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1、1p57kip2 和 ki67 在胃癌组织中的表达及临床意义【摘要】 目的： 探讨 p57kip2 和 ki67 在胃癌组织中的表达及临床意义。方法： 采用免疫组织化学 Envision 二步法检测 40 例胃癌组织的 p57kip2 和 ki67 表达水平。结果： p57kip2 和 ki67 在胃癌组织中的阳性表达率分别为 35（1440）和 87.5（3540） ，两者的表达与胃癌组织的病理组织学分级及临床分期有关（P 0.05） ，而与组织学类型无关（P0.05） ；p57kip2 与 ki67表达强度呈负相关，相关系数 r=-0.093（P0.01） 。结论： p57kip2 表达下
2、调及 ki67 表达上调在胃癌的发生、发展过程中发挥着重要的作用。 【关键词】 蛋白质 p53 ki67 抗原 癌 胃 免疫组织化学胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生是多因素、多基因参与的复杂生物学过程。研究发现，p57kip2 具有负性调节细胞增生的生物学功能，可能具有对肿瘤的抑制作用，p57kip2 失活与多种人类恶性肿瘤的发生和进展相关，包括肺癌、肝癌、结肠癌、胆管癌和胰腺癌等。 ki67 广泛表达于增殖期细胞，是评价细胞增殖的较好指标，ki67 表达增殖与多种恶性肿瘤的进展和预后相关。本研究采用免疫组织化学方法检测 p57kip2 和 ki67 在胃癌组织中的表达，探讨其与胃癌的发
3、生及发展的关系。21 材料与方法1.1 研究对象收集病理科 2000-2004 年确诊的 40 例胃癌标本，根据 1999年 WHO 组织学分类标准分为两组：高分化组（乳头状腺癌或管状腺癌）16 例，低分化组（低分化腺癌或未分化癌） 24 例。按照胃癌国际分期期 9 例，期 31 例。所有组织经 10%中性福尔马林溶液固定，常规石蜡包埋切片。1.2 方法1.2.1 主要试剂 鼠抗人 p57kip2 单克隆抗体为 Santa Cruz 美国公司产品,购于福州迈新生物公司; 鼠抗人 ki67 单克隆抗体及Envision 试剂盒为 Dako 丹麦公司产品，购于成都基因公司。1.2.2 免疫组织化学
4、 采用 Envision 二步法，切片脱蜡，高温高压热修复，常规免疫组织化学染色。p57kip2 和 ki67 工作稀释度分别为 1120 和 1140。每批染色均设 PBS 代替一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。阳性细胞判断标准：p57kip2 和 ki67阳性反应均呈棕褐色，颗粒状。p57kip2 主要位于细胞核和细胞浆3中，ki67 只定位于细胞核。每张切片随机选取 5 个高倍视野计数500 个肿瘤细胞，阳性细胞数50%为强阳性、49%30%为阳性、29%10%为弱阳性、10%为阴性。1.2.3 统计学方法 采用 SPSS 11.0 统计软件包中 2 和 Fish 精确概率检验
5、法统计分析数据。2 结果p57kip2 阳性表达 14 例、阳性表达率 35%，ki67 35 例、阳性表达率.% ，两者与临床病理特征关系见表 1。由表 1 可见，p57kip2 和 ki67 表达强度与胃癌组织学类型无关（P0.05） ，而与病理组织分级及临床分期密切相关（P0.05） 。癌细胞分化程度越低、临床分期越高，p57kip2 的表达降低，而表 1 p57kip2 和ki67 的表达与胃癌临床病理特征的关系 ki67 表达则越强。p57kip2与 ki67 呈显著负相关，相关系数为 r=-0.093（P0.01） 。3 讨论细胞周期调节失控是细胞过度增殖及癌变的重要原因，细胞周期
6、蛋白依赖性激酶（cyclindependent kinase,CDKS）参与调控G1 S 期及 G2M 期转换，是细胞周期转换的关键物质，CDK 抑4制蛋白因子（CDK inhibitors,CDKIS）是 CDK 的负性调控因子，CDKIS 依其结构和功能特点分为 INK4 家族和 cip/kip 家族，p57就是 cip/kip 家族中的一员，对细胞周期进行负调控。p57 基因定位于染色体 11.5 上的 D11S648 和 D11S679 之间约 2.2 kb 的区域中1,2, p57 蛋白通过抑制 CDK 复合物的功能来实现其调控作用，它主要抑制 CyclinECDK2、CyclinA
7、CDK2 和 CyclinDCDK2等 G1 期和 S 期激酶复合物，使细胞周期无法完成由 G1 期和 S 期的转变，使细胞停滞于 G1 期，从而起到对细胞周期的负调控作用。正常情况下，p57kip2 基因为父源基因印记，母源基因表达。文献报道肺癌患者存在 p57kip2 母源基因缺失，导致印记缺失，父源基因表达，提示 p57kip2 存在基因印记缺失（loss of imprinting, LOI）3。 p57kip2、 p21waf1 cip1 和 p27kip2 同属 cip/kip 家族, 研究证实胃癌患者 p21、 p27 蛋白表达下调，提示 p21、 p27基因参与胃癌的发生，其中
8、 p27kip2 表达下调可能与泛素蛋白水解酶复合体活性升高有关。肿瘤的发生、发展和转移是一个多基因参与的过程，抑癌基因的失活、癌基因的激活、蛋白的过度表达及失表达等均是肿瘤发生发展的重要机制。人体多种肿瘤存在 p57kip2 蛋白表达的下调与缺失，在大肠癌、卵巢癌、甲状腺癌、肝癌及膀胱癌等恶性肿瘤中均有报道48 。Shin 等9用 RTPCR 法对 30 例胃癌及正常胃黏膜组织中 p57 mRNA 进行研究发现，与正常胃黏膜组织相比，在胃癌细胞中 p57 mRNA 的表达显著降低（P0.05 ） 。Ito 等10通过对 905例肝细胞癌患者的调查表明，p57kip2 表达的高低程度与肝细胞癌
9、的分化程度存在显著相关性（P0.05） 。这些结果揭示 p57kip2 在胃癌、肝细胞癌和胰腺癌中有着相似的生物学行为，与癌组织分化程度及临床分期有显著相关性，而且 Red 等通过研究证实，p57 阳性表达的细胞绝大部分为终末期分化的细胞，说明 p57kip2 可能参与了癌细胞分化的过程，并在细胞周期转化的过程中起了调节作用。本研究发现，p57kip2 与胃癌的分化程度有关。p57kip2 的阳性表达率在临床期及低分化胃癌组织中显著低于临床期及高分化胃癌组，提示 p57kip2 可能是胃癌发生的负性调控因子，可能与 LOI 和泛素蛋白水解酶复合体活性异常相关，胃癌中 p57kip2表达降低的机
10、制仍有待于进一步的研究。编码 ki67 的人类基因定位与第 10 号染色体的长臂上， ki67 蛋白由相对分子质量为 358 761 Da 和 319 508 Da 的 2 条多肽链组成，由 2 个相连接的 9 768 bp 和 8 686 bp 的 mRNA 所编码。ki67 的研究多用于判断肿瘤的良、恶性及恶性程度，也用于探讨细胞增殖活性、细胞周期与肿瘤的生长方式、浸润方式、复发及转移等生物学行为与预后的关系。ki67 广泛表达于增殖期细胞，而不表达于静止期细胞，是评估细胞增殖的较好指标。Czyzewska 等11研究证实 ki67 表达与肿瘤的分化程度、Lauren 分型、淋巴结转移等明
11、显相关，与年龄、肿瘤部位无关。本研究中的临床病理分析表明，ki67 高表达与胃癌的肿瘤细胞分化程度、临床分期呈显著性相6关（P0.05） 。结果显示 p57kip2 和 ki67 的表达呈负相关，表明在胃癌中，p57kip2 有抑制细胞增殖作用，是细胞增殖负性调节因子，ki67 是反映胃癌进展的一个重要指标,是细胞增殖的正性调节因子。【参考文献】1Matsuoka S, Edwards MC ,Bai C ,et al. p57kip2 a structurally distinct member of the p21cip1 CDK inhibitor family, is a candic
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