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1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体新课标要求1简述动物细胞培养的过程、条件及应用。2简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。3举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用。教学重点（1）动物细胞培养的过程及条件。（2）用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。（3）单克隆抗体的制备和应用。教学难点（1） 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。（2） 单克隆抗体的制备过程。教学方法 诱思法、分析法、归纳法。教学工具多媒体教学课件课时安排 2课时教学过程（一）引入新课 复习动物细胞工程的技术手段，根据2.2.1所学内容提出另两项重要技术手段：动物细胞融合和单克隆抗体。（二）进行新课1动
2、物细胞融合自学并思考植物体细胞杂交和动物细胞融合的区别（学生填下表）植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜的流动性细胞膜的流动性融合过程先除去细胞壁先使细胞分散开诱导方法电激、振动、离心、聚乙二醇电激、灭活的病毒、聚乙二醇结果杂种植株杂交细胞应用培育植物新品种主要用于制备单克隆抗体意义突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离。相同点原生质体融合原理相同；原生质体融合的方法相似提问两者的主要区别是什么？（1）动物细胞融合不需要去除细胞壁；（2）动物细胞融合常使用灭活的病毒，而植物细胞融合不用；（3）植物杂交细胞可以培养成杂种植株，而动物杂交细胞则不可。思考为什么可以使用灭活的病毒促进动物细
3、胞融合？灭活的病毒可以使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。两个不同的动物细胞放在一起，用灭活的病毒处理细胞后，它们就先质融合，再核融合，进而形成杂交细胞，这个细胞有丝分裂后仍能形成两个完整的杂交细胞。过渡动物细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段，特别是利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。2单克隆抗体2.1单克隆抗体制备的原理问题常规抗体制备的方法及特点？传统的抗体生产方法是向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需要的抗体。这种生产抗体的方法产量和纯度都很低，而且制备
4、的抗体特异性差。问题填写课件内容： 利用B淋巴细胞产生特异性抗体的功能。 利用骨髓瘤细胞无限增殖的特性。 利用动物细胞融合技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞。 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞。2.2单克隆抗体制备的过程注入小鼠细胞融合分离抗原注入小鼠体内B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养选择培养细胞培养基体内培养体外培养从腹水提取从培养液提取单克隆抗体讲解单克隆抗体制备的过程问题如何获得B淋巴细胞和骨髓瘤细胞？要得到能产生所需抗体的B淋巴细胞，必须对小鼠进行免疫处理，即给小鼠皮下或脾内注射特定的抗原，为保证B淋巴细胞的数量和质量，往往需要进行初次免疫、二次免疫和加强免疫，然后取免疫小
5、鼠的脾获得B淋巴细胞。骨髓瘤细胞应与免疫小鼠属于同一品系，这样杂交融合率高，并且应选择处于对数生长期、活性强的细胞。问题 选择杂交瘤细胞的两步筛选的目的各是什么？第一步筛选的目的是获得杂交瘤细胞。原因是B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合后用聚乙二醇处理诱导融合，这样处理后的细胞中有以下五种：未融合的B淋巴细胞、未融合的骨髓瘤细胞、B淋巴细胞与B淋巴细胞的融合细胞、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的细胞，其中只有B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的融合细胞才是我们需要的杂种细胞。筛选的方法是在特定的选择性培养基（HAT选择培养基）中培养，由于骨髓瘤细胞缺乏胸苷激酶或次黄嘌呤核糖转移酶，故
6、不能生长繁殖，而融合的杂种细胞具有上述两种酶故可以生长，由此可筛选出杂交瘤细胞。第二步筛选的目的是获得能产生所需单一抗体的杂交瘤细胞。因为小鼠体内的B淋巴细胞有很多种，因此获得的杂交瘤细胞可能产生不同的抗体，需要从中筛选出能产生我们所需的单一抗体的杂交瘤细胞，筛选的方法是专一抗体检验。问题如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那么上清液可与特
7、定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。2.3单克隆抗体的应用学生自学，归纳单克隆抗体的应用。（1）可用于作为诊断试剂：有准确，高效，快速的优点（2）可用于疾病治疗（3）可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的“生物导弹”）问题生物导弹的组成及优点组成：“生物导弹”单克隆抗体药物放射性同位素优点：疗效高、毒副作用小。动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合单克隆抗体概念基本原理意义制备过程概念：单一的B淋巴细胞产生的特异性抗体应用（三）课堂总结资
8、料袋神奇的人造皮肤医生从冰箱里取出人造皮肤，将它贴在病人受损的皮肤上，就能成功治愈溃疡、烧伤等疾病，这不是科幻大片里的场景，而是事实。“人造皮肤临床治疗非常简单，只需要在患处贴上人造皮肤就行了。”国家863计划“组织器官工程重大专项组织工程皮肤”首席科学家、解放军第四军医大学组织工程研发中心主任金岩教授介绍说，人造皮肤的正式名称是组织工程皮肤，在工厂制成并包装好，放在普通冰箱里保存(最长可以保存一个半月)，在需要时再取出来直接贴在病人患处就行。人造皮肤的生产原料主要来自手术切除后以及其他废弃的健康人体皮肤组织。它不仅具有正常人类皮肤的功能，而且具有良好的修复作用。河北一位年轻患者患糖尿病引发足
9、部深度溃疡，因无法医治而要“锯脚”时，在医院贴上一块人造皮肤后，10天后伤口开始愈合，50天就痊愈。据介绍，目前人造皮肤已经在临床试验中取得成功，北京304医院等4家医院对160例皮肤移植、皮肤溃疡，以及由糖尿病和肿瘤导致的深度皮肤溃疡病例进行了临床治疗，全部取得成功。经过对患者至少半年时间的跟踪调查表明，没有发现术后复发、免疫排斥等现象。目前我国有350多万名各类患者需要移植皮肤，但以往多数是采用自身皮肤移植，这种方法不仅造成新的创伤和疤痕，而且皮肤来源有限。而采用人造皮肤则不必担心：一块只有米粒大小的皮肤组织，经过培育可以生产出一个足球场大小的人造皮肤。胚胎干细胞1,3,5干细胞就是在生命的成长和发育中起“主干”作用的细胞，主要包括三大类，分别是全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。其中最有价值的是全能干细胞。它具有形成完整个体的分化潜能，可以无限增殖并分化成为全身200多种细胞类型，从而可以进一步形成人体的任何组织器官，最终发育成一个完整的人。胚胎干细胞就属于此类，并被称为“万能细胞”，它的应用研究已被列为国际自然科学六大研究热点之一，而且由于在医学和生物学上具有巨大的潜力，而备受各国的高度重视.用人类细胞克隆胚胎的技术在英国是合法的，但美国正在考虑禁止它。联合国最近推迟了就关于何种克隆技术可以被允许的国际公约的表决。- 5 -
