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1、1TPH 基因多态性与重性抑郁症及症状表型的相关性【摘要】 目的 探讨中国汉族 TPH A218C 多态性与抑郁症及症状表型的相关性。方法 采用 PCRRFLP 方法研究 70 例抑郁症(重性抑郁症) 患者的 TPH 基因的多态性分布；采用汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评定症状表型。结果 抑郁症组 TPH A218C 多态性的等位基因 C 的频率 (44.3%)明显高于对照组(24.3%)，而 A 等位基因的频率(55.7%)和 A/A 基因型的频率 (31.4%)显著低于对照组(75.7%和 62.9%)(2=6.214 ，P=0.013) ；(2=6.946, P=0.031)。按性别分层后
2、，男性抑郁症组 C/C 基因型的频率(12.5%)明显高于对照组(6.3%)，而 A/A 基因型的频率(25.0%)显著低于对照组(75.0%)(2=8.103, P=0.017)；病例组中症状表型在三种基因型间分布无显著性差异。结论 TPH A218C 基因的多态性与抑郁症发病相关，其相关性受性别影响，而与症状表型间无明显的关联。 【关键词】 抑郁症；色氨酸羟化酶基因；多态性Association of TPH gene polymorphism with majordepression and symptom phenotypesABSTRACT: Objective To explore
3、 the association among the depression, symptom phnotypes and 2polymorphism TPH A218C in the Han Chinese. Methods TPH A218C was determined using a PCRbased technique. TPH was genotyped using restriction fragment length polymorphism in 70 patients affected by depression and 70 unrelated controls.We ev
4、aluated the symptom phenotypes of cases applying the Hamilton Rating Scale for depression(HAMD). Results The TPH A218C genotype distribution in 70 patients with major depression was significantly different from that in controls (2=6.946, P=0.031). The C allele in patients (44.3%) was significantly m
5、ore frequent than in controls (24.3%) but the A allele (55.7%) and A/A genotype (31.4%) were significantly less frequent than in controls (75.7% and 62.9%) (2=6.946, P=0.031). Meanwhile, among the males, a trend was observed toward an excess of TPH C/C (12.5% vs. 6.3%) in patients and excess of TPH
6、A/A in controls (75.0% vs. 25.0%) (2=8.103, P=0.017). There were no significant differences in three genotypes distribution among symptom phenotypes of cases. Conclusion There was an association between TPH A218C polymorphism and depression. The findings raise the possibility that TPH A218C polymorp
7、hism may exert differential effects based on gender. There is no association 3among TPH A218C polymorphism and symptom phenotypes of depression.KEY WORDS: depression; tryptophan hydroxylase gene; polymorphism色胺酸羟化酶(tryptophan hydroxylase, TPH)是 5羟色胺(5hydroxytryptamine, 5HT)合成的限速酶，它将色氨酸羟化为5羟色酚后经脱羧作用转
8、化成 5HT，决定活体 5HT 的水平。TPH 的改变是 5HT 水平改变的可能原因之一，而 5HT 神经递质的改变与一些精神障碍和行为异常(包括抑郁、自杀)有关16 。TPH 基因定位于 11 号染色体短臂 14-15.3 区(11p14-p15.3) ，约长 29kb，至少包括 11 个外显子，一个 5端非转录区。在内含子7 中存在两种多态性，即在 779 和 218 位核苷酸处出现 A/C 置换，而且这两种多态性呈不平衡紧密连锁。TPH A218C 多态性与抑郁症的关系在国外虽然有了一些研究，但结论尚不一致。国内仅有一篇此方面的报道。1 对象与方法1.1 研究对象 病例组：选自 2005
9、 年 1 月-2005 年 12 月西安交通大学医学院第一附属医院精神卫生中心的门诊及住院患者。4纳入和排除标准：年龄16 岁；中国汉族； 汉密尔顿抑郁量表(Hamiltons Depression Scale, HAMD)17 项评分测评总分18；符合美国精神障碍诊断与统计手册第 4 版(Diagnostic and Statistical Manual of Mental DisordersFour, DSMIV)7重性抑郁障碍(单次发作或反复发作) 的诊断标准；病程3 年；入组前两周未用任何抗抑郁及抗精神病药物治疗；无严重躯体疾病或脑器质性疾病；排除伴发于其他精神障碍的抑郁状态；排除物质
10、滥用或依赖者,排除有双相情感障碍家族史者；本人知情同意。对照组：纳入和排除标准：年龄16 岁；中国汉族；汉密尔顿抑郁量表(HAMD)17 项评分测评总分5 分；无严重躯体疾病或脑器质性疾病；无精神疾病及病史；无物质滥用或依赖者；家族中无精神疾病患者；与患者无血缘关系；本人知情同意。本研究病例组抑郁症患者 70 例，其中男性 32 例，女性 38例，平均年龄(34.9113.1)岁。正常对照组 70 例，其中男性 30 例，女性 38 例，平均年龄(33.1411.3) 岁。两组年龄性别的比较无显著性差异(P0.05)。1.2 引物的设计 国外 TPHA218C 基因多态性曾进行较多的研究。本试
11、验选用国外文献报道的引物进行扩增8，上游：55TTCAGATCCCTTCTATACCCCAGAG3，下游：5GGACATGACCTAAGAGTTCATGGCA3。1.3 TPH 基因内含子 7 A218 C 多态性的检测 PCR 反应液共25L，10PCR 反应缓冲液 含(NH4)2SO4，MgCl22.0mmol/L ；0.2mol/L 引物，1.5u Taq 酶，200mol/L dNTPs。PCR 条件：94 4min 预变性，继以 94变性 60s，55退火 60s，72 延伸 60s，共 35 个循环，72延伸 6min。将 PCR 产物中加入 1u 限制性内切酶 Bfa于 37水浴
12、消化 8h，20g/L 琼脂糖凝胶电泳分离。1.4 统计学处理 各基因型、等位基因频率比较用 2 检验，各种检验均以 P0.05 为差异显著性阈值。2 结果2.1 酶切的结果 TPH 基因 218 位核苷酸发生 AC 转换突变，可在该位置产生一个 Bfa限制性内切酶的酶切位点，用该酶对可能存在突变的 PCR 扩增产物进行消化，纯合突变型个体可产生645bp 和 215bp 两个片断，在杂合子基因型个体产生860bp、645bp 和 215bp 三个片断，而在野生基因型个体仅有860bp 的片断。在结果判断时，纯合子突变记作 C/C，杂合子突变6记作 A/C，野生型纯合子记作 A/A(图 1、2
13、)。图 1 Bfa酶切 TPH A218C PCR 扩增的产物（略）Fig.1 Identification of TPH A218C PCR products by Bfa I restriction1, 3, 5 sample: homozygote genotype C/C; 2, 4, 6, 7 sample: wild homozygote genotype A/A; M: 100bp DNA ladder marker图 2 Bfa I 酶切 TPH A218C PCR 扩增的产物（略）Fig.2 Identification of TPH A218C PCR products b
14、y Bfa I restriction1, 2 sample: heterozygote genotype A/C; 3, 4 sample: homozygote genotype C/C; M: 100bp DNA ladder marker2.2 TPH A218C 的多态性分析 抑郁症组 TPH A218C 多态性的 A/A 基因型的频率(31.4%) 显著低于抑郁症组(62.9%) (2=6.946, P=0.031)。抑郁症组 TPH A218C 多态性的等位基因7C 的频率 (44.3%)明显高于对照组(24.3%)，而对照组 A 等位基因的频率(75.7%)显著高于抑郁症组(5
15、5.7%，2=6.214，P=0.013，表1)。2.3 TPH A218C 基因型分布按性别分层后的比较 在男性，抑郁症组与对照组 TPH A218C 多态性基因型总体分布存在显著性差异，抑郁症组 C/C 基因型的频率(12.5%)明显高于对照组(6.3%) ，而对照组 A/A 基因型的频率(75.0%) 显著高于抑郁症组(25.0%)(2=8.103, P=0.017)。女性中，这种差异并不显著(2=1.106, P=0.575，表 2)。表 1 患者组与正常对照组 TPH 基因型和等位基因频率的比较（略）Table 1 Genotype distribution and allele f
16、requency of the TPH polymorphism in patients and controls*P0.05 vs. control group2.4 抑郁症患者组 TPH A218C 多态性与 HAMD 总分及各子项目得分间的相关性 抑郁症患者组 TPH A218C 的各基因型C/C、 A/C、A/A 及各等位基因 C、A 与 HAMD 总分及各子项目得分之间都不存在显著性差异(表 3)。8表 2 TPH 基因型分布按性别分层后的比较（略）Table 2 Genotype distribution and allele frequency of the TPH polymorphism in patients and controls stratified by gender*P0.05 vs. control
