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1、1微生物的分离与培养 知识小结与专题训练一、 微生物的培养和分离技术1.微生物生长需要的营养物质一般都含有水、碳源、氮源、无机盐牛肉膏又称牛肉浸膏，是采用新 鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。牛肉膏当中含有肌酸、 肌酸酐、多肽类、氨基酸类、核苷酸类、有机酸类、 矿物质类及维生素类的水溶性物质。蛋白胨，是有机化合物。蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外观呈淡黄色的粉剂。蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白 胨。在胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨富含有机氮化合物，也含有一些 维 生素
2、和 糖类。能为微生物提供 C 源、N源、生长因子等营养物质。对异养微生物来说，含 C、H、O、N 的有机化合物既是碳源，又是氮源、能源。2.培养基的制作合格与否通过未接种的培养基表面是否有菌落生长来验证3.常用的无菌技术有对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。考点细化：灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。消毒是指用较为温和的理化方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物，不包
3、括芽孢、孢子。灭菌的方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，灼烧灭菌用于接种用的金属工具；干热灭菌用于能耐高温的，需要保持干燥的玻璃器皿等；高压蒸汽灭菌用于培养基等消毒的方法有煮沸消毒法，用于液体消毒；巴氏消毒法，用于不耐高温的液体；化学药剂（如用体积分数70%-75%的酒精）或紫外线消毒，用于物体表面的消毒。4.微生物的纯培养指的是防止外来杂菌入侵。5.配制固体培养基的步骤：计算、称量、溶化、 （调节pH、分装、包扎）灭菌、倒平板6.微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划
4、线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是纯化的菌落。平板划线法中的注意事项操作第一步即取菌种之前及每次划线之前都需要进行火焰灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：第一次操作 每次划线之前 划线结束目的 杀死接种环上原有的微生物杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划 线后菌种数目减少杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单 个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释
5、，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。2考点细化：平板冷凝后，要是有水滴滴到培养基上，会导致菌蔓延，这样就不能计数，分离了。为防止冷凝水滴到培养基上，所以培养时平板一定要倒置。接种操作每次划线之前都要灼烧接种环，是因为每次操作都要及时灭菌，以防污染杂菌。操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因是防止杂菌污染环境。二、特定微生物的数量的测定1.测定微生物数量的方法有显微镜直接计数、统计菌落数目。三、培养基对微生物的选择作用1.在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。例如：在选择
6、培养基的配方中，将尿素作为培养基中唯一的氮源，原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。考点细化：选择培养基配置的原理是增加或减去某种成分，使要选择的微生物能生长，其它微生物不能生长。培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌培养基中不加氮源可以分离出固氮微生物练习巩固一、单项选择题1. 下列说法正确的是A培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质B培养基只有两类：液体培养基和固体培养基C除水以外的无机物只能提供无机盐D无机氮源不可能提供能量2.要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用A固体培养基B液体培养基C加青霉素的培养基D加入高浓度食盐的培养基3.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气
7、、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线消毒高压蒸汽灭菌巴氏消毒法A B C D4.下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是A防止杂菌污染B消灭杂菌C培养基和发酵设备都必须灭菌D灭菌必须在接种前5.下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C待培养基冷却至 50 左右时进行倒平板D待平板冷却凝固约 510 min 后将平板倒过来放置6不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以 CO2为唯一碳源的自养微生物的营养的描述中，不正确的是A氮源物质为该微生物提供必要的氮素B碳源物质也是
8、该微生物的能源物质3C无机盐是该微生物不可缺少的营养物质D水是该微生物的营养要素之一7若大肠杆菌和圆褐固氮菌混合在一起采用下列哪组培养基可将它们分离A加食盐的培养基和蛋白胨培养基B伊红美蓝培养基和无氮培养基C斜面培养基和液体培养基D加青霉素的培养基和液体培养基8下表为牛肉膏蛋白胨培养基的成分列表，据此回答：成分 牛肉膏 蛋白胨 NaCl H2O含量 0.5 g 1 g 0.5 g 100 mL其中的牛肉膏和蛋白胨能够提供A碳源 B氮源 C能源 D包括 A、B、C 三项9.给无氮培养基接种土壤稀泥浆的方法是A打开培养皿盖，取一根接种环沾取少许稀泥浆，轻轻地点接在培养基的表面上B取一根接种环在酒精
9、灯的火焰上灭菌后蘸取少许稀泥浆，略微打开培养皿盖，在培养基的表面轻点C打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌后蘸取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点D略微打开培养皿盖，取一根接种环在酒精灯的火焰上灭菌，冷却后沾取少许稀泥浆，在培养基的表面轻点10.有关平板划线操作正确的是A使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后需马上塞上棉塞C把皿盖打开，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可D最后将平板倒置，放入培养箱中培养11.在涂抹平板操作时错误的是A将刮铲在酒精灯火焰上灼烧，直至烧红 B取少量菌液滴加在培养基表面C用体积分数为 70
10、%的酒精消毒 D涂抹时可转动培养皿，使涂布均匀12.产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是A一个细菌，液体培养基 B许多细菌，液体培养基C一个细菌，固体培养基 D许多细菌，固体培养基13下面对菌落的表述不正确的是A肉眼可见的菌落一般均是由许多细菌大量繁殖形成的B霉菌等在面包上生长形成的不同颜色的斑块即为菌落C噬菌体能使固体培养基上的细菌裂解，从而使菌落变得透明D细菌、放线菌和真菌在培养基上形成的菌落形态不同14菌种鉴定的重要依据是A细菌的大小、形状和颜色 B菌落的大小、形状和颜色C有无鞭毛 D培养基的不同15菌落的特征包括菌落的形态菌落的结构菌落的大小菌落的颜色菌落的隆起程度菌落的数量A
11、B C D16细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可依次用于杀死哪些部位的杂菌A接种环、手、培养基 B高压锅、手、接种环C培养基、手、接种环 D接种环、手、培养基4二、多选择题17在接种操作过程中，正确的是A要将接种环灼烧灭菌B取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位D接种后还要将管口灭菌加塞18实验室用于分离出与大肠杆菌混杂的酵母菌，培养基的要求是A添加琼脂 B不加氮源C添加青霉素 DpH 调节到 7.08.019下列关于无菌操作的叙述，正确的是A对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B将用于微生物培养的培养器皿、接种
12、用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触20有关涂抹平板法，叙述正确的是A首先将菌液进行一系列的梯度稀释B然后将不同稀释度的菌液分别涂抹到琼脂固体培养基的表面C适宜条件下培养D结果都可在培养基表面形成单个的菌落三、简答题21某学校打算开辟一块食用菌栽培基地，以丰富学生的劳动技术课内容。首先对食用菌实验室进行清扫和消毒处理，准备食用菌栽培所需的各种原料和用具，然后从菌种站购来各种食用菌菌种。请回答下列问题：(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原
13、料：_、_、_、_、_。其中提供氮源的是_；提供能源的主要物质是_。(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同，配制培养基时各成分要有合适的_。在烧杯中加入琼脂后要不停地_，防止_ _。(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干个试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力_kPa，温度_，时间_。灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力自然降到 0 时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管应_。(4)使用高压蒸汽灭菌锅时应注意，先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并将其中原有冷空气彻底排出后再将锅密闭。22某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及
14、培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题：(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了_和_。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是_和_。(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是_ _。(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于_中培养，培养的温度设定在 37。要使该实验所得的结果可靠，还应该同时在另一平板上接种_作为对照进行实验。(4)培养了 20 小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有_种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越_。(5)如果提高培养基中 NaCl 的浓度，可以用于筛选耐_细菌，这种培养基被称为5_。21(1)牛肉膏蛋白胨水无机盐琼脂蛋白胨、牛肉膏牛肉膏(2)比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂(3)高压蒸汽灭菌锅100 1211530 min废弃(4)适量水22(1)氮源(碳源不作要求)碳源无机盐水(2)高压蒸汽灭菌(3)恒温培养箱无菌水(4)多深(5)盐(或 NaCl)选择培养基解析用于培养微生物的培养基中，一般要含有微生物所需要的碳源、氮源、水和无机盐等成分，碳源、氮源一般分别由糖类和蛋白质所提供。对培养基常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。在检测湖水中细菌的污染情况时，应设置对照，才能得出
