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1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询花背蟾蜍血清蛋白成分的电泳分析作者：李延清,刘长海，徐世才，乔文兰，翟小强,于彬 【关键词】 花背蟾蜍；血清蛋白质；电泳【关键词】 花背蟾蜍；血清蛋白质；电泳0 引言花背蟾蜍（Bufo raddei）为两栖纲动物，具有强心利尿,解毒清热的作用，对一些恶性肿瘤也有明显抑制效果，抗癌总有效率达931. 有关蟾蜍血清蛋白质成分的研究见于何士敏等1和刘建强等2. 我们对陕西花背蟾蜍血清蛋白质的成分进行了分析，为进一步开发这种药用动物资源提供了理论依据.1 材料和方法精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询1.1 材料采于西安渭河滩蟾蜍，将
2、其洗净，用探针捣毁其脑组织及脊髓，打开胸腔，采心脏新鲜血（每只可抽出 1 mL 左右） ，立即注入小型离心管内静置 2 h 后进行离心（4000 r/min，15 min） ，吸取上面黄色血清备用.1.2 方法参照醋酸纤维薄膜电泳法3. 用氨基黑 10B 染色液染色 10 min,然后用漂洗液漂洗 3 次，每次 5 min，即可在薄膜上出现清晰的谱带. 选取谱带多而清晰的薄膜量取膜上各条带的泳动距离，然后放在清水中进行照相. 拍照后，对入选膜进行定量测定，即将薄膜上的各个蛋白带剪下，分别放入 9 支试管中，同时在相应膜上剪下大小相同的无蛋白区的薄膜放入第 10 支试管中作为空白对照. 然后向各
3、管加入 NaOH 溶液（0.4 mol/L） 4 mL，在 37条件下水浴 30 min 后浸泡 12 h，在 722 型分光光度计 620 nm 处比色，记录 A620 nm 值. 根据各蛋白区带的 A620 值计算其相对含量. 各种蛋白质的相对含量等于其 A620 nm 值占蟾蜍血清蛋白 A620 nm 总值的百分比. 泳动度按 U=dL/Vt 公式计算4 ，式中 d 为电泳图谱中各条带的泳动距离，L 为支持物的有效长度,V 为 110 V，t 为 7200 s.精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询2 结果2.1 血清蛋白质电泳分析花背蟾蜍经醋酸纤维薄膜电泳分离出 9条谱带
4、，即该血清含有 9 种蛋白质，在清蛋白区有 4 种，在球蛋白区有 5 种，从正极端开始，依次为：2 清蛋白,1 清蛋白,2 清蛋白，1 清蛋白, 球蛋白, 球蛋白, 球蛋白, 球蛋白, 球蛋白. 9 种蛋白质的分类及编号参照常规的人血清蛋白质电泳图中各种蛋白质的名称编号得来，各蛋白带的泳动度(表 1).上一页 1 2 下一页2.2 花背蟾蜍血清蛋白质相对含量从蟾蜍血清中分离出 9 条蛋白质谱带的吸光度总和 A 总=0.342. 其中，5 种球蛋白的吸光度总和 A 球=0.133，4 种清蛋白的光密度总和 A 清=0.209，球蛋白和清蛋白的比例为 11.56，蟾蜍血清中各种蛋白质占血清总蛋白质
5、的百分含量(表 1).表 1 蟾蜍血清中各蛋白的泳动度（略）3 讨论精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询我们研究表明，陕西花背蟾蜍的血清蛋白质经醋酸纤维薄膜电泳分离出的 9 种蛋白质的泳动度和相对含量与青海和东北蟾蜍血清蛋白质的电泳分析存在异同，相同之处在于：1,2,3,4 条带（清蛋白）和 5,6,7,8,9,条带（球蛋白）呈集团性分布，两区之间有明显的蛋白空白区. 前 4 种蛋白质的等电点都较小，偏离缓冲液的 pH 8.6 较远，故带负电荷较多，泳动度较快，属于清蛋白. 后 5 种蛋白质的等电点都较大，偏离缓冲液的 pH 8.6 较近，故带负电荷较少，泳动度较慢，属于球蛋白
6、. 清蛋白质的泳动度大于球蛋白质不同的是，经染色后观察，清蛋白区中有 3 条带比较浓，相对含量都比较高，所有的蛋白带中， 与 的含量之比接近 11， 与 的含量之比也接近 1：1. 球蛋白区的中间一条带较浓，含量较高（17.3） ，球蛋白区的 球蛋白较淡，含量最低（4.5）. 清蛋白区的 1 清蛋白较淡，含量较低（6.6） ，而 2 清蛋白较浓，含量最高（24.6）. 生活在西安花背蟾蜍的血清蛋白质的种类与青海和东北蟾蜍血清蛋白质的种类相同，但其相对含量和泳动度与其他二者均不相同，这为三地蟾蜍在药用资源上是否可以替代提供了一个可参考的依据.另外，我们制作了一支点样笔，经试验，效果理想. 点样时
7、应将精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询薄膜表面多余的缓冲液吸去，以免缓冲液太多引起样品扩散，但不能吸的太干，太干样品不易进入薄膜的网孔，造成电泳起始点参差不齐，影响分离效果. 而且点样量不能过大，否则易拖尾，分离效果不好. 取样完成后，应该立即进行电泳，实验效果好，使用冷藏后的样品电泳分离后，得到的条带模糊不清实验效果明显降低. 洗脱时要放在 37水浴中浸提 30 min,每隔 10 min 充分摇动 1 次，以便将色泽完全洗脱下来，然后在常温下浸泡 12 h，测定各管 A620 nm 值4.【参考文献】1 何士敏, 王鑫. 东北蟾蜍血清蛋白质成分初步分析J. 生物科技, 2000,10(2):43-45.2 刘建强, 孟青妹. 青海蟾蜍血清蛋白质成分的电泳分析J.中国兽医科技, 2003,3(10):64-65.3 林加涵, 魏文玲, 彭宣宪. 现代生物学实验下册M.北精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询京: 高等教育出版社, 2001：41-44.4 王秀奇, 秦淑媛, 高天慧, 等. 基础生物化学实验M.北京: 高等教育出版社, 2004:52-53,143.上一页 1 2 下一页
