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1、不同生存期喉癌患者的18F第 1 章 喉癌的研究现状1.1 引言喉癌占全身恶性肿瘤 5.7%-7.6%，是耳鼻咽喉头颈外科常见的恶性肿瘤之一，东北、华北及华东地区发病率较高，其病理类型 90%以鳞状细胞癌为主1；近年来其发病率每年增加约 25%2,3。吸烟与酗酒被认为是喉癌的主要发病因素，其中，吸烟与其关系更加密切5；而HPV（人乳头状瘤病毒）感染是另一主要发病原因：喉癌中 HPV 总阳性率约为 8%54%；HPV 阳性肿瘤患者较 HPV 阴性者，有着独特的生物学特点。另外，反流性黏膜慢性炎性反应也是肿瘤发生的因素之一；粉尘、化学溶剂等也与其发病密切相关。喉癌预后不但与肿瘤临床分期相关，还包括
2、肿瘤细胞分化程度，相关调控基因蛋白表达水平等多种情况。手术及放化疗目前仍是本病的主要治疗方式，虽然手术及放化疗手段不断提高，患者仍然承受着丧失功能的痛苦，而且近年来发现肿瘤复发，转移及放化疗不耐受等情况造成患者生存时间没有明显延长，故此寻找新的有效治疗手段是需要解决的问题8。恶性肿瘤的发生发展是正常细胞在内外各种环境的作用下发生基因突变或表达异常，随后演变成生长失控的异常细胞集合体，是一个极其复杂过程。近几年，喉癌研究主要集中在病因及机制上，为其分子靶向治疗找到了新的突破口。.1.2 喉癌相关基因研究目前对恶性肿瘤病因研究已经深入到基因水平，并发现由于基因种类及其表达的变化，严重影响肿瘤发生发
3、展治疗及预后。原癌基因通常不表达或低表达，在某种情况下表达增高，发生恶性肿瘤；抑癌基因存在于正常细胞中，在某种情况下被激活后具备抑制细胞增殖的能力，但其被抑制或丢失后其抑制肿瘤作用被减弱或者消失。研究发现，多重基因参与喉癌的发生发展，影响其预后，目前研究较为广泛的基因有 p53、EGFR、VEGF、ras、COX-2、c-mic、cyclin D1 及 bcl-2等基因。本文将目前研究较为深入的基因进展作一综述。.第 2 章 喉癌患者18F-FDG PET/CT SUVmax 值与 SET8 蛋白表达的相关性研究喉癌占全身恶性肿瘤 5.7%-7.6%，是耳鼻咽喉头颈外科常见的恶性肿瘤之一，东北
4、、华北及华东地区发病率较高，其病理类型 90%以鳞状细胞癌为主1；近年来其发病率逐年增加 25%2,3。以手术为主放化疗为辅的综合治疗是喉癌的主要治疗方式，虽然早期喉癌手术治疗后期 5 年生存率可达到 84%以上，但患者不得不承受丧失器官功能及终生携带气管套管的痛苦；而晚期患者 5 年生存率不足 40%，患者不但要承受上述痛苦，其肿瘤复发，转移，放疗不敏感，化疗耐药等诸多情况严重影响其生存期，总 5 年生存率仅为 64%8。本课题组经过多年的功能影像及分子影像的研究，发现传统的早发现，早治疗已经不能够满足目前疾病发展现状，随着功能影像及分子影像4技术在恶性肿瘤的诊疗中的发展，我们应寻找更为精确
5、敏感的诊断方法，根据敏感精确的诊断，为喉癌患者提供既能够保证喉的发音功能，提高生存质量，又能够提高肿瘤患者生存期的有效精准治疗手段，这是我们亟待解决的问题。2.1 材料与方法2.1.1 主要仪器试剂超净工作台（Thermo 1384 美国）；二氧化碳培养箱(Thermo3111 美国)；培养瓶、培养皿、6 孔板、12 孔板、24 孔板（Corning 美国 ）；生物安全柜：1384 型（Thermo 美国）；全自动颗粒/细胞分析仪：Z2（BECKMAN 美国）；多功能酶标仪：Infinite M 200 pro 型（TECAN 瑞士）；低速台式离心机：TDL-60B 型（安徽科学仪器厂）；显微
6、镜：IX51 型（日本 OLYMPUS 公司）；倒置显微镜（Leica DM IL LED 德国）；电子天平：AL204 型，（美国 METTLER TOLEDO）；高速冷冻离心机（Biofuge stratos，美国 Thermo 公司）；试管翻转混合器（QB-210 型，海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；多功能酶标仪（Synergy HT，美国 BioTek 公司）；恒温水浴箱（Model DK-8D 型，上海森信实验仪器有限公司）；脱色摇床（TS-200 型，海门市其林贝尔仪器制造有限公司）；.2.2 结果2.2.1 一般临床资料及特征我院耳鼻喉科确诊为喉癌拟行手术患者 25 例，其中男
7、 21 例，女4 例，平均年龄 59.6 岁，术前均未接受放、化疗及靶向治疗，行18F-FDGPET/CT 检查后患者行手术治疗，术后所有病例病理类型均为鳞状细胞癌，并留取癌旁组织（10 例）作为对照组, 并按照肿瘤细胞分化程度进行病理学分级：高分化鳞状细胞癌 G1,中分化鳞状细胞癌 G2及低分化鳞状细胞癌 G3；其中 G1 期患者 8 人，G2 期患者 9 人，G3期患者 8 人。声门上型 14 例（占 56%），声门型 10 例（占 40%），声门下型 1 例（占 4%）。临床分期：I 期 3 例，II 期 10 例，III 期5 例，IV 期 7 例。其治疗及随访结果见表 2.1-2 并
8、通过相关性分析可见：SUVmax、SET8 蛋白表达、野生型 p53 蛋白表达均与患者性别、年龄、原发部位、治疗方式无明显关系，而与临床分期及病理分级相关，统计有差异（P0.05），SUVmax、SET8 呈正相关，而与野生型p53 负相关。.第 3 章 SET8 基因对喉癌生长、侵袭及转移的影响.453.1 实验对象.453.2 实验方法.463.3 结果. 573.3.1 shRNA 对 TU212 细胞 SET8 蛋白表达的作用.573.3.2 下调 SETD8 对喉癌细胞增殖能力影响.573.3.3 下调 SET8 对细胞迁移的影响-划痕实验.573.3.4 SET8 对细胞凋亡的影响
9、-流式细胞术检测下调 SETD8 对TU212 细胞凋亡的影响.583.3.5 下调 SETD8 后 p53 在 TU212 细胞系内表达水平变化.583.4 讨论. 653.5 结论. 693.4 讨论喉癌治疗主要困难是肿瘤的恶性生物学行为，主要包括肿瘤细胞过度增殖、细胞侵袭能力增强及抑制凋亡等，因而，寻找喉癌治疗中的有效控制靶点，能够为喉癌治疗提供新的方法。SET8 基因蛋白表达产物是能够特异性单甲基化组蛋白 H4 赖氨酸20 位的赖氨酸甲基转移酶50,51,54，存在于细胞染色体中52，能够影响基因转录、调节复制起点、调控细胞周期等，这一特征提示其可能参与恶性肿瘤的形成53。我们通过构建
10、稳定的 SET8 基因下调的 TU212 喉癌细胞系，并经过一系列的细胞功能实验，来验证 SET8 在喉癌细胞增殖，迁移，凋亡等功能的调控作用，进而推测其在肿瘤发生发展的作用。在划痕实验中，与正常 TU212 喉癌细胞系相比，下调 SET8 基因表达后的喉癌细胞 TU212 的迁移能力明显下降，表明 SET8 基因在喉癌细胞侵袭能力上起到了促进作用；在细胞增殖实验中，下调后的 shSET8-TU212细胞增殖能力明显降低，S 期细胞百分率从 1.81 降低至 0.77，减少SET8 表达会影响 DNA 复制导致 S 期阻滞92。说明 SET8 基因能够促进喉癌细胞增殖，而肿瘤细胞的异常增殖也是
11、肿瘤发生发展的重要因素，表明了该基因在肿瘤发生及发展的促进作用。.结论本研究临床资料中观察到术前喉癌肿瘤18F-FDG PET/CT SUVmax 与术后病理 SET8 蛋白表达的关系，以及二者对生存期的影响，从细胞模型实验中分析 SET8 在喉癌发生发展侵袭及转移的影响得出如下结论：1. SET8 可作为患者术后对于肿瘤预后的评估指标，其蛋白高表达提示喉癌预后较差；2. SET8 基因通过调控喉癌细胞的增殖、迁移、侵袭及细胞凋亡而影响喉癌的转归；3. SET8 蛋白表达与 SUVmax 值密切相关，SUVmax 可以作为患者术前预测肿瘤预后的有效指标，高 SUVmax 值提示喉癌预后不良。.参考文献（略）
