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1、微生物学检验菌落总数的测定1 原理微生物活体数量的测定方法，常用平板培养计数法。它是通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，再取一定的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的培养基内，最后根据在平板上长出的菌落数计算出每克（或 mL）样品中的活菌数量。2 材料和仪器2.1 平皿：90mm 。2.2 无菌锥形瓶：容量 250mL，500 mL 。2.3 无菌吸管：1mL（具 0.01mL 个度）,10mL（具 0.1mL 刻度）或微量移液器及吸头。2.4 灭菌锅。2.5 恒温培养箱2.6 涂棒。2.7 酒精灯。2.8 超净工作台。2.9 磁力搅拌器。2.10 漩涡振荡器3 检验程序菌落总数
2、的检验程序见下图。检样10g 样品+90mL 无菌生理水，均质方法 方法 10 倍系列稀释选择至少 3 个适宜样品稀释均液各取 1mL 分别加入无菌培养皿中，每皿中加入 15mL20mL 平板计数琼脂培养基，混匀，凝固。在培养皿中加入 15mL20mL 平板计数琼脂培养基，凝固。然后在每皿中加入0.2mL 样品稀释液，涂布均匀。在 361倒置培养 2448 小时计算菌落总数4 操作步骤4.1 培养基和试剂的配制4.1.1 平板计数琼脂培养基：LB 培养基（最常用）牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1LpH 7.07.2将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节 pH 值，分
3、装锥形瓶中，121高压灭菌 30分钟。4.1.2 无菌生理盐水的配制：称取 8.5g 氯化钠溶解于 1000mL 蒸馏水中，121高压灭菌 30 分钟。4.2 样品的稀释：4.2.1 固体样品： 称取 10g 固体样品置于盛有 90mL 无菌生理盐水的无菌锥形瓶中（内装数粒无菌玻璃珠） ，在旋转式摇床上 200r/min 充分振荡 30min，制成 1：10 的样品均液，即 10-1 稀释液。4.2.2 用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1：10 样品均液 1mL（吸取前需要摇匀 1：10 稀释液） ，缓慢加入盛有 9mL 无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不能触及 稀释液面）
4、，用漩涡振荡器振荡，混合均匀，制成 1：100 的样品稀释均液。4.2.3 按照 4.2.2 操作程序，制备 10 倍系列样品稀释液，每递增稀释一次，换用一次 1mL无菌吸管或吸头。4.2.4 根据对样品活菌数量的估计，选择 34 个适宜稀释度的样品均液（比如 10-6，10 -7，10 -8，10 -9 稀释液） 。4.2 平板接种与培养接种方法 1：用 1mL 无菌吸管或微量移液器分别吸取不同稀释度的菌悬液 1mL 于一个无菌培养皿中（每个稀释度做三个重复） ，再在培养皿中分别倒入 1015mL 已融化并冷却至 4550的培养基，盖好平皿盖子，趁热轻轻转动培养皿，使菌液与培养基充分混合均匀
5、，冷凝后在恒温培养箱中倒置培养 24，培养温度为 361。同时以无菌水作空白对照。注：比如 1000 亿 CFU 样品稀释梯度可选择为：10 -8，10 -9，10 -10。接种方法 2：用 1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 0.2稀释液均液于计数培养基平板上，将稀释液涂布均匀，吸附，在恒温培养箱中倒置培养 24，培养温度为 361。同时以无菌水作空白对照。 （计算时需要把 0.2mL 的倍数也计算在稀释倍数内）注：比如 1000 亿 CFU 样品稀释梯度可选择为：10 -7，10 -8，10 -9。.3 菌落计数计算各平板菌落数 可用肉眼观察，必要时借用放大镜或菌落计数器，以防遗漏。记录稀释
6、倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units,CFU）表示4.3.1 选取菌落数在 30300 之间，无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU 的平板记录具体菌落数，大于 300 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用 3 个平行平板的平均数。4.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半菌落分布又很均匀时，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。4.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4.
7、3.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效，需重新测定。5 菌落总数的计算方法5.1 若只有一个稀释度的菌落数 30100 的适宜计数范围之间时，计算三个平行的平均值，再乘以相应稀释倍数，作为每克中菌落总数结果。5.2 若有 2 个稀释度，其平均菌落数在 30100 的适宜计数范围之间，应按两者菌落数之比值来决定；若其比例小于 2 应计数两者的平均数；若大于 2 则计数其中稀释度较小的菌落总数。5.3 若所有稀释度的平板上菌落数均不在 30100 之间时，其中一部分小于 30 或大于 100时，则以最接近 30 或 100 的平均菌落数乘以相应的稀释倍数计算。5.4 若所有稀释度的平板
8、上菌落数离 30100 范围较远时，建议选择适合的稀释倍数重新测定。表 1 样品活菌数量测定结果数据记录注意事项：检测过程中尽量避免环境杂菌干扰，操作人员要用 70的酒精擦拭手和桌子。样品 菌落数（个） 活菌数（cfu/g 或 cfu/mL）平行 1平行 2平行 3平均19912012 年考研中医综合试题及答案 刘云 - 4 -1991 年硕士研究生入学考试 中医综合科目试题 一、A型题：每一道考题下面都有A、B、C、D、E 5个备选答案，在答题时请选择一个最合适的答案，写在答题纸上1. “阴在内，阳之守也，阳在外，阴之使也”，主要说明阴阳之间存在着：A. 对立制约 B. 互根互用 C. 互为
9、消长 D. 平衡协调 E. 互相转化2. 与精神意识思维活动关系最密切的是A. 心主血脉的生理功能 B. 肝主疏泄的生理功能 C. 脾主运化的生理功能 D. 肺主治节的生理功能 E. 肾主藏精的生理功能3. 肺为“水之上源”的主要依据是A. 肺的通调水道的功能 B. 肺具有布散水液的功能 C. 肺具有输精于皮毛的功能 D 肺为脏腑之华盖 E. 饮入于胃上归于肺4.“乙癸同源”应归属于：A. 肝和心的关系 B. 肝和肺的关系 C. 肝和肾的关系 D. 肝和牌的关系 E. 肾和牌的关系 5.“吐下之余，定无完气”的生理基础是 A. 气能生津 B. 津能化气 C. 气能摄津 D. 津能载气 E. 气
10、能行津6. 十二经脉气血充盛有余时，则渗注于：A. 经别 B. 别络 C. 浮络 D. 孙络 E. 奇经7 素问五藏生成篇说“多食酸”则：A. 脉凝泣而变色 B. 皮搞而毛拔 C. 筋急而爪枯D. 肉胝皱而唇偈 E. 骨痛而发落8. 临证指南医案指出“内风”的机理均属于 ：A. 体内气机的逆乱 B. 体内阴血的不足 C. 体内阳气之变动 D. 诸风掉眩，皆属于肝 E. 体内筋脉失常9. “气盛则身以前皆热”的经脉是A. 手少阴心经 B. 任脉 C. 冲脉 D. 足阳明胃经 E 足太阴脾经10. “寒因寒用，热因热用”属于 ：A. 逆治法 B. 阳病治阴，阴病治阳 C. 阳中求阴，阴中求阳 D.
11、 扶阳配阴，扶阴配阳 E 以上都不是11. 李士材的诊家正眼把脉象分为多少种 ?A. 24 种 B. 28 种 C. 27 种 D. 32 种 E. 36 种12. 望色十法中 “夭”是指：A. 色惨 B. 色闭 C. 色开 D. 色深浓 E. 色枯楠13. 腐苔主病与哪一项无关？A. 食积 B. 痰浊 C. 湿温 D. 肝痈 E. 下疳14. 多食易饥 , 大便漉泄是A. 食积不化 B. 脾胃虚弱 C. 肝牌不和 D. 胃火亢盛 E. 胃强脾弱15. 天亮咳甚属于 ：A. 寒湿 B. 肾亏 C. 脾虚 D. 燥热 E. 肺实16. 下列哪种脉象不主实证 ?A. 革脉 B. 滑脉 C. 结脉
12、D. 肾脉 E. 弦脉17. 解索脉的特征是A. 脉在筋肉之间，脉搏极迟慢 B. 脉在筋肉之间，连连数急，三五不调C. 脉在皮肤，头定而尾摇 D. 脉在皮肤，如虾游水 E. 以上都不是18. 胸满，呕逆，飧泄，狐疝，遗溺属于 ：A. 足厥阴肝经病证 B. 足太阴脾经病证 C. 足少阴肾经病证 D. 足少阳胆经病证 E. 足太阳膀胱经病证19. 少阴热化证的心烦不寐是因 ：A. 热扰胸脯 B. 热扰心神 C. 内有燥屎 D. 肝阳上亢 E. 水亏火旺20. 温病上焦病证不见以下哪个症状 ?A. 口渴 B. 谵语 C. 肢厥 D. 瘛疭 E. 脉浮数21. 哪味药可治痹痛、疥癣?A. 麝香 B.
13、牛黄 C. 冰片 D. 苏合香 E. 菖蒲19912012 年考研中医综合试题及答案 刘云 - 5 -22. 蜀漆的来源是A. 漆树的枝叶 B. 泽漆的全草 C. 黄常山的嫩枝叶 D. 干漆的加工品 E. 田三七的根23. 蟾酥内服一次用量是A.0.0150.03 克 B.0.30.6 克 C.0.10.2 克 D.0.0020.004 克 E. 以上都不是24. 我国最早记载制成乌头碱结晶的文献是A. 本草纲目 B. 本草蒙荃 C. 炮制大法 D. 白猿经 E. 本草备要25. 地龙的功效是A. 息风、平喘、祛风湿 B. 息风、利尿、退黄疸 C. 息风、利尿、退虚热D. 息风、安神、平喘咳 E. 息风、平喘、通经络26. 栀子的归经是A. 心、肺、胃、三焦经 B. 心、肝、胃、肺经 C. 心、肺、胆、膀胱经D. 心、胃、肝、胆经 E. 心、胃、肺、膀胱经27. 清肝养血明目退翳的药物是A. 谷精草 B. 密蒙花 C. 青葙子 D. 菟丝子 E. 沙苑子28. 固精缩尿兼能涩肠止泻的药是A. 金樱子 B. 桑螵蛸 C. 覆盆子 D. 赤石脂 E. 乌梅29. 下列除哪项外均为苦味药的作用 ?A. 清热泻火 B. 泄降逆气 C. 引药下行 D. 通泻大便 E. 燥湿坚阴30. 既能燥湿止带，又能消肿排脓的药是A. 乌贼骨 B. 白蔹 C
