渭源（酒当归）080606 7.

11、甘肃岷县（酒当归）080605、 8. 阿魏酸（T:14，RH:55%）从图中可以看到当归炮制前后，成分变化不明显，其中有些成分的斑点颜色加深，可能炮制后成分含量增加，而也有成分斑点颜色减弱，可能成分减少。3当归炮制前后 HPLC特征图谱及阿魏酸的含量测定研究3.1仪器与试剂岛津 LC-20AB高效液相色谱仪，包括 DGU-20A3在线脱气机、SIL-20A 自动进样器、SPD- M20A检测器、CTO-20A 柱温箱和 Class-VP色谱工作站；KQ5200DB 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司） ；METTLER TOLEDO AL104电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司

12、)；高速万能粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。甲醇、乙腈为色谱级（美国Merck公司） ，其他试剂为分析纯。阿魏酸对照品由朗泽植提公司提供。3.2 方法与结果3.2.1 色谱条件色谱柱为 YMC-Pack ODS-A(250 mm4.6 mm, 5m)（YMC Co. Ltd, Japan） ，柱温为 35，流速为 1mL/min，检测波长为 254nm，流动相为乙腈和 0.2%的乙酸水溶液，梯度洗脱程序如下表所示：流动相线性洗脱梯度程序时间/min 0.2 % 乙酸水溶液（A）/% 乙腈（B）/%0 95 530 80 2065 60 4075 50 5085 45 5595 45 551

13、10 35 65120 15 85125 95 53.2.2对照品溶液的制备取阿魏酸 5mg，精密称定，置于 5 mL容量瓶中，混匀，得浓度为 1.0mg/mL的对照品溶液，冷藏备用。3.2.3供试品溶液的制备精密称取样品粉末 1.0g置 100mL具塞锥形瓶中，加甲醇 30 mL，置超声机中超声提取 30 min，取出放冷，用滤纸滤过，药渣连同滤纸放回锥形瓶中，再加甲醇 30mL，置超声机中超声提取 30 min，取出放冷，用滤纸滤过，合并两次滤液，减压蒸干，用甲醇定容至10mL，即得。进样前以 0.45m 微孔滤膜滤过。3.3特征图谱方法学考察3.3.1精密度试验 取甘肃渭源当归药材，依法

14、制备供试品溶液并连续进样 6次进行指纹图谱测定，以 1号峰为标准峰计算各共有峰的相对保留时间 RSD均小于 0.196%，相对峰面积的 RSD均小于 2.53%。结果见下表。精密度试验相对保留时间峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 101 1.000 1.365 1.446 2.176 2.467 2.714 2.763 2.818 2.850 3.7682 1.000 1.363 1.443 2.172 2.463 2.710 2.759 2.814 2.846 3.7633 1.000 1.364 1.445 2.177 2.467 2.715 2.

15、764 2.819 2.851 3.7694 1.000 1.364 1.444 2.174 2.465 2.712 2.760 2.816 2.848 3.7655 1.000 1.362 1.443 2.172 2.463 2.710 2.759 2.814 2.846 3.7626 1.000 1.366 1.447 2.182 2.476 2.724 2.773 2.829 2.861 3.782均 1.000 1.364 1.445 2.175 2.467 2.714 2.763 2.818 2.850 3.768值SD0.0000000.0012160.0015210.0037140.0048340.0052920.0053810.0055110.0056080.007374RSD/%0.000 0.089 0.105 0.170 0.196 0.195 0.194 0.195 0.196 0.195精密度试验相对峰面积峰 1 峰 2 峰 3 峰 4 峰 5 峰 6 峰 7 峰 8 峰 9 峰 101 1.000 2.035 0.460 0.252 1.165 0.291 0.448 5.544 1.588 0.894 2 1.000 2.014 0.459 0.245 1.137 0.289 0.446 5