《心肌缺血再灌注时Gsα和Giα蛋白含量mRNA水平变化及意义-2016年最新医学论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《心肌缺血再灌注时Gsα和Giα蛋白含量mRNA水平变化及意义-2016年最新医学论文（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询心肌缺血再灌注时 Gs 和 Gi 蛋白含量 mRNA 水平变化及意义【关键词】 心肌缺血Changes and significance of levels of Gs and Gi and their mRNA in myocardium undergoing ischemic reperfusion【Abstract】 AIM: To study the changes of the levels of subunits of stimulatory (Gs) and inhibitory (Gi) guanine nucleotideb
2、inding protein and their mRNA in newborn guineapig myocardium undergoing global ischemic reperfusion and to explore the relation between these changes and cardiac functions. METHODS: Thirty newborn guineapigs were randomly assigned to three groups (n=10 in each group) and isolated perfused working h
3、eart models were established. The newborn hearts suffered global ischemia alone for 90 min in group, arrested by St. Thomas Hospital cardioplegic solution simultaneously in group and arrested by cold blood cardioplegia simultaneously in group . All the hearts were reperfused for 60 min. Cardiac 精品文档
4、欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询functions and the levels of Gs and Gi and their mRNA were investigated. RESULTS: The cardiac functions were markedly deteriorated in group and group during reperfusion (P 0.01), whereas no pronounced changes of cardiac functions were found at the end of reperfusion in group (P
5、0.05). Significant decreases of the levels of Gs and its mRNA (P 0.01) and notable increases of levels of Gi and its mRNA (P 0.01) were found in group and group after ischemia and after reperfusion when compared with those before ischemia and in group , but recovery to the levels of Gs and Gi and th
6、eir mRNA before ischemia was achieved in group after reperfusion (P 0.05 vs before ischemia). CONCLUSION: Ischemic reperfusion injury of immature guinea pig myocardium may result from the unbalance between Gs and Gi.【Keywords】 myocardial ischemia; myocardial reperfusion injury; GTPbinding proteins;
7、cardioplegic solutions; guineapigs精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询【摘要】 目的：研究新生豚鼠心肌缺血再灌注时 Gs 和 Gi蛋白含量及其 mRNA 水平的变化以及与心功能变化的关系. 方法： 30 只新生豚鼠随机分为 3 组（每组 n=10） ，建立离体心脏左心做功模型. 组： 离体心脏缺血 90 min；组：缺血时予 Thomas 号液；组：缺血时予冷血心停搏液. 各组均再灌注 60 min. 检测心功能指标，Gs 和 Gi 蛋白含量及其 mRNA 水平的变化. 结果： 组和组在再灌注时的心功能明显受损（P 0.01） ，组在再灌注结束
8、时无明显变化（P 0.05）. 组和组在缺血后和再灌注后Gs 蛋白含量分别为缺血前的 37.5%, 40.3%, 36.6%和39.5%，Gs mRNA 水平分别为缺血前的 38.6%, 41.4%, 35.7%和40.1%，明显降低(P 0.01)；Gi 蛋白含量分别为缺血前的 198.1%, 175.4%, 201.3%, 181.4%，Gi2 mRNA 水平分别为缺血前的 215.4%, 180.2%, 210.3%和 176.2%，显著升高(P 0.01). 组在再灌注后Gs 和 Gi 蛋白含量及其 mRNA 恢复至缺血前的水平（P 0.05）. 结论： Gs 和 Gi 蛋白的平衡遭受
9、破坏可能是未成熟心肌缺血再灌注损伤发生的机制之一. 【关键词】 心肌缺血；心肌再灌注损伤；GTP 结合蛋白质类；心麻痹液；豚鼠精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询0 引言鸟嘌呤核苷酸偶联蛋白(G 蛋白)在细胞信号转导过程中起着“电话交换机(switchboard)样”作用1 ，与心脏病理生理过程密切相关2. 对心肌缺血再灌注过程中 G 蛋白变化的研究有益于增强对心肌缺血再灌注损伤的认识，是一值得探讨的课题. 有关未成熟心肌缺血再灌注时兴奋性鸟核苷藕联蛋白 亚基(Gs)和抑制性蛋白 亚基(Gi)蛋白含量的变化及其 mRNA 水平的变化鲜见研究报道3 ，我们拟以新生豚鼠为研究对象，
10、利用离体工作心脏模型，运用 Western 印迹分析和 Northern 印迹分析等方法对此进行研究. 1 材料和方法1.1 材料 实验分组和模型：02 d 龄新生豚鼠，雌雄不拘，体质量5080 g. 实验随机分为 3 组（每组 n=10）. 建立离体心脏顺灌左心做功模型4： 取豚鼠心脏,将主动脉断端套于主动脉插管上，精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询行 Langendorff 逆灌，灌注液为 KH 液，心脏复跳. 行左房插管,停止逆灌，经左房顺行灌注. 停止顺灌，组（低温组）于 20全心缺血 90 min，组(Thomas 组)和组（冷血组）在缺血开始、第30 min 和第
11、 60 min 时经主动脉分别逆灌 10 Thomas 号液和冷血心停搏液. 之后，三组均给予 37氧合 KH 液逆灌，使心脏复跳，尔后再灌 60 min. 抗体和 cDNA 探针 RM/1Gs 蛋白多克隆抗体和AS/7 Gi 蛋白多克隆抗体（美国 NEN 公司） ；大鼠 Gs 和 Gi2 cDNA 探针（美国 NEN 公司） ，长度分别为 1737 bp 和 1748 bp. 1.2 方法 1.2.1 心功能指标测定在缺血前和再灌注 15， 30， 45 和 60 min 时，将左心室测压管连接于 MPAIV 型多导生物信号分析系统（第二军医大学生理学教研室研制） ，测定各组左室收缩峰压（L
12、VPSP） 、左室舒张末压（LVEDP） 、左室内压正负相最大变化速率（dp/dtmax） 、心输出量（CO）. 1.2.2Western 印迹分析将冷冻心肌组织置于 4预冷的含 1 mol/L MgCl2， 25 mol/L 三（羟甲基）氨甲烷/盐酸（Tris/HCl） ，精品文档欢迎来主页查询更多精品文档,欢迎来我主页查询0.4 mol/L 甲苯磺酰氟（ PMASF， Sigma 公司）和 1 mol/L 二硫苏糖醇（DTT）的心肌匀浆液中，匀浆制备膜蛋白，-70贮存备用. 120 g/L 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE） ，每一样品上样 75 g，以电转移的方式转移至硝酸纤维素膜上. 将膜封闭后，与抗 Gs（按滴度 11000）和抗 Gi（按滴度 11000）反应 1 h，洗去抗体后将膜置于 1500 的碱性磷酸酶标记的 IgG 中反应 1 h，Tris 缓冲盐溶液（TBS）充分洗涤，以 NBT（氮蓝四唑）+BCIP（5 溴 4 氯 3 吲哚磷酸）显色，最后摄片记录. 上一页 1 2 下一页
