（新编）荆半夏的悬浮培养

生物工程学院实验报告姓 名：谢应松 学 号：2012307040202 专 业：生物制药技术 课程名称：《植物细胞学》指导教师： 李先良 成 绩： 实验题目：荆半夏的悬浮培养㈠ 实验目的1、 掌握悬浮培养技术2、掌握无菌植物的获得步骤㈡实验仪器与试剂实验器材：超净工作台、光照培养箱、刻度烧杯（1000ml） 、小烧杯若干、量筒（1000ml 、50ml） 、容量瓶（500mL 、250mL） 、棕色试剂瓶（500mL、100mL） 、药勺、玻棒、洗耳球、洗瓶、电炉、不锈钢镊子、剪刀、解剖刀、酒精灯、无菌吸水纸、一次性手套、记号笔、标签纸，滴管、电子天平（感量为 0.0001g） 、一般天平（感量为 0.1g） 、高压灭菌锅、pH 计（pH 试纸） ，三角烧瓶（100mL） 、称量纸、 试 剂： 荆半夏、NAA、2,4-D、6-BA、琼脂、蔗糖㈢实验原理半夏是一种重要的中药材，具有镇痛、抗生育、抗肿癌、提高记忆之活性，具有很好的发展前景。生物碱在半夏的药理活性中具有重要的作用。半夏生物碱的积累和提取显得至关重要，细胞悬浮培养是一个好的选择。㈣实验步骤1、 无菌外植体的获得从田间采挖直径 0.5～1.0cm 的半夏块茎,在流水中冲洗干净,剥去表皮,置于超净工作台上用体积分数 70%酒精表面消毒30s,再用体积分数 0.1%HgCl2 溶液消毒 15min,无菌水冲洗6～7 次,切成 0.5cm×0.5cm×0.5cm 的小块 ,然后将其接入含0.2mg/L2,42D 和 3.0mg/L62BA 的 MS 培养基中,于光照培养箱中,培养 1～2 个月后诱导形成半夏植株。2、 培养基的配制：(1)MS+0.2mg/LNAA+0.5mg/L6-BA;(2)MS+0.2mg/LNAA+1.0mg/L6-BA;(3)MS+0.2mg/LNAA+2.0mg/L6-BA;(4)MS+0.5mg/LNAA+0.5mg/L6-BA;(5)MS+0.5mg/LNAA+1.0mg/L6-BA;(6)MS+0.5mg/LNAA+2.0mg/L6-BA。3、 接种接种完后，贴上标签，注明姓名、接种日期、培养基名称和培养材料名称。整理、清洁超净工作台台面。 4、 培养㈤实验结论 根据小块茎在固体培养基上的增殖情况,选用添加 0.6mg/L6-BA 的 1/2MS 液体培养基进行小块茎的液体悬浮培养。在此培养基中,未分化的小块茎不断生长出许多二级、三级小块茎。在一个培养周期内,小块茎的生长进程，转入液体培养基的第 1 周,小块茎的生长量几乎没有变化,此时为培养的延滞期;到培养的第 2 周,小块茎生长量有少量增加,从刚开始接种的 30.00g/L 增加到了 30.38g/L;第 2 周以后,小块茎进入了快速生长期,到第 5 周末,生长量已达到120.56g/L,是初始接种的 4.02 倍;培养至第 6 周,小块茎增长变缓,而此时其颜色已开始变褐,培养基浑浊,表明小块茎已进入生长衰退期。