西安交大医学院附属二院 - 二 OO 七年一月

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1、 消毒灭菌效果与环境卫生学 监测手册 西安交大医学院附属二院 二 OO 七年一月 合 格 标 准 一、 环境卫生学 包括各类环境空气、物体表面、医护人员手 1、 细菌菌落总数卫生标准 标 准 环境 类别 范 围 物体 医 护 空气 表面 人员手 cfu/m3 cfu/ cm2 cfu/ cm2类 类 类 类 层流洁净手术室、层流洁净病房 普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房、输血科、血透室、介入中心 儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间 传染病科及病房 10 5 5 200 5 5

2、 500 10 10 15 15 2、致病性微生物及结果判定： （ 一）空气： 类区域：细菌总数10cfu/m3(或 0.2 cfu /平板) ，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格； 类区域：细菌总数200cfu/ m3(或 4cfu/平板) ，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格； 类区域：细菌总数500cfu/ m3(或 10 cfu/平板) ，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。 （二）物体表面： 、类区域：细菌总数5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格； 类区域细菌：细菌总数 10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格； 类区域细菌：细菌总数 15cf

3、u/cm2，并未检出致病菌为消毒合格； 母婴同室、早产几室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门菌。 （三）手： 、类区域工作人员：细菌总数5cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌为消毒合格； 类区域工作人员：细菌总数10cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格； 类区域工作人员：细菌总数15cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格； 母婴同室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的工作人员手上，不得检出沙门菌、大肠杆菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌为消毒合格。 二、医疗用品 1、进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、黏膜的医疗用品

4、：必须无菌。灭菌物品不得检出任何微生物。 2、接触皮肤、黏膜的医疗用品：必须消毒。细菌菌落总数应20cfu/g或 100cm2 ，消毒物品不得检出致病性微生物。 三、使用中消毒剂和无菌器械保存液 1、使用中消毒剂：细菌菌落数应100cfu/ml ；致病性微生物不得检出。 2、无菌器械保存液：必须无菌。 四、紫外线灯管辐照强度 1、普通 30W直管型紫外线灯：新灯辐照强度应90 W/cm2；使用中的紫外线辐照强度应70W/cm2； 2、30W 高强度紫外线：新灯的辐照强度180 W/cm2为合格。 3、生物监测标准：经消毒后的物品或空气中的自然菌应减少90.00%以上，人工染菌杀灭率应达到 99

5、.90%。 五、内镜 1、灭菌后的内镜（如腹腔镜、关节镜、胆道镜、脑室镜、膀胱镜、胸腔镜）：不得检出任何微生物。 2、消毒后的内镜（如喉镜、气管镜、支气管镜、胃镜、肠镜、乙状结肠镜、直肠镜）：细菌总数20cfu/ 件，不得检出致病菌。 六、血液净化系统 1、透析器入口液：细菌菌落总数必须200cfu/ml ； 2、透析器出口液：细菌菌落总数必须2000 cfu/ml，并不得检出致病微生物。 七、医院感染病例 1、 医院感染发病率30 m2，设 4 角及中央 5 点， 4 角的布点部位距墙 1m。 4、采样方法：平板暴露法 将 9cm 直径普通营养琼脂平板放在室内各采样点，高度距地面1.5m，采

6、样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露 5min 后盖好立即送检。将送检的平板置 37温箱培养 48h，计算菌落数，并分离致病菌。 5、结果计算： 50000平均菌落数 空气细菌菌落总数（cfu/m3）= 平板面积（cm2）5min 三、物体表面采样及检查方法 1、采样时间：消毒处理后 4h 内进行采样。 2、采样面积：被采表面 100cm2，取全部表面；被采表面100cm2，取 100cm2。 3、采样方法： 用 5cm5cm 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂抹各 5 次，并随之转动棉拭子，连续采样 14 个规格板面积，剪去

7、手接触部分，将棉拭子投入 10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管中立即送检。 门把手等小型不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。 4、结果计算： 平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数 物体表面细菌菌落总数= （cfu/ cm2） 采样面积（cm2） 小型物体表面的结果计算，用 cfu/ 件表示。 四、医护人员手采样及检查方法 1、采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。 2、采样面积及方法： 被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积 30cm2），并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有 10ml采样液的试管内送检

8、。 3、结果计算： 平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数 手细菌菌落总数= （cfu/ cm2） 30 2 五、医疗用品采样及检查方法 1、采样时间：在灭菌处理后，存放有效期内采样。 2、无菌检验： 是指检查经灭菌的敷料、缝线、一次性使用的医疗用品、无菌器械以及适合于无菌间的其它物品。 注意： 无菌检验应在洁净度为 100 级单向流空气区域内进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染；对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。 3、采样量及采样方法： 可用破坏性方法取样的医疗用品，如输液（血）器、注射器、注射针等可直接送细菌室采样。 （ 1）即用无菌方法将拟检缝合针、针头、手术刀片等小件医疗器

9、械各 5 件直接浸入 6 管需- 厌氧培养管（其中一管作阳性对照）与4 管霉菌培养管。培养管用量为 15ml/管。 （2）对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用 品，可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样。 手术钳、镊子等大件医疗器械取 2 件用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂擦采样，将棉拭子投入 5ml 无菌洗脱液中，将采样液混均，接种于需- 厌氧培养管（ 共 6 管，其中一管作阳性对照）与霉菌培养管（ 共 4 管） 。接种量为 1ml/管，培养管用量为 15ml/管。 4、培养： 在待检样品的需- 厌氧培养管中，接种预先准 备的金黄色葡萄球菌阳性对照管液 1：1000 稀释 1m

10、l，将需- 厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均于 3035 培养 5 天，霉菌培养管与阴性对照管于 2025培养 7 天，培养期间逐日检查是否有菌生长，如加入供试品后培养基出现混浊或沉淀，经培养后不能从外观上判断时，可取培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养 48h 72h 后，观察是否再现混浊或在斜面上有无菌落生长，并在转种的同时，取培养液少量，涂片染色，用显微镜观察是否有菌生长。 5、结果判定： 阳性对照在 24h 内应有菌生长，阴性对照在培养期间应无菌生长，如需- 厌氧菌及霉菌培养管内均为澄清或虽混浊但经证明并非有菌生长，判为灭菌合格； 如需- 厌氧菌及霉菌培养管中任何 1

11、管显混浊并证实有菌生长，应重新取样，分别同法复试 2 次，除阳性对照外，其他各管均不得有菌生长，否则判为灭菌不合格。 6、注意事项： 送检时间不得超过 6h，若样品保存于 04，则不得超过 24h。 被采表面100cm2， 取全部表面； 被采表面100cm2，取 100cm2。 若消毒因子为化学消毒剂时，采样液中应加入相应中和剂。 六、使用中消毒剂与无菌器械保存液 1、采样时间：更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。 2、采样量及方法： 在无菌条件下，用无菌吸管吸取 1ml 被检样液，加入 9ml 稀释液中混均。稀释液中需根据不同种类消毒剂加入相应中和剂，以中和被检样液的残效作用。 null

12、醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可； null 含氯、含碘、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入 0.1%硫代硫酸钠； null 洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入 3%（W/V ）吐温 80和 0.3%卵磷脂； null 醛类消毒剂，需在肉汤中加入 0.3%甘氨酸； null 含表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入 3%（W/V ）吐温 80。 3、结果分析： 平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在 10 个以上，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌） ，若每个平板菌落实数超过 10 个，说明每毫升被检样液含菌量已超过 100 个，即不能再用。 七、紫外线消毒效果

13、的监测 1、检测方法 ：开启紫外线灯 5min 后，将紫外线强度指示卡或紫外线辐照计探头置于距灯管下垂直距离 1m 处，照射 1min。 2、结果判定： 普通 30W直管型紫外线灯，新灯辐照强度 90 W/cm2为合格；使用中的紫外线辐照强度70 W/cm2为合格； 30W高强度紫外线新灯的辐照强度180W/cm2为合格。 八、内镜消毒灭菌效果的监测 1、采样时间：在消毒灭菌后、使用前进行采样。 2、采样方法： 监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取 10ml 含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用 15ml 无菌试管从活检出口收集，及时送检，2h 内检测。 3、菌落计数： 将送

14、检液用旋涡器充分震荡，取 0.5ml，加入 2只直径 90mm 无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的 4548营养琼脂 15ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于 35培养 48h后计数。 4、结果判断：菌落数镜2 个平皿菌落数平均值20。 5、 致病菌检测： 将送检液用旋涡器充分震荡， 取 0.2 ml分别接种 90mm 血平皿、中国兰平皿和 SS 平皿，均匀涂布，35培养 48h，观察有无致病菌生长。 九、压力蒸汽灭菌效果监测方法 1、化学监测法： 化学指示卡（管）：放入每一个待灭菌的物品包中央。 化学指示胶带监测法：将其粘贴于每一个待灭菌物品包外。 结果判定： 所放置的指示卡（管）的

15、性状或颜色均变至规定的条件，即灭菌合格。 2、生物监测法 指示菌株：为嗜热脂肪杆菌芽孢（ATCC7953 或 SSIK31 株）。 检测方法： 将两个嗜热脂肪杆菌芽孢菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。 预真空灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准测试包（由 16 条全棉手术巾，每条 41cm66cm ，将每条手术巾的长边先折成 3 层，短边折成 2 层然后叠放，作成 23cm23cm 15 cm 大小的测试包） ； 下排气灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包（由 3 件平纹长袖手术衣、4 块小手术巾、2 块中手术巾、1 块大手术巾，30块 10cm10cm 8 层纱布敷料包裹成 25cm30cm 30cm 大小）。 手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒 (22cm 13cm 6cm) 代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两只灭菌试管内 ( 试管口用灭菌牛皮纸包封) ，将贮物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。 经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫蛋白胨水培养基中，经 56培养 7 天（自含式生物指示剂按说明书执行），观察培养