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1、1肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤及双灵固本散的保护作用研究 作者:黄世超 毛明华 陈金生 任武生 余慧珠 【关键词】 肿瘤患者【摘要】 目的 观察肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤及免疫功能损伤,并观察双灵固本散(中华灵芝宝)的保护作用。方法 60 例肿瘤患者分成四组,分别为放疗对照组、服用双灵固本散放疗组(双灵放疗组) 、化疗对照组和服用双灵固本散化疗组(双灵化疗组) 。用 CB 法测定外周血双核淋巴细胞微核率,比较四组肿瘤患者在放、化疗前、后外周血双核淋巴细胞微核率(MNR) 、T淋巴细胞转化率(TLTR)及免疫球蛋白(IgG、IgA 、IgM)的变化。结果 放疗对照组和化疗对照组
2、放、化疗后 MNR()显著性升高,而 TLTR(%)和 Ig(IgG、IgA、IgM)均显著性降低;双灵放疗组和双灵化疗组在放、化疗后,MNR() 、TLTR(%)和免疫球蛋白(IgG 、IgA、IgM)均无显著性变化。四组肿瘤患者放、化疗后外周血双核淋巴细胞微核率()与 T 淋巴细胞转化率(% )呈负相关关系。结论 双灵固本散对肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能损伤有明显保护作用。2关键词 肿瘤患者 放、化疗 双灵固本散双核淋巴细胞微核率 T淋巴细胞转化率 免疫球蛋白 Study on the GCP protecting the patients with tumor from
3、 the 【Abstract】 Objective To explore the Ganoderma Complex Power(GCP)protecting the patients with tumor from the injury of perepheral blood lymphocytes and immunity after radiotherapy or chemotherapy.Methods The60patients with tumor were divided into four groups,namely the radiotherapy control group
4、、the taking GCP radiotherapy group(GCP radiotherapy group) 、the chemotherapy control group and the taking GCP chemotherapy group(CGP chemotherapy group).A comparison was made in the four groups by measuring their cytokinesis-blocked micronucleus rates in peripheral blood lymphocytes(MNR ) 、T lymphoc
5、yte transformation rates(TLTR)and immunoglobulin( Ig,-IgG 、IgA、IgM).The MNR was measured by the CB method.Results Compared with those before therpay,the MNR in the two control 3groups after radiotherapy or chemotherapy was significantly increased,but the TLTR and the Ig(IgG 、IgA、IgM)significantly de
6、creased.The MNR、the TLTR and the Ig(IgG 、 IgA、IgM )in the two GCP groups after radiotherapy or chemotherapywere no significantly differentwith those before the therapy.There existed a negative correlation between the MNR and the TLTR in the four groups.Condusion The Ganoderma complex Power(GCP)could
7、 protect obviously the patients with tumor from the injury of perepheral blood lymphocytes and immunity after radiotherapy and chemotherapy.Key words patients with tumor radiotherapy or chemotherapy Ganoderma Complex Power(GCP) micronucleus rates in lymphocytes(MNR) T lymphocyte transformation rates
8、(TLTR) immunoglobulin(Ig,-IgG、 IgA、IgM)细胞微核是细胞在有丝分裂时,因各种有害因素损伤,使细胞核成份残留在核外的微小核染色质(DNA)块。细胞微核率可作为评价药物、放射线对人、动物及体外细胞 DNA 损伤的直观、可靠的方法 1 。4人外周血淋巴细胞微核率的检测已用于监测化学药物和放射线所致 DNA 损伤效应 1 ,2 。用细胞松弛素 B 阻断胞质分裂,观察双核淋巴细胞中微核率的方法(简称 CB 法) ,使观察的双核细胞均经一次分裂,因此 CB 法使淋巴细胞微核检测更为敏感、完善、合理 3,4 。本研究通过 CB 法测定外周血双核淋巴细胞微核率并用常规方法测
9、定 T 淋巴细胞转化率、免疫球蛋白(IgG 、IgA、IgM) 。以观察肿瘤患者放、化疗后外周血淋巴细胞损伤和免疫功能改变及双灵固本散的保护作用。1 对象与方法1.1 研究对象 恶性肿瘤患者共 60 例,平均年龄51.16.9( 3783)岁,男 40 例,女 20 例,其中消化道癌 20 例,乳腺癌 20 例,肺癌 20 例,60 例中进行放射治疗的患者 20 例,进行化疗的患者 40 例。1.1.1 恶性肿瘤放疗组 共 20 例,按是否服用双灵固本散(中华灵芝宝)分为二组,二组患者一般情况见表 1。表 1 二组放疗患者一般情况比较略51.1.1.1 服用双灵固本散放疗组(简称双灵放疗组)
10、共 10例,男 6 例,女 4 例,平均年龄(51.77.4)岁,其中消化道癌 3例,乳腺癌 4 例,肺癌 3 例,在放疗前 5 天起服用双灵固本散(中华灵芝宝) ,每日 2 次,每次 2g,体重超过 60kg 者,每日 3 次,每次 2g,连续服用,在放疗前 23 天及放疗 10 次(累计放疗剂量 1800173cgy)后第 12 天,测定外周血双核淋巴细胞微核率()及 T 淋巴细胞转化率(%) 、免疫球蛋白( IgG、IgA、IgM ) 。1.1.1.2 放疗对照组 共 10 例,男 7 例,女 3 例,平均年龄 (52.66.4 )岁,其中消化道癌 3 例,乳腺癌 3 例,肺癌 4 例,
11、在放疗前 23 天及放疗 10 次(累计放疗剂量 1780166cgy)后第12 天,测定外周血双核淋巴细胞微核率( )及 T 淋巴细胞转化率(%)免疫球蛋白(IgG、IgA 、IgM ) 。由表 1 可见,二组患者的平均年龄、性别比、各癌症病种人数构成及 10 次放疗累计剂量差异均无显著性。1.1.2 恶性肿瘤化疗组 共 40 例,按是否服用双灵固本散(中华灵芝宝)分为二组,每组 20 例,二组患者一般情况见表 2。表 2 二组化疗患者一般情况比较 略61.1.2.1 服用双灵固本散化疗组(简称双灵化疗组) 共 20例,男 14 例,女 6 例,平均年龄(50.215.2)岁,其中消化道癌7
12、 例,乳腺癌 6 例,肺癌 7 例,在化疗前 5 天起服用双灵固本散(中华灵芝宝) ,每日 2 次,每次 2g,体重超过 60kg 者每日 3 次,每次 2g,连续服用。在化疗前 23 天及化疗 1 个疗程后第 23天,测定外周血双核淋巴细胞微核率()及 T 淋巴细胞转化率(% ) 、免疫球蛋白(IgG、IgA 、IgM) 。1.1.2.2 化疗对照组 共 20 例,男 13 例,女 7 例,平均年龄(50.811.2)岁,其中消化道癌 7 例,乳腺癌 7 例,肺癌 6 例,在化疗前 23 天及化疗 1 个疗程后第 23 天测定外周血双核淋巴细胞微核率()及 T 淋巴细胞转化率(% ) 、免疫
13、球蛋白(IgG 、IgA、IgM) 。由表 2 可见,二组患者的平均年龄、性别比、各癌症病种人数构成及各化疗药物使用人数差异均无显著性。1.2 方法 1.2.1 外周血双核淋巴细胞微核率检测方法 用 CB 法 3,4 。取患者静脉血 1ml 肝素抗凝,用 RPMI1640 培养液74ml 加小牛血清 1ml、植物血凝素(PHA)0.2ml 和受试血液0.5ml,在 37下全血培养 48h 后加细胞松弛素 B,其终浓度为5g/ml,继续在 37下培养 24h 后,按常规方法收获细胞,0.075mol/L KCl 低渗处理 10min,加甲醇冰醋酸固定液予固定5min 后离心,制片一天后,Giem
14、sa 染色,在油镜下随机续片,对每个标本统计 500 个双核淋巴细胞中的微核细胞数,微核率以表示。1.2.2 外周血 T 淋巴细胞转化率检测方法 用 T 淋巴细胞转化试验测定 5 。取肝素抗凝血 0.1ml(无菌) ,加入 1.8ml RPMI1640 培养液中,同时加入 PHA0.1ml,于 37 水浴温育 3 天,每天摇动 1 次,培养结束后取出吸去大部分上清液,加入 8.3g/L NH 4 Cl4ml 混匀,置 37 水浴 10min,取出 2500r 离心10min,弃去上清液,沉淀加 5ml 固定液(甲醇冰醋酸) ,室温作用 10min,离心去上清液,留 0.2ml 沉淀,用气干法制
15、片,Giemsa 染色 1020min,在油镜下随机续片计数 200 个淋巴细胞中转化细胞数,转化率以%表示。1.2.3 血清免疫球蛋白 用终点散射比浊法 5 测定血清 免疫球蛋白 IgG、IgA、 IgM 的浓度,以 g/L 表示。 2 结果82.1 恶性肿瘤二组放疗患者放疗前后双核淋巴细胞微核率及免疫功能指标测定结果 见表 3。表 3 二组放疗患者放疗前后外周血双核淋巴细胞微核率和免疫功能指标测定结果 略由表 3 可见,双灵固本散放疗组放疗后双核淋巴细胞微核率() 、T 淋巴细胞转化率(%) 、免疫球蛋白( IgG、IgA、IgM )(g/L )浓度均无显著性改变,但放疗对照组放疗后双核淋
16、巴细胞微核率显著性高于放疗前,而 T 淋巴细胞转化率(% )及免疫球蛋白(IgG 、IgA、IgM)浓度均显著性低于放疗前。在放疗前,二组的双核淋巴细胞微核率、T 淋巴细胞转 化率、免疫球蛋白(IgG 、IgA、IgM)的浓度差异均无显著性;但放疗后双灵固本散放疗组的双核淋巴细胞微核率显著低于放疗对照组,而 T 淋巴细胞转化率及免疫球蛋白(IgG、IgA 、IgM)浓度显著性高于放疗对照组。2.2 恶性肿瘤二组化疗患者化疗前后双核淋巴细胞微核率及免疫功能指标测定结果 见表 4。表 4 二组化疗患者化疗前后外周血双核淋巴细胞微核率和免疫功能指标测定结果 略9由表 4 可见,双灵固本散化疗组化疗后双核淋巴细胞微核率() 、T 淋巴细胞转化率(%)及血清免疫球蛋白(IgG 、IgA、IgM)浓度(g/L)均差异无显著性,但化疗对照组化疗后双核淋巴细胞微核率显著性高于化疗前,而 T 淋巴细胞转化