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1、 二十三、重组 基因工程的相关技术 基因工程主要的工具酶 基因克隆的质粒载体 重组 基因工程的应用及其成果简介 遗传工程的风险和伦理学问题 （一）基因工程的相关技术 1. 核酸的分子杂交 （ 1） 变性（熔解）：破坏 复性： 杂交：不同来源的互补核酸序列的 缔合过程 （ 2）分子探针寻找特定基因 探针 ： 纯一、单链 标记方法 ： 放射性同位素标记 地高辛标记 （ 3） 检测特定的 （ 4） 检测细胞中活性基因转录的 （ 5）原位杂交 检测完整细胞中的核酸系列，确定具有不同类型细胞的组织中特定 原位杂交法筛选解 复印至硝酸纤维素膜上 用 杂交 放射自显影 32放射性 细菌菌落 单链 原位杂交
2、2. 聚合酶链式反应 （ 特点： 活体外进行 只需很少量 简便 、 快速取得大量的 （ 1） 高温变性 低温退火 适温延伸 靶序列 变性和引物复 性 循环 1 循环 2 循环 3 变性和引物复 性 链延伸 链延伸 （ 2） 耐高温（最适温度为 72 0C） （ 3）寡核苷酸引物 与待扩增的靶 人工合成的寡核苷酸短片段（ 15 30 （ 4） 可保存几千 几万年 ） 生物进化 古生物学 古人类学 法医学 （ 亲子 、 嫌疑犯鉴定 ） 制备分子探针 （二）基因工程主要的工具酶 1. 限制性内切核酸酶 是一类在特定的 称限制酶或 限制性内切酶 现已发现和鉴定出 200多种 可分 型、 型和 型，用途
3、最广的是 型酶。 两种切割方式： 粘性末端 平齐末端 2. （ 1）大肠杆菌 能连接粘性末端。较少用。 （ 2）噬菌体 连接粘性末端和平齐末端。 3. 反转录酶 能以 （三）基因克隆的质粒载体 克隆载体： 质粒 噬菌体 病毒 1. 质粒（ 作为高质量克隆载体的质粒必须具有如下特性： （ 1）具有复制起点 （ 2）携带易于筛选的选择标记 （ 3）具有多种限制酶的单一识别位点 （ 4）具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数 （ 5）有安全性 2. 质粒载体 粒载体 p B 究者）； R 研究者）； 322 实验编号 ） 的优点： （ 1）相对分子质量较小 （ 4361 （ 2）带有一个复制起始位点（
4、 （ 3）具有两种抗生素抗性基因 （ （ 2）带有一个复制起始位点 （ （ 3）具有两种抗生素抗性基因 （ （ 4）具有较高的拷贝数（经氯霉素扩增后每个细胞中可累积 1000 3000份拷贝） （ 四 ） 重组 （ 1） 限制性内切酶酶切产生待克隆的 基因文库： 当制备的 这一组克隆就是该生物的基因文库 。 （ 2）人工合成 优点：不含内含子 分子量小 易于与载体结合： 人工化学合成 （ 3） 逆转录酶酶促合成法 反转录 单链 （ 双链 c （ 4）粘性末端连接法 5 35p p + 齐连接法 2. 基因克隆 分离转化子 胰岛素原的人工合成 胰脏 (A)n 胰岛素原 组质粒 转化细菌 转录酶 胰岛素原基因 与质粒连接 岛素原 （五）基因工程的应用及其成果简介 1. 生产新型疫苗 如乙肝疫苗 2. 生产人工胰岛素 5. 动物基因工程与畜禽品种改良 6. 在遗传病的基因诊断和基因 治疗中的作用 （六）遗传工程的风险和伦理学问题 安全措施 转基因动、植物的安全性如何？ 克隆人的问题 基因隐私问题 谁有权利来掌握别人的基因图谱？ 限制性内切酶 识别特定的 碱基序列 粘性末端 平齐末端 如果外源 卞青霉素抗性基因失活 如果外源 环素抗性基因失活 （ 4）具有较高的拷贝数（经氯霉素扩增后每个细胞中可累积 1000 3000份拷贝）
