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1、1测定奥美拉唑的流动注射化学发光新方法【摘要】 目的 建立测定奥美拉唑的流动注射化学发光新方法。方法 当将奥美拉唑注入到高锰酸钾与鲁米诺反应的合并流中时，可检测到强的化学发光信号，结合流动注射技术对实验条件进行优化。结果 在优化的实验条件下，即混合管长度：150cm ，反应介质的碱度：0.15mol/L NaOH，鲁米诺的浓度：7.010-5mol/L，高锰酸钾的浓度：2.010-5mol/L 以及试剂流速：2.8mL/min ，奥美拉唑浓度在 2.010-81.010-5g/mL 范围内与相对化学发光强度具有线性关系;对浓度为 1.010-7g/mL 和 1.010-6g/mL 奥美拉唑溶液
2、进行 11 次平行测定的相对标准偏差分别为 1.0%和 2.6%;该方法的检出限为 310-9g/mL。结论 该方法简单、快速、灵敏，适用于药物制剂中奥美拉唑的含量测定。 【关键词】 奥美拉唑;化学发光;流动注射;药物ABSTRACT: Objective To develop a new flowinjection chemiluminescence (FICL) method for the determination of omeprazole. Methods Strong chemiluminescence (CL) signal was found generated when o
3、meprazole was injected into the reaction mixture of KMnO4 and luminol. The experimental conditions that affected the CL reaction were optimized by 2using FI mode. Results Under the optimum experimental conditions (150cm of mixing tubing, 0.15mol/L NaOH, 7.010-5mol/L luminol, 2.010-5mol/L KMnO4 and 2
4、.8mL/min of flow rate), CL intensity was linearly related to the concentration within the range of 2.010-8-1.010-5g/mL. The detection limit was 310-9g/mL omeprazole, and the relative standard deviations (n=11) were 1.0% and 2.6% for 1.010-7g/mL and 1.010-6g/mL omeprazole solutions, respectively. Con
5、clusion The proposed method is simple, rapid, sensitive, and suitable for determining omeprazole content in pharmaceutical preparations.KEY WORDS: omeprazole; chemiluminescence; flowinjection; pharmaceutical奥美拉唑(omeprazole)，化学名称为 5甲氧基24 甲氧基3 ，5 二甲基2 吡啶基甲基 亚硫酰基1H 苯并咪唑，是一种新型胃酸分泌抑制剂，为高效安全的抗消化道溃疡药物。奥美拉唑
6、能特异性地作用于胃黏膜壁细胞, 降低胃黏膜壁细胞中H+K+ATP 酶的活性从而抑制胃酸的分泌，已被广泛应用于十二指肠溃疡、胃溃疡和反流性食管炎的治疗。3目前，奥美拉唑的分析方法有分光光度法13 、伏安法45、极谱法 67、液相色谱法 810、毛细管电泳法 11和液相色谱 质谱法1213 等。化学发光法具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单等优点，已被广泛用于药物的分析测定1417 。利用化学发光法测定奥美拉唑的文献报道仅有 1 篇，即张淑琼18利用奥美拉唑对硫酸铈 连二亚硫酸钠化学发光反应体系的增强作用，建立了测定奥美拉唑的化学发光法。该方法测定奥美拉唑的线性范围为 3.010-73.010-
7、5g/mL ，检出限为 310-7g/mL。本研究根据将奥美拉唑注入到高锰酸钾与鲁米诺化学发光反应的反应混合液中时，可以产生强的化学发光信号这一发现，结合流动注射技术，优化了实验条件，建立了利用这一化学发光反应测定奥美拉唑的流动注射化学发光新方法。该方法已被用于奥美拉唑肠溶胶囊中奥美拉唑的含量测定，结果与药典方法的测定值相一致19。1 实验材料与方法1.1 仪器 IFFMD 型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限公司)，流路如图 1 所示。聚四氟乙烯管(PTFE，0.8mm i.d.)用于连接系统中的所有组件。蠕动泵用来输送所有溶液，每一管道的流速为 2.8mL/min。样品注射(50
8、mL)借助于六通阀自动完成。4化学发光信号用 CR105 型光电倍增管( 北京滨松电子科技有限公司)检测，数据获得和处理通过 IFFMD 化学发光数据处理系统(西安瑞迈电子科技有限公司)完成。CRT970 荧光分光光度计(上海分析仪器厂)用来绘制荧光光谱和化学发光光谱。图 1 流动注射化学发光流路示意图Fig.1 Schematic diagram of CL flow systema：奥美拉唑溶液 ;b：鲁米诺溶液;c ：高锰酸钾溶液;L：混合管;P：蠕动泵 ;V：注射阀;F：流通池;PMT：光电倍增管;HV：高压;PC：计算机;W：废液。1.2 试剂和溶液 奥美拉唑标准溶液(5.0010-
9、4g/mL) 的配制：准确称取 50.0mg 奥美拉唑标准品(中国药品生物制品检定所提供)，用少量水溶解后，转移至 100mL 棕色容量瓶中，用水定容至标线，摇匀。储于 4冰箱中，使用时用水逐级稀释至所需浓度。鲁米诺储备液(1.010-2mol/L) 的配制：准确称取 1.77g 鲁米诺(陕西师范大学合成) ，用 1mol/L 的氢氧化钠溶液 50mL 溶解后，用二次水定容至 1L 容量瓶中，室温下放置 1 周后使用。5高锰酸钾储备液(2.010-2mol/L) 的配制：称取 3.16g 高锰酸钾(西安化学试剂厂) ，溶解于 1L 沸水中，玻璃纤维过滤，室温下放置 2 周后使用。除鲁米诺外，其
10、它所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。1.3 实验方法 准确移取一定量的奥美拉唑标准溶液或样品溶液于 50mL 容量瓶中，加水至标线，摇匀，作为试液。按照图 1 所示流路，管道(a，b 和 c)分别连接奥美拉唑溶液、鲁米诺溶液和高锰酸钾溶液。鲁米诺溶液首先通过 Y 型混合器与高锰酸钾溶液在线混合反应。待基线稳定后，50mL 奥美拉唑溶液借助于六通阀自动注入到鲁米诺溶液与高锰酸钾溶液的合并流中，产生化学发光信号。以相对化学发光强度对奥美拉唑进行定量。2 结果与讨论2.1 实验条件的选择 以 2.010-7g/mL 奥美拉唑溶液对实验条件进行优化，优化的实验参数包括混合管长度、反应介质的碱度、鲁米
11、诺和高锰酸钾的浓度，以及试剂流速。高锰酸钾可在碱性溶液中氧化鲁米诺产生化学发光。为了降低背景信号，获得最大的灵敏度，在高锰酸钾溶液与鲁米诺溶液的6汇合点与进样阀之间连接一混合管(0.8mm i.d.)，使高锰酸钾溶液与鲁米诺溶液充分混合并反应。考察混合管的长度在 20250cm 范围内对化学发光反应的影响。结果表明，随着混合管长度的增长，背景信号逐渐降低，但化学发光信号无明显变化;当混合管长度为150cm 时，信噪比有最大值，因此选择混合管长度为 150cm。高锰酸钾与鲁米诺之间的化学发光反应须在碱性条件下进行。在反应中，反应介质的碱度通过改变鲁米诺溶液中氢氧化钠的浓度加以调节。考察了氢氧化钠
12、浓度在 0.010.20mol/L 范围内对化学发光反应的影响。如图 2 所示，相对化学发光强度随着氢氧化钠浓度的增大而增大;当氢氧化钠浓度为 0.15mol/L 时，相对化学发光强度值达到最大;当氢氧化钠浓度高于 0.15mol/L 时，相对化学发光强度逐渐降低。因此，选择 0.15mol/L 的氢氧化钠。观察鲁米诺浓度在 1.010-51.010-4mol/L 范围内对化学发光反应的影响，结果见图 3。当鲁米诺浓度在 1.010-57.010-5mol/L 范围内，相对化学发光强度随着鲁米诺浓度的增大而增大;当鲁米诺浓度高于 7.010-5mol/L 时，相对化学发光强度随着鲁米诺浓度的增
13、大而降低。因此，选择鲁米诺的浓度为7.010-5mol/L。图 3 鲁米诺浓度对相对化学发光强度的影响7Fig.3 Effect of luminol concentration on the relative CL intensity实验条件：2.010-7g/mL 奥美拉唑，0.15mol/L NaOH，2.010-5mol/L KMnO4，混合管长度 150cm，试剂流速2.8mL/min。对高锰酸钾浓度在 5.010-66.010-5mol/L 范围内对化学发光反应的影响进行考察。结果显示(图 4)，当高锰酸钾浓度为2.010-5mol/L 时，反应有最大的相对化学发光强度;高于或低于
14、2.010-5mol/L 高锰酸钾均导致相对化学发光强度的降低。因此，选择高锰酸钾的浓度为 2.010-5mol/L。图 4 高锰酸钾浓度对相对化学发光强度的影响Fig.4 Effect of luminol concentration on the relative CL intensity实验条件：2.010-7g/mL 奥美拉唑，0.15mol/L NaOH，7.010-5mol/L 鲁米诺，混合管长度 150cm，试剂流速2.8mL/min。8试剂流速影响化学发光反应的发光强度。对试剂流速在2.13.5mL/min 范围内对化学发光反应的影响进行了考察(图 5)。结果表明,当试剂流速低
15、于 2.8mL/min 时，相对化学发光强度随着试剂流速的增大而增大;当试剂流速高于 2.8mL/min 时，相对化学发光强度随着试剂流速的增大而减小。本文选择的流速为2.8mL/min。2.2 分析特性 在选定的实验条件下，奥美拉唑浓度在2.010-81.010-5g/mL 范围内与相对化学发光强度具有线性关系。为了提高测定的准确度，校准曲线按数量级分段绘制，校准曲线的基本参数见表 1。对相关系数进行 t 检验，结果表明，在 99%置信水平上，该校准曲线具有很好的线性关系。图 5 试剂流速对相对化学发光强度的影响Fig.5 Effect of flow rate on the relativ
16、e CL intensity实验条件：2.010-7g/mL 奥美拉唑;0.15mol/L NaOH;7.010-5mol/L 鲁米诺;2.010-5mol/L KMnO4，混合管长度 150cm。表 1 校准曲线的线性范围及回归方程对浓度为 1.010-7g/mL 和 1.010-6g/mL 奥美拉唑溶液9进行 11 次平行测定的相对标准偏差分别为 1.0%和 2.6%;按照IUPAC 建议，计算出方法的检出限为 310-9g/mL。2.3 干扰研究 在选定的实验条件下，对浓度为 5.010-7g/mL 奥美拉唑溶液进行了干扰试验。结果表明，在保持相对测量误差在5% 范围内， 1000 倍的 NO3-、SO42-、Cl-、C2O42-、脲;100 倍的 Ca2+、Zn2+、CO32-、PO43-、
