《化学生物学导论-第三章核酸4-5节ppt课件[精选]》由会员分享，可在线阅读，更多相关《化学生物学导论-第三章核酸4-5节ppt课件[精选]（40页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第三章核酸NucleicAcid王骊丽第四节核酸碱基序列顺序分析(Sequenceanalysisofnucleicacids)仰DNA碱基顺序的测定伟RNA碱基顺序的测定DNA碱基顺序测定的基本步骤伟DNA片断的制备伟DNA碱基顺序测定DNA片断的制备由于DNA的分子量很大,需要先将DNA分子切割或能够用于测定的小片段,共包括部分:余DNA分子酶解:将相对分子量质量大的片断用限制性内切酶技术完成,使切割成能够用于测定的小片段(300-500bp);伟PCR技术扩增DNA片段:DNA片段数量少的情况下,以获取一定数量用于序列测定。返回核酸序列分析NucleicAcidSequenceAnaly
2、sis化学降解法(Maxam-Gillbert法,1977)经典方法如肺氧链终止法(sanger法,1977)杂交测序法新技术方法“质谱法卑分子测序法原子探针显微镜测序法么DNA芯片法一、以化学裂解反应为基础一化学降解法基本原理:基于有机化学方法,选择性地切断核苷酸(A、G、C或T所形成的磷酸二醉键,得到不同链长的DNA小片段;将这些片段经电泳分离;分析前,用同位素标记DNA的5未端,经放射自显影即可在X胶片上读出DNA链的序列。主要两个步骤:碱基选择性水解;对水解产物DNA小片段进行电泳分析和碱基顺序的推断。特异性碱基化学切割反应(U。硫酸二甲酯(DMS):使DNA分子中嘌呤碱基选择性水解,
3、分别得到两种嘌呤碱基的甲基化产物:Ns-甲基腺嘌呤核苷和Nyr-甲基鸟嘌呤核苷;“肼:使DNA分子中嘧啶碱选择性水解,胸腺嘧啶(CT和胞噬智(CC的喜商环断裂,生成核糖腺衍生物;再在哌啶存在下水解,核糖胎3“-位的磷酸酯键则被水解断裂;但高盐条件下,只C断裂,而不与T反应。哌商:从修饰甲基处断裂核苷酸链。在不同的酸、碱、高盐和低盐条件下,三种化学试剂按不同组合可以特异地切割核芒酸序列qP特定的碱基。特异性碱基化学切割反应(2)G反应:DMS使G在中性和高温条件下胺落。G+A反应:酸性条件(如甲酸)可使A和G嗜呤环上的N原子质子化,利用哑啶使A、G脱落。T+C反应:肱(低盐)C反应:肼(高盐)测
4、定DNA长度250bp。化学裂解法测定DNA的核苷酸序列多HO-GATCOGACCT#EE5syATcGaaccT3l锦能口“帖维口和人“借饲下和C娶怀Cl1psnE标坂桐脚“GArcocAcc叮xpcArcacnCGxpCArccGA四wpanrcaG四aFoATCG回ApoArc匹xpoAL囚spoA口l中匹口衮示智腔倩眼张及郭洁余罪院二、以使用DNA聚合酶为基础-DNA链未端终止法基本原理:以DNA的酶促合成为基础,以被测DNA单链为模板,通过特殊设计的“末端终止技术合成出一系列相差一个核芭酸长度的互补链,然后利用凝胶电泳分离这些不同长度的DNA小片段,以此推测确定待测DNA链的碱基顺序。主要步骤包括:末端终止法合成不同长度DNA小片段;DNA小片段电泳图谱解析。
