《沙苑子黄酮提取工艺研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《沙苑子黄酮提取工艺研究（9页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1沙苑子黄酮提取工艺研究作者：刘银芳，吴文倩，刘春宇，顾振纶，郭次仪【摘要 】 目的优选沙苑子黄酮提取工艺。方法采用碱水、碱醇和乙醇提取，考察提取溶媒对沙苑子总黄酮提取的影响；采用石油醚脱脂后乙醇提取和直接乙醇提取，比较脱脂对沙苑子总黄酮提取的影响；并采用正交设计法优选乙醇提取工艺。结果以乙醇为溶媒，提取所得总黄酮含量最高；脱脂对提取有较大影响，脱脂后乙醇提取所得沙苑子总黄酮含量较高；乙醇提取最佳工艺条件为乙醇体积分数 80%，料液比为 116，提取时间为 1.5 h，沙苑子粒度为 40目。结论优选出的提取工艺具有操作简便，可行性等特点。 【关键词】 沙苑子； 提取工艺； 黄酮； 正交实验沙苑
2、子为豆科植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R .Br 的种子，具有温补肝肾、固精、缩尿、益肝明目的功能；其性温而不燥和平柔润，补而不峻，平补肝肾，阴阳并补，唐代曾为上贡茶品。沙苑子主要含有黄酮类、三萜类、有机酸类、氨基酸、多肽、蛋白质、甾醇、多糖及铁、锌、锰、铜等微量元素。药理研究表明16 ，沙苑子具有保肝，降脂，降压，抑制血小板聚集，改变血液流变学指标，抗炎，增加非特异性特异性免疫功能、抗肝纤维2化和抗肿瘤等作用，沙苑子黄酮为主要有效成分。该药安全有效，是治疗肝病很有前途的中药。为进一步开发利用沙苑子，本文以沙苑子苷 A 为对照品，比较了不同溶媒对沙苑子总黄酮提取的
3、影响，脱脂对提取的影响，并采取正交设计法优选了沙苑子总黄酮乙醇提取的工艺条件，为更好地开发和利用沙苑子提供实验依据。1 仪器与试药UV-240PC(日本岛津出品),旋转蒸发仪(SENCO 出品，R 系列),真空干燥箱(DZF-6050)等。沙苑子苏州雷允上药业集团公司提供, 产地为陕西渭南，由苏州大学刘春宇教授鉴定为豆科植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R.Br.的种子；其它化学试剂均为分析纯；沙苑子苷 A（自制，含量 98%以上） 。2 方法和结果2.1 总黄酮含量测定 72.1.1 药材总黄酮含量测定供试品溶液制备：准确称取沙苑子粉末(过 20 目筛)2.0g,置
4、索氏提取器中, 石油醚 120 ml 回流提取 4 h, 药渣挥干溶剂, 置3100 ml 圆底烧瓶中, 准确加入 80%乙醇 60ml, 称定重量, 于水浴85C 加热回流 1.5 h, 取出放冷称重, 补充 80%乙醇至原重量, 混匀, 放置, 吸取上清液 20 ml 备用。对照品溶液制备：精密称取沙苑子苷 A 对照品适量，加 50%乙醇制成每毫升含沙苑子苷 A 100 g 的溶液，即得。标准曲线的绘制：准确吸取沙苑子苷 A 对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ，6.0 ml 分别置 25ml 容量瓶中，50%乙醇定容，于 266 nm 处测定吸收度。 以沙苑子苷 A 对照品
5、溶液浓度为纵坐标，吸收度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为:C=29.568 8A-0.843 6，r=0.999 9 ( n=6 ) 。结果表明，沙苑子苷A 在 424 g/ml 范围内呈线性关系。含量测定：精密吸取供试品溶液 0.5 ml, 置 25 ml 容量瓶中, 50%乙醇定容后, 于 266 nm 处测定吸收度，以沙苑子苷A(C28H32O16)计算总黄酮含量。结果：本实验用沙苑子药材的总黄酮质量分数为 3.56。2.1.2 提取物总黄酮含量测定取沙苑子提取物 80.0 mg，精密称定，置 100 ml 容量瓶中, 加 50%乙醇适量，微热使溶解, 冷却4后，定容至刻度。准确吸取溶
6、液 5 ml，置 50 ml 容量瓶中，50%乙醇定容至刻度，滤过，取续滤液，于 266 nm 处测定吸收度，以沙苑子苷 A(C28H32O16)计算总黄酮含量和提取率。2.2 提取溶媒的选择2.2.1 碱水提取准确称取沙苑子粗粉 150.0 g(40 目), 置圆底烧瓶中,加入 2%NaOH 水溶液回流提取 2 次，2 000 ml/次，1h ，滤过，合并滤液，调 pH 值至中性后,减压回收溶剂,真空干燥。测定总黄酮含量和提取率。结果见表 1。表 1 不同溶媒对沙苑子黄酮提取的影响（略）2.2.2 碱醇提取将溶媒改为 2%NaOH 乙醇溶液(乙醇含量 50%),同法回流提取, 测定总黄酮含量
7、和提取率。结果见表 1。2.2.3 乙醇提取将溶媒改为 80%乙醇溶液，同法回流提取, 测定总黄酮含量和提取率。结果见表 1。从表 1 可以看出，80%乙醇提取所得提取物沙苑子总黄酮含量和总黄酮量均最高，而碱水和碱醇提取不仅总黄酮含量和总黄酮量较低，而且干浸膏均为黑褐色硬膏状。实验结果表明，以乙醇为溶媒提取为佳。52.3 脱脂对提取的影响2.3.1 脱脂准确称取沙苑子粗粉 150.0g(40 目),置圆底烧瓶中，加入 1 500 ml 石油醚回流脱脂 1 h 后,滤过，滤渣挥干石油醚，加入 80%乙醇回流提取 2 次，2 000 ml/次，1 h，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，真空干燥。测定总
8、黄酮含量和提取率。2.3.2 不脱脂按上法，直接加入 80%乙醇回流提取 2 次，测定总黄酮含量和提取率。结果见表 2。表 2 脱脂对沙苑子总黄酮的影响（略）从表 2 可以看出，脱脂对沙苑子总黄酮提取有较大影响，石油醚脱脂后乙醇提取，提取沙苑子总黄酮百分含量和总黄酮量较高。结果表明，沙苑子总黄酮的提取应采用脱脂过程。2.4 乙醇提取工艺优选2.4.1 方法根据预试验结果确定沙苑子黄酮醇提工艺中考察的因素，以及各因素所取的水平范围，选定 L9（34）正交表，对乙醇浓度（A） ，料液比（B） ，提取时间（C）和粒度（D）4 个因素进行考察。见表 34。准确称取沙苑子粗粉 150 .0g（60 目)
9、,置圆底烧瓶中,加入 1 500 ml 石油醚回流脱脂 1 h，滤过，药渣挥去石油醚6后, 按正交实验表 34 的条件回流提取 2 次，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，真空干燥。测定总黄酮含量和总黄酮量。2.4.2 结果与分析结果见表 34 。表 3 因素水平，表 4 沙苑子总黄酮提取实验及结果分析（略） 。根据表 4，由极差分析结果得知，对总黄酮量：各因素的主次分别为 DBAC，最佳条件为: A3B3C2D3；对总黄酮含量：各因素的主次分别为 ADBC, 最佳条件为A3B3C2D3。综合这两个指标，并考虑到药材粒度太小过滤困难等因素，得出的最佳条件为 A3B3C2D2，即乙醇体积分数为 80%
10、，料液比为 116，提取时间为 1.5 h，粒度为 40 目，对总黄酮含量影响最小的是 C 因素，把 C 因素作为误差相处理，以总黄酮量为指标进行方差分析。结果见表 5。表 5 方差分析结果（略）2.4.3 验证性实验根据上述结果所得乙醇提取最佳工艺条件：A3B3C2D3，即乙醇浓度为 80%,料液比为 116，提取时间为 1.5 h，粒度为 40 目。为了验证工艺的稳定性，对最佳工艺条件进行了3 次验证实验。结果见表 6。表 6 重复性实验结果（略）由表 6 可知，所得乙醇提取最佳工艺条件的重复性较好，平均总黄酮含量为 5.13，提取率为 96.1，优化工艺较为理想。73 讨论本研究结果，脱
11、脂对沙苑子总黄酮的提取有较大影响，脱脂后沙苑子黄酮提取率明显提高；对提取溶媒的考察，结果乙醇提取优于碱水和碱醇提取；通过正交实验优选的乙醇提取的工艺条件为乙醇体积分数为 80%，料液比为 116，提取时间为 1.5h，沙苑子粒度为 40 目，优选工艺具有较好的重复性。黄酮类成分大多具有酚羟基，因此可用碱性水（如碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钙水溶液等）或碱性稀醇（50的乙醇）浸出。本实验结果碱水及碱醇提取法效率较低，可能与沙苑子黄酮的结构有关，沙苑子黄酮中主要含有沙苑子苷 A（鼠李柠檬素-3.4-O-D-双葡萄苷） ，由于其结构中只有一个游离羟基（5-OH） ，且易与 4 位羰基形成分子内
12、氢键，故酸性较弱，用碱水提取效果不理想。沙苑子含油约 5%，由于油脂的存在影响沙苑子黄酮的溶出，故脱脂对提取有较大的影响；且油脂的存在影响提取物的外观性状和干燥。【参考文献】81刘春宇，顾振纶，张克平，等.沙苑子黄酮抗 CCl4 大鼠肝纤维化作用及对 IFN ，TGF-1 的影响 J.中国药学杂志，2004，39 （ 12）：910.2Chun-Yu Liu, Zhen-Lun Gu, Wen-Xuan Zhou, et.al. Effect of astragalus complanatus flavonoid on anti-liver fibrosis in ratsJ. World J
13、ournal of Gastroenterology, 2005，11 （ 37）：5782.3刘春宇，顾振纶，杜崇民，等. 沙苑子黄酮抗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究J.中国药理学通报，2007，23（6）：781.4刘春宇，顾振纶，杜崇民，等. 沙苑子抗肿瘤活性成分体内外筛选J.中草药，2007，38（7）：1052.5刘春宇，顾振纶, 杜崇民，等. 沙苑子黄酮对 H22 荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用及对免疫功能的影响J.中成药，2007，29 （ 11）：1690.6Ran-Wei Hu, Chun-Yu Liu,Chong-Min Du,et al.Induction od apoptosis in human hepatocarcinoma SMMC-7721 cells in vitro by flavonoids from Astragalus 9complanatusJ. Journal of Ethnopharmacology, 2009，123(2):293.7刘春宇, 胡延维，孙雄华，等 . 以沙苑子苷为对照品测定沙苑子总黄酮含量J.中国野生植物资源，2002，21（4）：57.
