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1、科 技 信 息中央电视台 2011 年 3.15 晚会上，曝光了一些地方在动物饲养中滥用 “瘦肉精 ”的问题 。“瘦肉精 ”是盐酸克伦特罗的俗称，通用名称：Clenbuterol（CLB），化学名称： -(叔丁氨基）甲基-4- 氨基 -3，5- 二氯苯甲醇盐酸盐，分子式：C12H18Cl2N2O H Cl,结构式：盐酸克伦特罗是一种 2- 受体激动剂，具有蛋白同化作用,可以减少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高 。人类食用含有克伦特罗残留的肉品后会出现头晕 、心悸 、手指震颇等中毒症状 。滥用瘦肉精已成为重大的食品安全问题
2、。中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用 。但目前非法使用情况仍非常严重 。近几年来,接连发生数起人食用有 CLB 残留的肉品中毒事件 。造成 CLB 屡禁不止的原因一方面是利益驱使；另一方面是现在检测 CLB 的方法 、手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确 、迅速 、方便 、精确的检测方法 。检测 CLB 残留常用的方法有气相色谱 - 质谱联用法（GC-M S） 、高效液相色谱法（H PLC） 、酶标记免疫吸附测定法(ELISA) 、毛细管电泳法（CE）等 。1.气相色谱 - 质谱联用法(G C -M S)气相色谱 - 质谱联用法是我国 CLB 测定中的确证性方法NY/T468-2001
3、 。是最常用的 CLB 测定方法，能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性 、定量分析 。具有灵敏度高，假阳性率低等特点 。测定时一般需要柱前衍生，最常用的衍生试剂是双三甲基硅基三氟乙酰氨（BSTFA） 。本办法具有前处理过程烦琐 、检测时间长，需贵重仪器等缺点 。吴银良等1建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取 -气相色谱 -质谱分析方法 。 样品在碱化条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取，浓缩后用乙酸乙酯溶解，经SCX 固相萃取（ SPE）柱净化，经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨（ BSTFA）衍生，外标法定量 。盐酸克伦特罗的检出限为 0
4、.30g/kg。盐酸克伦特罗添加浓度在 1.05.0g/kg 范围内，添加回收率为 77.488.3；相对标准偏差（ RSD）为 3.15.1。胡明友等2建立了克伦特罗的测定方法，用甲醇提取 , 正己烷脱脂净化 , 然后旋转蒸发冷冻离心浓缩后加 0.1mmol/L 的盐酸溶解 , 加样到净化柱上，用 4%氨化乙酸乙酯洗脱后氮气吹干 , 甲苯溶解后加 BSTFA 衍生，用气相色谱 -质谱法进行测定 , 内标定量 。 结果表明：添加 5610-954010-9()浓度水平的克伦特罗 , 方法回收率在 89.3%107%, 相对标准偏差为 7.3%16.5%, 线性相关系数 r 为 0.998, 克
5、伦特罗的最低检测限为 2.010-9()。Peter Batioens 等3用气相色谱 -质谱联用法测定了牛 、羊 、猪粪便中的盐酸克伦特罗含量，最低检测限为 2ng/g。2.高效液相色谱法（H PLC）高效液相色谱法是检测 CLB 残留常见的分析检测手段之一，适合大批量样品的快速测定 。我国已将 HPLC 法作为检测 CLB 残留的半确证法 。HPLC 法中常用的检测器有电化学检测器 、紫外检测器；其优点是检测精确度高，其最低检测限范围为 115ng/g，而且假阳性率低，与GC-MS 法相比样品不必衍生；缺点是检测过程繁琐 、检测时间长，需贵重仪器 、难于操作 、价格昂贵 。吴庆洁等4用高效
6、液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗和 4 种抗生素 (土霉素 、四环素 、金霉素 、氯霉素 )。用 50%的三氯乙酸沉淀蛋白质，通过固相萃取 (SPE)小柱进行活化，进行高效液相色谱分析 。本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为 1.25ng。盐酸克伦特罗的回收率85.4%93.8%。顾国平等5用 5HClO4超声提取肉样中的盐酸克伦特罗， 80水浴沉淀杂质，然后用固相萃取柱预分离和富集，用高效液相色谱法进行测定，以 SunfireC1846m150mm， 39m 分离柱为固定相，用紫外二极管阵列检测器检测，外标法定量；在该色谱条件下盐酸克伦特罗在 6.3min 左右可达到基线分离 。方法的回
7、收率在 81.6103.7，相对标准偏差在 4.767.94。刘志梅等6选用 7cm 的聚丙烯中空纤维，在样品溶液 pH=11、室温条件下萃取 20min 后，将有机溶剂在氮气流下吹干，用 15L 甲醇溶解，进行液相色谱分析 。结果表明：在优化的试验条件下，克伦特罗的富集倍数为 78 倍，线性范围在 306 000g/kg之间，线性相关系数 0.9995，检出限 2.4g/kg。将该方法用于猪肉组织中克伦特罗的测定，低 、中 、高 3 种浓度的加标回收率分别为 84.9、91.4和 95.0，相对标准偏差 (RSD)分别为 6.3、5.8和 4.6。该方法操作简便 、环境友好，具有较高的灵敏度
8、，适于猪肉中盐酸克伦特罗残留的检测 。高效液相色谱法也经常和质谱联用，实现分析过程的自动化 。毛丽莎等7通过液相色谱 -质谱以 MRM 方式检测，同时测定了猪肉组织中沙丁胺醇 、莱克多巴胺和克伦特罗 。样品用 5%高氯酸溶液振荡提取 , 反相 C18 小柱净化浓缩 ,，以 D3-沙丁胺醇为内标定量 。测定克伦特罗的线性范围均为 0.110.0g/L，线性相关系数 0.9992，定量检出限为0.5g/kg，回收率为 88.4%96.2%。该方法简便，灵敏度好，选择性好 。3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA)ELISA 法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法，测定的基础是免疫学抗原抗体特异性结合
9、反应和高效的酶促反应 。ELISA 法检测限可达 0.05ng/g, 实际应用中常使用 ELISA 试剂盒 。该方法具有样品不需前处理或前处理简单，一次可检测样品数多，操作简便 、快速等特点 。但假阳性率较高 。杨兴武等8应用酶联免疫吸附法检测猪尿液中盐酸克仑特罗残留 。结果表明，盐酸克仑特罗的线性范围为 2002000ng/kg，最小检出限为100ng/L，样品不用前处理可直接检测， 1 个样品的 2 个平行样测定时间为 45min。该方法回收率在 81.9106.8之间，相对标准偏差 (RSD)小于 9。李平等9采用直接竞争酶联免疫吸附试验对动物组织中的盐酸克伦特罗残留量进行了快速检测 。
10、将 CBL 与蛋白质载体偶联制备了CBL-BSA 和 HRP-CBL 结合物 , 以 CBL-BSA 免疫实验兔获得特异性抗体 , 并建立了 CBL 残留直接竞争 ELISA 检测方法及检测试剂盒 。结果表明，检测线性范围 0.162.5ng/mL, 检测低限为 0.10ng/mL，尿 、肝 、肉和饲料的加标回收率为 60.3%115.0%；相对标准偏差 (RSD)为3.4%7.2%。4.毛细管电泳法（C E）毛细管电泳法测定盐酸克伦特罗残留具有重复性好，操作相对简单，所需样品数量少等特点 。高杨菲等10用毛细管电泳法同步分离检测肉制品中 “瘦肉精 ”及其替代物法，整个分离在 12min 内完
11、成 。以 90mmol/L 的柠檬酸三钠（ pH5.6）为电泳缓冲液， 8kV 分离电压， 200nm 检测波长，在 25下可使克伦特罗，沙丁胺醇，特布他林和莱克多巴胺达到分离，分离度分别为1.90， 2.73 和 2.17，回收率为 92.4%102.0%，相对标准偏差 (RSD)小于3.2%，结果令人满意 。王伟宇等11采用小型化毛细管电泳 -电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗及其替代品莱克多巴胺和沙丁胺醇，以直径 300m 的碳圆盘电极为工作电极，检测电极电位为 +0.95V,在 100mmol/L 的硼酸盐运行缓冲液中， 3 种组分在 7min 内实现了分离 。被测物浓度与峰
12、电流在 3 个数量级范围内呈良好的线性关系，检测限为 1.2010-72.0610-7g/ml。该方法简单可靠，已成功应用于猪尿和猪饲料样品中 3 种 -兴奋剂的测定，是一种有效的食品安全分析检测方法 。5.其他方法樊晓博等12采用时间分辨荧光免疫分析建立了简便 、快速 、灵敏的盐酸克伦特罗检测方法 。以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被 96 孔微孔板作为固相抗体， Eu3+标记抗原与样品中的 CBL 竞争结合抗体，建立直接竞争荧光免疫分析体系 。实验表明：方法灵敏度为 0.02g/L，样品回收率为 91%101%，与沙丁胺醇 、莱克多巴胺等结构类似物的交叉反应率均小于 1%。方法灵敏度高 、特
13、异性强，且操作简单，完全可以满足现有实际检测需求 。曾文芳等13建立了用离子色谱 -电化学修饰方法测定盐酸克仑特罗 。采用离子色谱分离 、碳纳米管修饰电极 、直流安培检测， Dionex AG9-HC 保护柱 (2mm50mm)， 8mmol/L 碳酸钠 +10甲醇为淋洗液测定盐酸克仑特罗 。盐酸克仑特罗的检测限是 0.0003mg/L；样品测定的回收率分别为 96103。陈丽莉等14设计了一种快速检测猪肉中盐酸克伦特罗的流动注射 -化学发光免疫分析方法 。采用过氧化脲作为 luminol-CH4N2OH2O2-HRP 化学发光体系氧化剂，联苯硼酸作为盐酸克伦特罗的检测方法河南科技大学林业职业
14、学院 刘荣森摘 要 肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康 。检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱 - 质谱联用法 、高效液相色谱法 、酶标记免疫吸附测定法 、毛细管电泳法（C E）等，本文分析了各方法的优缺点，指出了今后的研究方向 。关键词 盐酸克伦特罗 检测方法 研究进展职教与成教207 科 技 信 息增强剂 , 流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物 。在最优条件下，测定克伦特罗的线性范围 0.059g/L(r=0.9959), 检出限为 0.02g/L。该方法已经成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测 。胡华军15采用巯基丁二酸作为表面修饰剂 , 水相法合成水溶性的 CdT
15、e/ZnSe核壳量子点 , 然后在 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS)的作用下 , 将 CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体 (Anti-CLBpAb)连接 。CdTe/ZnSe-Anti-CLBpAb 偶联物能识别克伦特罗 -BSA 抗原 (CLB-BSA)。光谱分析表明，量子点与抗体连接后荧光增强，荧光峰位从 628nm 红移至 635nm。将合成的 CdTe/ZnSe-Anti-CLBpAb 偶联物作为指示克伦特罗 (CLB)分子的荧光标记物 , 制备出一种用于检测 CLB 的免疫层析试纸条 , 其最低检测量可达 1g/L。现常用的盐酸克伦特罗的检测方法各有优缺点，研究更快速
16、、高效 、检测限更低 、操作简单 、费用低廉的现场检测方法是今后的发展方向 。参考文献1吴银良，李晓薇，刘素英等.气相色谱 - 质谱法测定肝脏组织中盐酸克伦特罗和盐酸菜克多巴胺J.分析化学，2006,34（8）：1083-10862胡明友，邵国建，郭和光.GC-M S 测定肝脏中克伦特罗方法的探讨J.中国卫生检验杂志，2010（8）：1867-18683PeterBatioens ,D irk C ourtheyn,H uber.F,etal.G asC hrom ato-graphic Tandem M assSpectrom etric analysisofclenbuterolresiduesin faecesJ.JournalofC hrom atography A.1996,750(1-2):133-1394
