《阿托伐他汀治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎》由会员分享，可在线阅读，更多相关《阿托伐他汀治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎（14页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询阿托伐他汀治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎【摘要】 目的 探讨阿托伐他汀对 Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的治疗作用。 方法 建立 Wistar大鼠 EAE模型,给予不同剂量阿托伐他汀处理,观察大鼠发病程度、病理改变及血清白细胞介素 4(IL4) 、干扰素(IFN) 水平的变化。 结果 阿托伐他汀可减轻大鼠发病程度,减少炎性病灶数,降低血清 IFN 水平升高幅度,使血清 IL4 水平在发病初期即升高,高剂量阿托伐他汀作用更显著。 结论 阿托伐他汀在一定程度上可有效干预大鼠 EAE发病,并呈剂量相关性,其机制可能与改变 Th1/
2、Th2类细胞因子比值有关。 【关键词】 吡咯类; 脑脊髓类; 自身免疫性,实验性; 脑脊髓炎; 白细胞介素 4; 干扰素型ABSTRACT: Objective This study was designed to explore the effects of atorvastatin, an inhibitor of HMGCoA reductase on the experimental autoimmune encephalomyelitis(EAE) in Wistar rats. Methods Atorvastatin was administered at two differe
3、nt doses to Wistar rats EAE model. A scale of 0-5 according to the symptoms scored the 精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询severity of EAE. The numbers of inflammation lesion in the brain and spinal cord were counted by optical microscopy. The serum levels of interferon and interleukin4 were determined by enz
4、ymelinked immunosorbent assay. Results Compared to the untreated group, the atorvastatin groups only partially developed EAE with a lighter degree of malfunction. The numbers of inflammation lesion reduced significantly in atorvastatin treated groups. The serum level of interferon increased in atova
5、rstatin treated groups with the development of EAE, but was lower than that in the untreated group. The serum levels of interleukin4 in atorvastatin groups were higher at the onset. Higher dose atorvastatin showed better protection against EAE development. Conclusion To a certain extent atorvastatin
6、 could effectively ameliorate EAE in rats. The effects were in a dosedependent fashion, which might be mechanistically related to the balance between Th1/Th2 cytokines.KEY WORDS: experimental autoimmune encephalomyelitis; atorvastatin; IL4; IFN精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是一
7、种由免疫细胞介导攻击中枢神经系统髓鞘为特征的自身免疫性疾病,好发于青壮年,是青壮年人群致残的常见疾病之一。目前临床上经美国 FDA批准用于治疗 MS的药物有: 干扰素(IFN) 、格拉默(Glatiramer acetate)和米托蒽醌(Mitoxantrone)等。这些药物作用有限,且有非肠道给药、价格昂贵、不良反应发生率高等缺点,故有必要寻找新的更安全有效的治疗药物。他汀类药物主要用于降脂治疗,近年来发现其具有独立于降脂作用的免疫调节作用的多效性1。笔者研究阿托伐他汀对人MS的经典动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyeli
8、tis,EAE)模型的影响,探讨其在 EAE中的可能作用机制。1 材料和方法1.1 主要材料 白细胞介素 4（IL4 ）和 IFN ELISA试剂盒(北京晶美生物工程有限公司);阿托伐他汀(辉瑞制药有限公司);豚鼠和雌性 Wistar大鼠湖南农业大学实验动物养殖场:许可证号SCXK(湘)20030003,8 10 周龄,体质量 180220 g。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.2 动物 健康雌性 Wistar大鼠 60只,随机分成 4组:对照组，EAE组(蒸馏水灌胃),阿托伐他汀干预一组(阿托伐他汀 1 mgkg-1d-1)和阿托伐他汀干预二组(阿托伐他汀 10 mgk
9、g-1d-1)。每组再随机分成 3小组,每小组各 5只,分别自免疫接种日开始灌胃至第 8,11,17天。1.3 免疫原乳剂的制备及模型的建立 参照文献23 法,取体质量 300400 g豚鼠处死后,在无菌操作下,迅速剥出脊髓,制成50%(M/V)的豚鼠脊髓匀浆,再与等量的完全福氏佐剂(含 6 mg/mL卡介苗)充分混合,制成免疫原乳剂。大鼠两后足垫内各注射等量免疫原乳剂(共计 100 g/0.2 mL),同时尾根皮下注射百日咳疫苗(5.81010mL-1)0.2 mL。对照组免疫原乳剂中的豚鼠脊髓匀浆用等量的生理盐水代替,余同其他组。大鼠免疫接种后每日称体质量,观察病情并进行神经功能障碍评分。
10、神经功能障碍评分标准采用 5分评分法4:0 分,无明显异常;1分,大鼠尾部无力麻痹;2 分,尾部无力+后肢无力;3 分,后肢轻度麻痹;4分,后肢严重麻痹伴前肢无力,被动翻身不能复原;5 分,全身瘫痪或濒临死亡。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.4 血清中 IL4 和 IFN 水平检测 各组 3小组分别于免疫接种后第 8,11,17天(相当于 EAE组发病初期、高峰期和缓解期),通过摘除眼球取全血 1.5 mL,离心后获得血清于-20 冰箱保存待检。用 ELISA法检测 IL4 和 IFN 水平。1.5 病理检查 取各组中免疫接种后第 11天(相当于 EAE组发病高峰期)的
11、大鼠各 5只,断头处死后,剥取脑和脊髓用 4%多聚甲醛固定,石蜡包埋。取大脑顶叶、小脑脑干及腰髓切片,进行常规 HE 染色和 Weils髓鞘染色。光镜下按呈袖套样改变或超过 1520 个炎性细胞浸润者称为 1个炎性灶进行病灶计数,将各节段病灶数相加后取均数,进行显著性检验。1.6 统计学处理 数据采用 xs表示。成组设计多个样本均数比较用方差分析,组间均数比较用 LSDt 检验。发病率比较用 2 检验。以 P 0.05为差别有统计学意义。2 结果精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询2.1 动物发病情况 EAE组大鼠在致敏后约 710 d陆续出现活动减少,体质量减轻,尾部麻痹,双
12、后肢瘫痪,严重者四肢瘫痪,伴大小便失禁,甚至出现濒死状态。整个病程持续 810 d,发病率 100%。对照组均无发病。阿托伐他汀干预一组和干预二组发病率分别为 60%和40%,其中干预二组与 EAE组比较,差别有统计学意义。两干预组平均发病潜伏期相对 EAE组延后 12 d,临床症状相对较轻,尤以发病高峰期干预组和 EAE组比较临床症状明显减轻(表 1,图 1)。表 1 EAE组和干预组各期临床神经功能障碍评分（略）Tab 1 The clinical scores at different periodsEAE：实验性自身免疫性脑脊髓炎. 与 EAE组同期比较,:P 0.05; 与干预一组同
13、期比较,:P 0.05.图 1 实验性自身免疫性脑脊髓炎发病大鼠（略）精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询Fig 1 A rat in disease state2.2 血清细胞因子的变化 与对照组比较,EAE 组血清 IFN 水平在发病初期即升高,并随病情加重进一步升高,到免疫接种后第 11天临床神经功能评分达高峰时,IFN 水平亦达到高峰,而血清IL4 水平在发病缓解期升高。阿托伐他汀干预组血清 IFN 水平也出现升高,但升高幅度显著低于 EAE组,而血清 IL4 水平在发病初期即出现升高,在缓解期更明显。IFN 水平升高的降低程度和 IL4 水平的升高程度,随着药物剂量增
14、加而更加明显(图 2)。2.3 病理观察 EAE组脑和脊髓内小血管尤其是 A:对照组; B:EAE组; C:干预一组 ; D:干预二组. 与对照组同期比较,:P 0.01; 与 EAE组同期比较,:P 0.05; 与干预一组同期比较,:P 0.01.上一页 1 2下一页图 2 大鼠血清 IFN 和 IL4 水平（略）精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询Fig 2 The serum levels of IFN and IL4小静脉周围大量炎性细胞浸润,血管袖套样改变。浸润的炎性细胞类型以淋巴细胞为主,亦可见胶质细胞和一定数量的巨噬细胞,伴有海马锥体细胞和脊髓前角运动神经元变性。
15、对照组无病理改变。阿托伐他汀干预组可见类似 EAE组病理改变(图 3)。EAE 组、阿托伐他汀干预一组和干预二组的病灶数分别为(11.961.83),(5.250.98)和(3.160.94)。两干预组病灶数较 EAE组明显减少(P 0.01),尤以干预二组为甚(与干预一组比较,P 0.05)。而在Weils髓鞘染色中,仅 EAE组少数大鼠在脑干和小脑白质内可见片状脱髓鞘,对照组与药物干预组均未发现明显脱髓鞘改变。3 讨论3.1 EAE模型血清 IFN 、IL4 变化特点 EAE是一种获得性髓鞘脱失的动物模型,在临床、病理等方面与 MS极其相似,是 MS的经典动物模型5。本实验在建立 Wist
16、ar大鼠 EAE模型基础上,观察不同剂量的阿托伐他汀对 EAE大鼠的治疗作用。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询MS和 EAE是细胞免疫与体液免疫均参与的错综复杂疾病,但以细胞免疫为主6。而 CD4+Th细胞是主要参与的免疫应答细胞,根据生成细胞因子的不同,CD4+Th 细胞又可分为 Th1和 Th2两个亚群。Th1类细胞因子主要有 IL1 、IL2 、IL12 、TNF 和 IFN 等;Th2类细胞因子主要有 IL4 、IL5 和 IL10 等。在正常情况下,Th1/Th2细胞因子互相拮抗处于动态平衡,使机体处于免疫稳定状态;病理情况时,两者平衡被打破,Th1 细胞因子水平上升,Th2 细胞因子水平下降,则导致细胞免疫介导的炎性疾病发生。A:EAE组小脑内小
