《正常兔双眼视网膜电图对比及视网膜缺血-再灌注模型的建立》由会员分享，可在线阅读，更多相关《正常兔双眼视网膜电图对比及视网膜缺血-再灌注模型的建立（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1正常兔双眼视网膜电图对比及视网膜缺血-再灌注模型的建立作者：丁建光，姜德咏，吴荣瀚，唐朝珍，李文生【摘要 】 目的 探讨正常兔双眼 ERG 有无差异，建立兔视网膜缺血-再灌注的血管结扎模型。方法 20 只兔，双眼均行 ERG 测定后随机分成 A、B 两组， A 组兔 10 只，均右眼暴露视神经后不结扎。B 组兔 10 只，均左眼视神经结扎 60min。分别测定再灌注0h，3h，24h，48h， 168h ERG a、b 波振幅(aA 、bA)值。结果 (1)正常兔左、右眼 ERG aA、bA 值差异无显著性，但个体之间存在一定差异。(2)未结扎组视网膜缺血-再灌注0h，3h，24h，48h，
2、 168h 的 ERG aA、 bA 值差异无显著性。(3)结扎后兔 ERG aA、bA 值均明显下降，再灌注 24h 最低，后逐渐上升。结论 (1)正常兔双眼 ERG 差异无显著性，但不同个体间有较大差异。(2)成功地建立了兔视网膜缺血-再灌注的血管结扎模型，发现缺血 60min，再灌注 24h 时视网膜功能受到进一步损伤。【关键词】 视网膜 缺血- 再灌注损伤 视网膜电图 兔Comparison of ERG in both normal eyes and establishment of experimental retinal ischemia-reperfusion injury m
3、odel in 2rabbits【Abstract】 Objective To compare electroretinogram(ERG)in both normal eyes and establish a retinal ischemia-reperfusion injury model in rabbits.Methods 20 healthy rabbits were randomly divided into two groups(A，B)after ERG of both eyes.The retinal ischemia in the left eye of 10 rabbit
4、s in group B was induced by temporary ligation of the optic nerve for 60min，and a sham procedure was performed on the right eye of 10 rabbits in group A.The amplitudes of a，b-wave of(aA，bA)ERG were recorded at 0，3，24，48，168h of reperfusion.Results (1)No significant difference was found in aA，bA of E
5、RG between left and right eye in normal rabbits，but difference existed in individuals.(2)No significant difference was found in aA，bA of ERG at 0，3， 24，48，168h of reperfusion in rabbits served as a non-ischemia control.(3)Both aA and bA were significantly decreased after a ligation.The aA，bA of ERG
6、were decreased to the bottom at 24h of reperfusion，then gradually increased in the following time.Conclusion (1)No significant difference is found in ERG between left and right eye in normal rabbits，but difference exists in individuals.(2)A 3retinal is chemia-reperfusion injury model in rabbits is e
7、stablished successfully.The retinal function aggravated is found at 24h of reperfusion after 60min ischemia.【Key words】 retina ischemia-reperfusion injury electroretinogram rabbit视网膜缺血-再灌注损伤是目前研究的一个热点，由于视网膜缺血-再灌注损伤的机制较为复杂，因此，通过建立视网膜缺血-再灌注损伤模型，研究其发生机制以及预防和治疗方法是目前最行之有效的手段。目前，国外常用的视网膜缺血-再灌注损伤模型有血管结扎模型和
8、升高眼内压模型14 ，本研究以视网膜电图 (ERG)为指标，探讨了正常兔眼 ERG 以及结扎兔视神经建立视网膜缺血-再灌注损伤模型的可行性。1 材料与方法1.1 实验动物及分组 中南大学湘雅二医院实验动物中心提供的新西兰大白兔 20 只，体健无眼疾，体重 1.82.5kg，雌雄不限，双眼均行 ERG 测定后随机分成 A、B 两组，A 组兔 10 只，均右眼暴露视神经后不结扎；B 组兔 10 只，均结扎左眼视神经 60min。41.2 正常兔眼视网膜电图的测定 检查前，用脱毛剂脱去兔额正中部体毛，用 1%阿托品和 10%新福林眼药水交替点眼 3 次，使其瞳孔充分放大，暗适应 40min，自兔耳缘
9、静脉注射 3%戊巴妥钠溶液(1ml/kg) 麻醉，实验眼充分开睑，置于全视野刺激球内中央处正前方，小心遮盖对侧眼，避免一切光刺激，兔眼滴 0.5%丁卡因眼药水表麻后，将角膜接触电极放置于角膜表面，参考电极与接地电极分别固定于额正中、耳缘皮肤表面。电生理诊断仪参数：刺激光闪光强度为 13.7cdm-2s，闪光间隔为 2，检测 b 波通频带为0.175Hz，记录波形放大 5 倍，结果由计算机自动处理分析并打印，记录 a、b 波振幅(aA、bA)值，检查结束后结膜囊内滴 0.3%氟哌酸眼药水。1.3 兔视网膜缺血-再灌注损伤模型的制作 麻醉后将兔固定于操作台上，剪除眼睑附近的毛发，结膜囊内滴入 0.
10、5%丁卡因眼药水，0.3%氟哌酸眼药水冲洗结膜囊，用经戊二醛器械消毒液浸泡消毒的眼科剪剪开外眦部皮肤至眶缘软骨，沿角膜缘 360剪开球结膜，钝性分离暴露 4 条直肌，做直肌牵引吊线，自颞上方向眼球后钝性分离，暴露视神经，小心地钝性分离视神经周围的包膜，充分暴露视神经，在眼球后约 1.5mm 处用 0 号黑丝线结扎视神经。用直接检眼镜观察眼底，见后极部视盘周围视网膜变白，动脉变细，静脉扩张，血管搏动消失。60min 后松开结扎线，10min 后用直接检眼镜观察眼底，见后极部视网膜恢复红色，动、静脉管径趋于正常。5ERG 测定结束后，用 5/0 丝线缝合球结膜，用 3/0 丝线缝合外眦部皮肤伤口，
11、结膜囊内滴 0.3%氟哌酸眼药水，涂 0.5%四环素眼膏，送回兔笼饲养。1.4 兔视网膜缺血- 再灌注期间 ERG 的测定 兔眼手术后，立即行暗适应 3040min，1% 阿托品和 10%新福林眼药水交替点眼 3次，测定 ERG(即再灌注 0h)，检查结束结膜囊内滴 0.3%氟哌酸眼药水。再灌注 3h，24h，48h，168h ERG 测定时，麻醉，散瞳，暗适应同前。1.5 统计学方法 所有数据均用均数标准差(xs) 表示，采用SPSS for Windows 10.0 统计软件包处理，P0.05 为差异有显著性。2 结果2.1 正常兔左、右眼 ERG 的比较 正常兔左、右眼 ERG 的aA、
12、bA 值未见统计学差异，但个体间差异较大，可以由 aA、bA值的最大值、最小值和极差反映出来，见表 1。表 1 正常兔左、右眼 ERG 的 aA、bA 值 (V，n=20)6注： aA 左眼 vs 右眼，P0.198；bA 左眼 vs 右眼，P0.0632.2 兔视网膜缺血- 再灌注不同时间 ERG 的恢复情况 未结扎组各时间段 ERG 的 aA、bA 值均无下降，表明手术操作对 ERG 无影响。结扎 60min 组 aA、bA 值在再灌注 0h、3h 时差异无显著性，24h 时 aA、bA 值均下降， 48h 又上升，且高于 3h 水平，168h 高于 48h 水平，见表 2。表 2 兔视网
13、膜缺血- 再灌注 ERG aA、bA 值的恢复情况 (xs，% ，n10)注：与同时间段未结扎组比较，P0.01；与同组前一时间段比较，P0.013 讨论目前，研究视网膜缺血- 再灌注损伤的动物模型主要有血管结扎模型和升高眼内压模型。血管结扎模型是以尼龙线或丝线将视网膜中央动、静脉，连同视神经一起结扎1，2 。也有少数学者在手术显微镜下剪开视神经鞘膜，分离出视网膜中央动脉，单独钳夹视网膜中央动脉，但操作复杂5 。还有少数学者同时结扎双侧颈总动7脉造成视网膜缺血6 。升高眼内压模型是由前房刺入连有灌注瓶的灌注针头，通过升高灌注瓶，使眼内压超过体循环收缩压或达到一定的数值，造成整个视网膜缺血，该模
14、型由于操作简单而被广泛使用3，4 。而这两种模型各有其缺点，血管结扎模型由于不能同时结扎后睫状动脉，因此并不能造成整个视网膜完全缺血，外层视网膜仍有血液供应。升高眼内压模型在造成视网膜完全缺血的同时，升高的眼内压对视网膜也造成了严重的损伤，这必然混淆了缺血引起的视网膜的损伤变化。Gehlbach7等在用这两种模型诱导猫视网膜缺血-再灌注损伤的研究中发现，缺血相同时间，再灌注390min 后，血管结扎模型 ERG b 波的恢复比升高眼内压模型要高20%25%。为排除眼内压升高对视网膜的影响，在本研究中笔者选择了兔血管结扎模型进行视网膜缺血-再灌注损伤的研究。ERG 是客观有效地反映视网膜功能变化
15、的一个敏感的指标，正常的 ERG 反应有赖于视网膜和脉络膜结构的完整性。其中 a 波起源于感光细胞的内节，反映了光感受器的电活动，是光刺激后发生的最初反应；b 波起源于 Muller 胶质细胞，反映了视网膜内核层区域细胞的电活动。目前，国内外均把 ERG 作为反映视网膜功能变化的指标。本研究中，笔者通过对正常兔眼 ERG 的测定发现，正常兔左、右眼的 ERG aA、bA 值差异无显著性，但个体之间差异较大。为避免个体差异对实验结果造成的影响，笔者以每只兔的正常 ERG 为标准，以缺血-再灌注各时间段的 ERG 数值与之相比所得的结果来反8映 ERG 的变化规律，即以自身对照的方法来消除个体差异
16、对实验结果的影响。本研究中发现，手术钝性分离暴露视神经对视网膜 ERG 的aA、bA 值无明显影响，说明手术操作对视网膜功能未产生明显影响。结扎视神经后，ERG aA、bA 值均明显下降，说明视网膜缺血后其功能受到明显影响。在国外以鼠、猫为实验对象的血管结扎模型中，结扎血管后造成 ERG 波形熄灭7 9 。由于鼠、猫的眼底为全血管型，即全部视网膜直接由视网膜中央动脉及睫状动脉血液供给营养，血管位于神经节细胞层，故结扎血管后视网膜缺血较重。兔的眼底为部分血管型，即只有一部分视网膜有血管供养，血管局限于有髓神经纤维分布的区域，且位置浅，限于神经纤维层，故血管结扎后尚有部分视网膜有血液供应，ERG 波形仅表现为下降而并不熄灭10 。本研究中笔者在结扎血管前后以及再灌注后均用直接检眼镜观察眼底，确认视网膜缺血与再灌注。在本研究中，缺血后 ERG aA、bA 值明显下降，再灌注3h，ERG aA、bA 值与再灌注 0h 差异无显著性，再灌注 2
