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1、1胃黏膜肠化生中 H.pylori 感染与 类谷胱甘肽转移酶表达的相关性【摘要 】 探讨胃黏膜肠化生中幽门螺杆菌（H.pylori ）致毒作用与以 GST 为代表的人体对致癌物解毒系统间的相互作用。方法：利用 SP 法对 219 例胃黏膜活检组织进行 GST 单克隆抗体的检测；利用 HIDABpH2.5PAS 粘蛋白组织化学技术对 171 例肠化生黏膜进行分型；利用 HE 及 H.pyloriDNA PCR 及 ELISA 方法对正常胃黏膜和肠化生黏膜进行 H.pylori 的检测。对 80 例 H.pylori阳性患者进行 H.pylori 根除治疗。结果：正常胃黏膜未见 GST的表达，胃癌
2、 GST 阳性率为 44.4%。H.pylori 阴性组 GST阳性率高于 H.pylori 阳性组（P0.05） 。H.pylori 根除治疗后，根除组 GST 表达高于未根除组（P0.05） 。肠化生黏膜中GST 弱阳性或阴性表达如合并 H.pylori 感染者，胃癌发生的危险性增加。结论：在胃黏膜上皮肠化生阶段 H.pylori 的致毒作用与GST- 解毒作用彼此相互拮抗。 【关键词】 肠上皮化生；胃癌；幽门螺杆菌Objective：To study the relationship between the virulence of H.pylori and human carcinog
3、en 2detoxification system in the stage of intestinal metaplasia (IM).Methods：About 219 cases were examined in the study, including 30 cases with normal gastric mucosa, 171 cases with IM and 18 cases with gastric cancer. The expression of GST were detected by SP method. The types of IM were classifie
4、d into , by highiron diamine /alcian blue pH2.5/periodic acid Schiff (HIDABpH 2.5PAS)method：H.pylori infection was confirmed or excluded by hematoxylineosin (HE) staining, H.pyloriDNA PCR and enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). Eighty cases with H.pylori infection were received the treatment o
5、f H.pylori eradication.Results：The GSTexpression was not found in normal mucosa, the positive rate of GST in gastric cancer was 44.4%. The positive rate of GSTexpression in IM without H.pyloriinfection was higher than that of IM with H.pyloriinfection (P0.05). The positive rate of GSTexpression in H
6、.pylori eradicated group was significantly higher after H.pylori：eradication than before (P0.01). The risk of gastric cancer is increased if there was low or no expression of GSTin H.pyloriinfected cases.Conclusion：The carcinogen detoxification role of GST and the virulence of H.pylori might interac
7、t each other 3in the stage of IM, which is the precancerous condition of gastric cancer.Key wordsGST；intestinal metaplasia;gastric cancer;helicobacter pylori谷胱甘肽S 转移酶（glutathioneStransferase, GST）是由两个同源二聚体亚基组成的一个多功能超基因家族，依 GST 同工酶等电点的不同分为碱性 类、中性 类和酸性 类。近年来，将 及微粒体 GST 同工酶与 , 并列为五大类。研究证实，GST 是人体重要的相解毒
8、酶1，是人体内一种重要的保护性物质，具有解毒和抗癌的作用，其中 类谷胱甘肽S 转移酶（GST ）的作用大于其它同工酶，与人类肿瘤关系更密切2。胃黏膜肠上皮化生（简称肠化生）是正常胃黏膜受到损伤后转变为肠上皮和腺体的一种病理学改变。许多研究认为，在这一过程中幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)起着重要作用3,4。H.pylori 对人体是一种损害因素， GST 是人体内的一种重要的保护性物质，那么 H.pylori 感染能否造成 GST 表达的改变？本研究就 H.pylori 感染及根除治疗后对肠化生胃黏膜中 GST 表达的影响进行了观察。4 材料与方法1.1
9、材料219 例胃黏膜活检组织取自辽宁省庄河市胃癌高发区，每例取新鲜胃黏膜 5 块，95% 乙醇固定，石蜡包埋，制成 3 张 5m 切片，进行 HE、HIDABpH2.5PAS 粘蛋白组织化学染色及GST 免疫组织化学染色。经 HE 染色正常胃黏膜 30 例，具有肠化生改变者 171 例，胃癌 18 例。1.2 方法 HIDABpH2.5PAS 粘蛋白组织化学染色：依肠化生组织形态及粘液染色的不同将肠化生分为型(完全性)、型（不完全性） 、型（不完全性） 5 。本实验 171 例肠化生中型 54 例，型 76 例，型 41 例。H.pylori 的检测：利用 HE、H.pylori-DNA PC
10、R 及 ELISA 检测 H.pylori IgG 抗体 3 种方法，确定有无H.pylori 感染。上述 2 种或 3 种方法检测为阳性者，判断为H.pylori 阳性，否则为阴性。 171 例肠化生中，109 例 H.pylori 阳性，62 例 H.pylori 阴性。 链霉菌抗生物素蛋白 过氧化酶法（SP）免疫组织化学检查：GST 单克隆抗体购自北京基因公司，即用型 SP 试剂盒购于福州迈新公司。严格按说明书操作。按文献6的5方法，依着色强度及范围进行综合评分。着色强度：不着色 0 分，浅黄色 1 分，棕黄色 2 分，棕褐色 3 分。着色范围：无着色为 0 分，着色小于 1/3 为 1
11、 分，着色大于 1/3 为 2 分，弥漫着色为 3 分。将以上两项相加为最后结果，0 分为阴性（- ） ，2 分为（+） ，3 4 分为（+ ） ， 56 分为（+） 。除菌疗法：80 例 H.pylori 阳性患者按三联疗法常规治疗（铋制剂+阿莫西林+甲硝唑） ，停药后 3个月在原部位取材复查。采用治疗前同样方法进行 H.pylori 检测，其中 H.pylori 根除 38 例，H.pylori 未根除 42 例。对以上标本同样进行 HIDABpH2.5PAS 粘蛋白组织化学染色及 GST 单抗的免疫组化染色。1.3 统计学方法组间差异用 2 检验确定。2 结果2.1 H.pylori 感
12、染对肠化生黏膜 GST 表达的影响正常胃黏膜未见 GST 的表达。肠化生黏膜 GST 着色部位主要分布在细胞浆内，少数分布在刷状缘和细胞核。粘蛋白染色为蓝色（含有唾液酸粘液）的部位 GST 着色清晰，而红色部位6（含有中性粘液）没有 GST 着色。胃癌组织的 GST 表达阳性率为 44.4%(8/18)。H.pylori 阴性组 GST 表达阳性率高于 H.pylori 阳性组(P0.05） 。H.pylori 阴性组 GST 表达阳性率高于胃癌组（P0.05，表 1） 。表 1H.pylori 感染对肠化生黏膜 GST 表达的影响（略）注：H.pylori 阴性组与 H.pylori 阳性组
13、相比）P0.052.2 根除 H.pylori 后肠化生黏膜 GST 的表达对 80 例 H.pylori 阳性患者进行根除治疗，38 例转阴，有42 例仍为阳性。H.pylori 根除组 GST 表达高于治疗前 H.pylori阳性组，阳性率分别为 81.9%和 63.8%,两者差异有显著意义（P0.05） 。H.pylori 根除组 GST 阳性率高于 H.pylori 未根除组，两者差异无显著意义。H.pylori 根除组 GST 表达阳性率高于胃癌组（P0.01 ）,H.pylori 未根除组 GST 表达阳性率与胃癌组差异无显著意义。73 讨论GST 是一类具有解毒功能的酶类，主要催
14、化外源性致癌物和体内正常代谢产生的亲核性物质与 GSH 结合，增强这些物质的极性进而转变为无毒或毒性较低的物质，有利于被灭活或清除，对机体有重要的保护作用。有关资料显示7,8，各型 GST 同工酶在组织器官中的分布不同，其中 GST 在哺乳动物中含量最丰富且分布最广泛，普遍存在于胎盘、肾脏、胆管、胆囊上皮、睾丸间质、附睾等器官；在食道癌、胰腺癌、大肠癌、乳癌、卵巢癌、胃癌等恶性肿瘤中 GST 表达显著高于正常组织9-11。在研究 H.pylori 致癌机制的过程中，人们发现 H.pylori 本身的菌体蛋白可激发单核细胞和巨噬细胞释放自由基。这些自由基有强大的破坏作用，可使核酸主链断裂，碱基降
15、解和氢键破坏，在体内有直接致癌或促癌作用12,13。有报道指出，GST 含量降低13及GST 的缺失14如同时合并 H.pylori 的持续感染，可导致胃癌发生的危险性增加。我们研究结果显示，H.pylori 阴性组 GST 阳性率显著高于 H.pylori 阳性组（P0.05） 。在 H.pylori 阴性组、型肠化生黏膜中 GST 表达高于对应的 H.pylori 阳性组、肠化生，并且 H.pylori 阴性组和阳性组中由肠化生黏膜 GST 阳性率均呈逐渐下降的趋势；H.pylori 阴性组与胃癌组相比两者差异有非常显著意义(P0.01)，8H.pylori 阳性组与胃癌组相比两者差异无显著意义。H.pylori 的感染可使 GST 表达降低，机体的解毒能力降低，发生胃癌的危险可相对增加。特别是在和型肠化生中所分泌的酸性粘液易于H.pylori 粘着15,16，尤其是型肠化生所分泌的硫酸粘液更易于H.pylori 粘着，H.pylori 粘着越多、时间越长，对黏膜
