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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询长春七中蛇床子素的提取方法和含量测定研究作者：张宇洁，贺浪冲， 苗延青， 靖会【关键词】 长春七；,蛇床子素；,反相高效液相色谱法摘要：目的建立草药长春七中蛇床子素的提取方法，对其中蛇床子素的含量进行测定并与蛇床子中蛇床子素的含量进行比较。方法以蛇床子素为指标，用反相高效液相色谱法，色谱柱：Kromasil C18（150 mm4.6 mm,5m） ，流动相：甲醇水（ 7525）, 流速：1ml min 1 ，二级管阵列检测器选定波长：302 nm。系统考察不同溶剂、不同提取方式对蛇床子素提取率的影响，并用正交试验法进一步优选提取条件。用最终
2、确定的条件对蛇床子素的含量进行测定。结果用 6 倍量 80%乙醇回流提取 3 次（1 h/次）的提取方法可以获得较高的蛇床子素提取率。结论溶剂种类和提取方式对长春七中蛇床子素的提取效率有较大影响。关键词：长春七； 蛇床子素； 反相高效液相色谱法精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询Studies on the Extractive Methods and Quantitative Analysis of Osthol from Libanotis buethorimensis Abstract：ObjectiveTo establish an optimal extractive
3、 method of osthol and determine its content in Libanotis buethorimensis, which is compared with that in Cnidium monnieri(L.) Cuss.MethodsRPHPLC method was used for determination of the osthol on the Kromasil C18 column (150 mm4.6 mm,5m) with a mobile phase of methanolwater(7525). The flow rate was 1
4、.0 ml min 1 .The UV detection was at 302 nm with photodiode array detector. The effects of different solvents and extractive models on extraction ratio of the osthol were systematically investigated,and also the orthogonal test was further used to optimum extracting conditions, then determine osthol
5、 by the optimum extracting conditions. ResultsThe extraction rate used the refluent method with 80% alcohol for three times and 1 h each time will be six times as much as that of other methods.Conclusion The solvent kinds and extraction models have great influence upon the extracting efficiency of o
6、sthol.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询Key words：Libanotis buethorimensis； Osthol； RPHPLC 长春七为伞形科岩风属植物长春七 Libanotis buethorimensis的干燥根，是秦巴山区特有的草药，性温，味辛、甘。 现代中药大辞典 1记载其有祛风散寒、活血止痛的功效。现代药理研究表明，长春七中的中性油和酚酸部分具有镇痛、镇静作用，中性油尚有一定解热和抗关节炎作用。经细胞膜受体色谱模型2筛选，发现长春七中对血管内皮细胞有作用的活性成分是蛇床子素，为此本实验就长春七中蛇床子素的提取方法和含量测定方法进行了研究。长春七化
7、学成分的研究35和蛇床子药材中蛇床子素含量的测定已有文献报道，但未见对长春七活性筛选和其中蛇床子素定量检测的报道。本实验中用不同溶剂、不同提取方法及正交实验法，较为系统地研究了长春七中蛇床子素的提取方法，用高效液相色谱法对长春七药材中蛇床子素的含量进行了测定并与蛇床子药材进行了比较。1 仪器与试药精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询高效液相系统包括：LC10ATvp 色谱泵，SPD10Avp 紫外检测器（日本岛津公司）和 7725i 型进样器（美国 Rheodyne 公司） ；ANASTAR 色谱工作站（中国奥泰科技有限公司） 。蛇床子素对照品（中国药品生物制品检定所） ；长春
8、七药材，蛇床子药材（西安市药材市场） ，经西安交通大学药学院生药教研室鉴定为正品。色谱纯甲醇（美国 Fisher 公司） ，双蒸去离子水（实验室自制） 。2 方法与结果2.1 对照品溶液制备取蛇床子素对照品约 50 mg，精密称定，置于 50 ml 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。置于冰箱（4）内备用。2.2 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（150 mm4.6 mm,5m） ，流动相：甲醇水（7525）, 流速：1 ml min 1 ，检测波长：302 nm。在此条件下测得蛇床子素对照品及长春七,蛇床子总提物的色谱图如图 13 所示。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来
9、我主页查询1.蛇床子素 11 蛇床子素紫外光谱图图 1 蛇床子素标准品（略）1.蛇床子素 12 蛇床子素紫外光谱图图 2 长春七总提取物（略）1.蛇床子素 13 蛇床子素紫外光谱图图 3 蛇床子总提取物（略）2.3 标准曲线分别配制不同浓度的蛇床子素对照品溶液，在上述色谱条件下进行测定，进样量为 10 l。以蛇床子素进样量（X）对峰面积（Y）进行线性拟合，蛇床子素回归方程为：蛇床子素 Y=89 606X918.05，r=0.999 4 结果蛇床子素在 0.55g 范围内精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询线性关系良好。2.4 精密度实验取长春七细粉 0.2 g，精密称定，用 8
10、0%乙醇超声 30 min，放冷定容至 10 ml。离心（10 000 r min 1 ）后过滤，准确吸取滤液 10 l，重复进样 6 次，测定峰面积积分值，蛇床子素的 RSD 为 1.65%。2.5 重现性实验 取同一份长春七药材 5 份，平行进行提取测定，求得蛇床子素的 RSD 为 1.90%。上一页 1 2 下一页2.6 回收率实验准确称取已测知含量的长春七样品粉末 6 份，各 0.1g，分别加入对照品溶液适量，按上述方法处理，依法测定。测得蛇床子素平均回收率为 99.49%，RSD 为 1.93%。2.7 提取溶剂选择取长春七生药，粉碎成细粉，称取 0.2 g，精密称定。分别加入一定体
11、积的 11 种不同溶剂，超声提取 30 min。静置过夜，滤过，定容至 10 ml，离心（10 000 r min 1 ）后过滤，准确吸取滤液 10l，进样分析蛇床子素含量（见表 1） 。结果表明：精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询氯仿和 80%乙醇作溶剂的提取率较高，考虑实际应用的可行性，选择 80%乙醇作为提取溶剂。表 1 不同提取溶剂的实验结果（略）2.8 提取方式选择 取长春七细粉 0.2 g，精密称定，用 80%乙醇作为溶剂，分别用不同的提取方式进行提取，滤过 ，定容至 10 ml。离心（10 000 r min 1 ）后过滤，准确吸取滤液 10 l，进样分析蛇床子
12、素的含量（见表 2） 。结果表明，超声和 80%乙醇加热回流 2 h，蛇床子素的提取率较高，因此在含量测定中可选择超声法，但在工艺研究中选择回流方式。表 2 不同提取方法的实验结果（略）2.9 正交实验 表 1 的结果表明 80%的乙醇回流提取率较高，因此，取长春七细粉 20 g，采用 3 因素 3 水平正交实验法对提取溶剂倍量、回流时间、回流次数进行试验研究（表 3） 。将提取液定容至500 ml，用 HPLC 法测定溶液中蛇床子素含量，计算其提取率（见表精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询4） 。表 3 因素水平（略）表 4 正交实验表（L9（34） ） （略）2.10 方
13、差分析将正交实验结果（表 4）用 SAS 软件进行方差分析。结果见表 5。以蛇床子素含量（%）为考察指标，由表 4 中极差R 值大小显示，蛇床子素各因素作用主次为 ACB；方差分析结果表明：A 因素的影响具有显著性意义，以 A2B3C2 组合为佳，即用 6倍量 80%乙醇加热回流 3 次，1 h /次。表 5 蛇床子素方差分析（略）2.11 含量测定取不同批长春七药材 3 份，蛇床子药材 2 份，平行进行提取测定，进样分析蛇床子素含量（见表 6） 。精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询表 6 长春七中蛇床子素的含量测定结果 （略）3 讨论3.1 用 RPHPLC 法测定长春七中
14、蛇床子素的准确度和灵敏度较高，实验操作相对简单，适用于本文的研究。另外，虽然蛇床子素为亲脂性化合物，但由表 1 可见，用极性较小的溶剂提取长春七药材时，只有氯仿的提取率较高，其他溶剂蛇床子素提取不完全，随提取溶剂极性增加，用甲醇和乙醇提取时，蛇床子素的提取率较高。综合考虑提取溶剂的实际应用价值选用 80%乙醇为提取溶剂，在此提取体系中，由于水介质对长春七药材的溶胀作用，有利于极性溶剂的渗入和溶出，从而提高了长春七中蛇床子素的亲脂性成分提取率。同时，在对四种提取方式进行比较研究中发现用 80%乙醇加热回流提取，其实用性、时效性均可满足要求。3.2 陕西秦巴山区天然药用植物资源丰富，有许多特有的药
15、用品种值得深入研究和开发。细胞膜色谱法（cell membrane chromatography, CMC） 2是一种新的生物亲和色谱方法，被分析精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询成分如果与特定的细胞膜受体有特异性结合6 ，则可在 CMC 模型中反映出来，将 CMC 模型与药效实验相结合的活性成分筛选技术已用于天然植物和中药物质基础的研究之中7,8 。本实验中报道的蛇床子素即是用血管内皮 CMC 模型筛选出长春七药材中对肿瘤生长有抑制作用的有效成分。相较先提取分离，再逐一进行药效实验以确定有效成分的传统天然药物化学筛选有效成分的方法来说，CMC模型的应用对加快发现药用植物中的
16、有效成分具有实际意义。参考文献：1 孙立人，洪 恂，丁绪亮，等. 中药大辞典M.北京：人民卫生出版社，2001：361.2 贺浪冲，耿信笃. 细胞膜受体色谱法研究药物与受体作用的新方法J.生物医药色谱新近展，1996，3:8.3 王长岱，郭建文，陈 驹，等. 长春七化学成分研究J.植物学报，1983，25(2):153.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询4 王长岱，陈 驹. 长春七化学成分研究再报J.植物学报，1986，28(2):192.5 王长岱，陈 驹. 长春七化学的成分研究()-一种新色原酮的结构测定J.西北药学杂志，1988，3(2):18.6 Tsukida K,Yoneshing M. Studies on the constituent of Polygonaceous plants. .constituents of Ko-jo
